Original title: Enantioseparace vybraných FMOC-derivatizovaných aminokyselin na kolonách Chirobiotic T a Chiralpak QD-AX.
Translated title: Enantioseparation of selected FMOC-derivatized amino acids on Chirobiotic T a Chiralpak QD-AX columns.
Authors: Kašpárková, Marie ; Bosáková, Zuzana (advisor) ; Pacáková, Věra (referee)
Document type: Master’s theses
Year: 2015
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
V této práci byla vyvíjena a následně optimalizována enantioselektivní HPLC metoda s fluorimetrickou detekcí (λEx = 254 nm, λEm = 314 nm) pro chirální separaci čtyř aminokyselin (D/L-alanin, D/L-valin, D/L-leucin, D/L-isoleucin) v derivatizované podobě s důrazem na enantioseparaci D-analogů. Derivatizace aminokyselin byla provedena pomocí 9-fluorenylmethylchloromravenčanu (FMOC-Cl). Retenční a enantioseparační chování studovaných analytů bylo sledováno na chirálních stacionárních fázích založených na bázi teikoplaninu (Chirobiotic T) a chinidinového derivátu (Chiralpak QD-AX). Na koloně Chirobiotic T byly provedeny enantioseparace derivatizovaných aminokyselin za použití polárně-organického separačního módu. Na koloně Chiralpak QD-AX byly provedeny enantioseparace derivatizovaných aminokyselin za použití reverzního a polárně-organického separačního módu. Bylo provedno vzájemné porovnání kolon Chirobiotic T a Chiralpak QD-AX. Jako nejvhodnější se pro separaci FMOC-derivatizované směsi aminokyselin jevila kolona Chiralpak QD-AX v polárně-organickém separačním módu (methanol/acetonitril/octová kyselina/octan amonný 80/18/2/0,1 (v/v/v/w)). Za optimalizovaných podmínek byla provedena kvantifikace FMOC-D- a FMOC-L-enantiomerů jednotlivě i ve směsi. Limity detekce se pohybovaly v rozmezí 15,1 - 31,5 ng/ml... In this work, an enantioselective HPLC method with fluorimetric detection (λEx = 254 nm, λEm = 314 nm) was developed and subsequently optimized for chiral separation of four amino acids (D/L-alanine, D/L-valine, D/L-leucine, D/L-isoleucine) in derivatized form with an emphasis on enantioseparation of D-analogues. Derivatization of amino acids was performed using 9-fluorenylmethyl chloroformate (FMOC-Cl). Retention and enantioseparation behavior of studied analytes was investigated on chiral stationary phases based on teicoplanin (Chirobiotic T) and quinidine derivative (Chiralpak QD-AX). Enantioseparation of FMOC-derivatized amino acids was performed in polar- organic separation mode on Chirobiotic T and in reverse-phase and polar-organic separation modes on Chiralpak QD-AX. Both columns were mutually compared. The Chiralpak QD-AX column in combination with polar-organic separation mode (methanol/acetonitrile/acetic acid/ammonium acetate 80/18/2/0.1 (v/v/v/w)) was shown to be the most suitable for separation of mixture of FMOC-amino acids. Under the optimized conditions quantitation of the individual FMOC-D- and FMOC-L-enantiomers, as well as a mixture of FMOC-D- and FMOC-L- enantiomers was performed. Limits of detection ranged from 15.1 to 31.3 ng/ml for FMOC-D-amino acids and from 27.7 to 48.8...

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/62612

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-331761


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Master’s theses