Original title: Produkce heterologních proteinů v rostlinách se zaměřením na antigeny odvozené od lidského papillomaviru (HPV 16)
Translated title: Production of heterologous proteins in plants - human papillomavirus (HPV 16) derived antigens
Authors: Folwarczna, Jitka ; Čeřovská, Noemi (advisor) ; Ryšánek, Pavel (referee) ; Kumar, Jiban (referee)
Document type: Doctoral theses
Year: 2013
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
6 Abstrakt Infekce lidskými papillomaviry (HPV) je zejména v rozvojových zemích stále velkým problémem. Přestože jsou proti HPV komerčně dostupné profylaktické vakcíny, je jejich využití ekonomicky náročné a neřeší problém již infikovaných osob. Proto se vyvíjí další úsilí vedoucí ke vzniku terapeutických vakcín a zároveň se hledají postupy vedoucí ke snížení produkční ceny profylaktických vakcín. Virové proteiny, jako například E7 onkoprotein a L2 kapsidový protein z HPV typu 16, patří mezi slibné kandidáty pro přípravu experimentálních vakcín proti HPV. V předkládané práci jsme optimalizovali expresi mutovaného E7 onkoproteinu (E7ggg) připojeného k C-konci kapsidového proteinu (CP) Viru tabákové mozaiky (TMV) nebo X viru bramboru (PVX). Byl sledován vliv linkerů spojujících CP a E7ggg na expresi a stabilitu fúzních proteinů. Fúzní proteiny byly nejprve produkovány v bakteriích Escherichia coli (E. coli) MC1061 a poté v netransgenních i transgenních rostlinách Nicotiana benthamiana (N. benthamiana). Protože se fúzní proteiny obsahující TMV CP připravené v E. coli produkovaly v nerozpustné podobě, byl pro zvýšení podílu rozpustných proteinů testován vliv molekulárních chaperonů (Trigger faktoru (TF), DnaK-DnaJ-GrpE, GroEL- GroES). L2108-120 epitop připojený k C-konci PVX CP byl produkován v... 5 Abstract Even though prophylactic vaccine against human papillomavirus (HPV) is currently licensed, infections by the virus continue to be the major health problem mainly in developing countries. Considerable effort is being devoted to preparation of therapeutic vaccine and to decrease of the production costs of current vaccine. Viral proteins such as the E7 oncoprotein and the L2 capsid protein from HPV type 16 are promising targets for the development of the experimental anti-HPV vaccine. The aim of our work was optimization of expression of mutagenized E7 oncoprotein (E7ggg) fused to the C-terminus of Tobacco mosaic virus (TMV) coat protein (CP) or Potato virus X (PVX) CP in viral vectors derived from these plant viruses. The impact of linkers connecting CP and E7ggg fusion partners on expression and stability of fusion proteins was examined. The fusion proteins were first expressed in Escherichia coli (E. coli) MC1061 to assess the characteristics of the recombinant protein prior to their transient expression in both non-transgenic or transgenic Nicotiana benthamiana (N. benthamiana). We have obtained the high level expression in E. coli, but most of the expressed proteins based on TMV CP remained in insoluble inclusion bodies. To increase the ratio of soluble protein various molecular...
Keywords: bacterial expression; HPV E7 oncoprotein; HPV L2108-120 epitope; human papillomovirus (HPV); transient expression in plants; bakteriální exprese; HPV E7 onkoprotein; HPV L2108-120 epitop; lidský papillomavirus (HPV); transientní exprese v rostlinách

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/53288

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-322588


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Doctoral theses