Original title:
Rekombinantní exprese receptoru myších NK buněk NKR-P1C
Translated title:
Recombinant expression of the mouse NK cell receptor NKR-P1C
Authors:
Rudenko, Anastassiya ; Vaněk, Ondřej (advisor) ; Čermáková, Michaela (referee) Document type: Bachelor's theses
Year:
2022
Language:
cze Abstract:
[cze][eng] NK buňky (z angl. Natural Killers) představují buňky stojící v první řadě obrany organismu proti různým nebezpečím, jakými jsou například viry nebo rakovinné buňky. NK buňky mají schopnost rozpoznat a zničit nežádoucí buňky několika různými způsoby, které se hodně liší od obranných mechanismů například u T- nebo B-lymfocytů. NK buňky nesou na svém povrchu širokou škálu různých aktivačních a inhibičních receptorů, pomocí kterých dokážou rozlišit zdravé buňky od škodlivých, či infikovaných buněk. NKR-P1 (z angl. natural killer receptor-protein 1) je první objevená rodina NK buněčných receptorů podobných lektinům C-typu, do které patří jak aktivační, tak inhibiční receptory. NKR-P1C je aktivační receptor, který je schopen tvorby homodimerů na povrchu NK buněk. Hlavními ligandy NKR-P1 rodiny receptorů jsou imunoenvasiny myšího cytomegaloviru a jiné molekuly strukturně odlišné od MHC glykoproteinů I. třídy. Tato práce se zabývá rekombinantní expresí receptorového proteinu NKR-P1C. Pomocí plazmidu pUT7 byla systémem PiggiyBac připravena stabilně transfekovaná linie buněk HEK293T nesoucí gen pro expresi extracelulární části NKR-P1C spojenou s Fc fragmentem IgG, které mezi sebou nesou zásahovou sekvenci pro štěpení TEV proteasou. Protein byl purifikován pomocí afinitní a gelové permeační chromatografie a...NK cells are at the forefront of the body's defense against various threats, such as viruses or cancer cells. NK cells can recognize and destroy harmful cells in several ways that are very different from the defense mechanisms of, for example, T- or B-lymphocytes. NK cells carry a wide range of activating and inhibitory receptors on their surface that distinguish healthy cells from harmful or infected cells. NKR-P1 (natural killer receptor-protein 1) is the first discovered family of NK cell receptors similar to C-type lectins, which includes both activating and inhibitory receptors. NKR-P1C is an activating receptor capable of forming homodimers on the surface of NK cells. The major ligands of the NKR-P1 receptor family are the immunoenvasins of murine cytomegalovirus and other molecules structurally distinct from MHC class I glycoproteins. This work focuses on the recombinant expression of the NKR-P1C receptor protein. Using the pUT7 plasmid, we prepared a stably transfected HEK293T cell line carrying the gene for expression of the extracellular domain of NKR-P1C fused to the Fc fragment of IgG using the PiggiyBac system, and between them, they carry the TEV protease cleavage site. The protein was purified by affinity and gel permeation chromatography, and its purity was subsequently verified by...
Keywords:
HEK293T; NK cells; NKR-P1C; HEK293T; NK buňky; NKR-P1C
Institution: Charles University Faculties (theses)
(web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository. Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/177012