Original title: Úloha membránového cholesterolu v signalizaci delta-opioidního receptoru Korelace se strukturou plazmatické membrány
Translated title: The role of membrane cholesterol in delta-opioid receptor signaling Correlation with plasma membrane structure
Authors: Brejchová, Jana ; Svoboda, Petr (advisor) ; Novotný, Jiří (referee) ; Teisinger, Jan (referee)
Document type: Doctoral theses
Year: 2014
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
Studium buněk linie HEK293 stabilně exprimujících fúzní protein mezi opioidním receptorem typu delta (δ-OR) a mutantou Gi1α proteinu necitlivou vůči působení pertussis toxinu, δ-OR-Gi1α (Cys351 -Ile351 ), poskytlo následující výsledky. Snížení obsahu (deplece) cholesterolu v plazmatické membráně s pomocí cyklického oligosacharidu β-cyklodextrinu nezměnila vazbu specifického agonisty δ-OR, [3 H]DADLE. Ovlivněn nebyl ani celkový počet vazebných míst, ani afinita vazby [3 H]DADLE na receptor. Deplece cholesterolu však narušila schopnost δ-OR aktivovat trimerní G proteiny. Hodnota EC50 agonistou stimulované vazby [35 S]GTPγS se zvýšila o jeden řád. Tento účinek byl pozorován jak v případě kontrolních buněk, tak v případě buněk vystavených účinku pertussis toxinu. To znamená, že deplece cholesterolu významně snížila účinnost funkčního spřažení nejen mezi δ-OR a endogenními G proteiny třídy Gi/Go, které jsou citlivé k působení pertussis toxinu, ale rovněž mezi δ-OR a kovalentně připojeným Gi1α (Cys351 -Ile351 ) proteinem. Nezměněný obsah cholesterolu v plazmatické membráně je tedy důležitou podmínkou správné funkce δ-OR. Stanovení vlivu deplece cholesterolu na funkční aktivitu δ-OR bylo podpořeno analýzou změn biofyzikálních vlastností plazmatické membrány s pomocí fluorescenčních membránových sond,... Study of HEK293 cells stably expressing fusion protein between delta opioid receptor (δ-OR) and pertussis toxin-insensitive mutant of Gi1α protein, δ-OR-Gi1α (Cys351 -Ile351 ), provided the following results. Decrease of plasma membrane cholesterol content (cholesterol depletion) induced by cyclic oligosaccharide β-cyclodextrin did not affect binding of specific δ-OR agonist, [3 H]DADLE. Neither the maximum number of binding sites nor the affinity of [3 H]DADLE binding was changed by cholesterol depletion. However, the ability of δ-OR to activate cognate trimeric G proteins was impaired. EC50 value of agonist-stimulated [35 S]GTPγS binding was an order of magnitude higher. This effect was observed in case of both control and pertussis toxin-treated cells. It means that cholesterol depletion markedly reduced the efficiency of functional coupling of δ-OR to endogenously expressed pertussis toxin-sensitive G proteins of Gi/Go family as well as covalently bound Gi1α (Cys351 -Ile351 ) protein. Unchanged plasma membrane cholesterol content is therefore important requirement for proper δ-OR function. Detection of the effect of cholesterol depletion on the functional activity of δ-OR was supported by the analysis of changes in biophysical state of plasma membrane using fluorescent membrane probes,...
Keywords: cholesterol; delta-opioid receptor; fluorescent membrane probes; internalization; plasma membrane; signaling; cholesterol; delta-opioidní receptor; internalizace; membránové fluorescenční sondy; plazmatická membrána; signalizace

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/69321

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-338451


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Doctoral theses