Original title: Vývoj UHPLC-MS/MS screeningové metody pro analýzu benzodiazepinů ve vzorcích moči
Translated title: Development of UHPLC-MS/MS screening method for the determination of benzodiazepines in urine samples
Authors: Havelková, Lucie ; Bosáková, Zuzana (advisor) ; Kozlík, Petr (referee)
Document type: Master’s theses
Year: 2018
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
Cílem této diplomové práce byl vývoj screeningové metody pro analýzu 17 benzodiazepinů ve vzorcích moči pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie s tandemovou hmotnostní detekcí (UHPLC-MS/MS). Dílčím úkolem bylo optimalizovat podmínky enzymatické hydrolýzy glukuronidů benzodiazepinů v moči s využitím metody plánování experimentů (DOE). Optimalizovaný chromatografický systém se skládal z kolony Zorbax Eclipse Plus Phenyl-Hexyl RRHD (100 × 2,1 mm, 1,8 μm), dvousložkové mobilní fáze tvořené vodou s 0,1% obsahem octové kyseliny (složka A) a acetonitrilem s 0,1% obsahem octové kyseliny (složka B) v různém poměru dle gradientového programu. Průtok činil 0,2 ml/min, teplota kolony byla 40 řC. Celková doba analýzy činila 12 min. Za optimalizovaných podmínek byly proměřeny kalibrační křivky všech analytů v methanolu i v moči. Byly nalezeny optimální detekční podmínky pro oxazepam-glukuronid, který byl v rámci pilotního experimentu hydrolyzován za použití β-glukuronidasy z ušně, čímž byla potvrzena funkčnost enzymu. Optimalizace podmínek enzymatické hydrolýzy prostřednictvím 27 experimentů vygenerovaných programem Minitab 16 podle Box-Behnken design bude realizována později. The aim of this diploma thesis was the development of a screening method for analysis of 17 benzodiazepines in urine samples using ultra high-performance liquid chromatography with tandem mass spectrometric detection. The partial task was to optimize the conditions for the enzymatic hydrolysis of benzodiazepine glucuronides present in urine using design of experiments (DOE). The optimized chromatographic system consisted of a Zorbax Eclipse Plus Phenyl-Hexyl RRHD column (100 × 2.1 mm, 1.8 μm) and mobile phase consisting of water with 0.1 % acetic acid (component A) and acetonitrile with 0.1 % acetic acid (component B) in various ratios according to the gradient program. Flow rate was 0.2 ml/min, column temperature was 40 řC, and total analysis time was 12 min. Calibration curves for all analytes were measured under optimized conditions in methanol and urine. After optimal detection conditions for oxazepam-glucuronide were found, oxazepam glucuronide was hydrolysed using β-glucuronidase from the abalone to confirm the functionality of the enzyme within the pilot experiment. Optimization of enzymatic hydrolysis conditions via 27 experiments proposed by program Minitab 16 using the Box-Behnken design will be realized later.
Keywords: benzodiazepines; design of experiments; enzymatic hydrolysis of glucuronides; MS; optimization; UHPLC-MS; urine samples; benzodiazepiny; enzymatická hydrolýza glukuronidů; experimentální design; MS; optimalizace; UHPLC-MS; vzorky moči

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/102164

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-388365


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Master’s theses