Název:
Štúdium možností elektrochemickej detekcie špecifických sekvencií nukleových kyselín
Autoři:
Vaňová, Veronika Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok:
2019
Jazyk:
slo
Abstrakt: [cze][eng] Tato práce se zabývá studiem možností vytvoření elektrochemického biosenzoru pro detekci specifických sekvencí nukleových kyselin. Teoretická část se věnuje popisu různých typů RNA, se speciálním zaměřením na miRNA a možnostmi její detekce. Rovněž popisuje různé elektrochemické přístupy detekce, jednak nukleových kyselin a také konkrétnější miRNA. miRNA je potenciální biomarker, který by se dal využít pro včasnou a neinvazivní diagnostiku onkologických onemocnění. Experimentální část je zaměřena na navržení, optimalizaci a přípravu citlivého biosenzory pro detekci miRNA-21. Byl připraven biosenzor pro detekci co nejnižší koncentrace miRNA-21 ve vzorku. Byl změřen lineární rozsah koncentraci pro kalibrační křivku od 1 nM až po 1 fM koncentraci. Měřením jsme dosáhli LOD 1 fM a výpočtem z regresní rovnice až 3,2 zM a LOQ byl 10,8 zM. Následně byly měřeny vzorky v artificiálni moči, jako ověření fungování senzoru v reálných podmínkách. Výsledky ukázaly minimální vliv matrice na stanovení cílové miRNA.This work deals with the study of the possibility of creating an electrochemical biosensor for the detection of specific nucleic acid sequences. The theoretical part describes various types of RNA, with a special focus on miRNAs and possibilities of its detection. It also describes various electrochemical detection approaches, both nucleic acids, and more specifically miRNAs. miRNA is a potential biomarker that can be used for early and non-invasive diagnosis of cancer. The experimental part is aimed at designing, optimizing and preparing a sensitive biosensor for the detection of miRNA-21. A biosensor was prepared to detect the lowest concentration of miRNA-21 in the sample. A linear concentration range for the calibration curve from 1 nM to 1 µM concentration was measured. We measured LOD of 1 fM and by calculation from the regression equation to 3.2 zM and LOQ was 10.8 zM. Subsequently, samples were measured in artificial urine to verify the functioning of the sensor in real conditions. The results showed a minimal effect of the matrix on the determination of the target miRNA.
Klíčová slova:
elektrochemická detekce; miRNA; nukleové kyseliny