Original title: Charakterizace enzymového reaktoru s imobilizovanou alkalickou fosfatázou
Translated title: Characterization of enzyme reactor with immobilized alkaline phosphatase
Authors: Plecitá, Denisa ; Kučerová, Zdenka (advisor) ; Miarková, Eva (referee)
Document type: Bachelor's theses
Year: 2012
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
Fosforylace patří mezi jednu z nejdůležitějších post-translačních modifikací proteinů. Studium procesu fosforylace a defosforylace je velice důležité, neboť abnormální fosforylace proteinů souvisí s řadou vážných onemocnění lidí. Jedním z metod identifikace míst fosforylace proteinů je porovnání hmotnostních spekter vzorku před a po defosforylaci fosfatázou. Využití imobilizovaných forem fosfatáz má oproti volným formám řadu výhod, např. možnost opakovaného použití a zvýšení stability enzymu po imobilizaci. Cílem této bakalářské práce bylo charakterizovat vlastnosti enzymového reaktoru - imobilizované hovězí alkalické fosfatázy ze sliznice střeva. Alkalická fosfatáza byla imobilizována přes své volné aminoskupiny na magnetické částice obalené celulózou aktivovanou divinylsulfonem. Při stanovení aktivity byl používán jako substrát p- nitrofenylfosfát. Byl porovnán vliv pH a koncentrace Mg2+ iontů na aktivitu volné a imobilizované alkalické fosfatázy. Dále byla sledována skladovací a teplotní stabilita obou forem enzymu a možnost opakovaného využití imobilizované fosfatázy. Klíčová slova:  enzymový reaktor  vlastnosti alkalické fosfatázy  magnetické částice  imobilizace enzymů  defosforylace Phosphorylation is one of the most common of all post-translational modifications of proteins and has been found in nearly all cellular processes. Abnormal phosphorylation is associated with many serious human diseases. One of the approaches used for the identification of protein phosphorylation sites is based on the application phosphatases and the comparison of MS analysis of samples before and after the sample treatment with the enzyme. The use of phosphatase immobilized to magnetic carriers is advantageous in comparison with the application of soluble enzyme: e.g. easy manipulation of samples, an increase of enzyme stability and a possibility of repeated use of immobilized enzyme. Investigation of properties of enzyme reactor - bovine alkaline phosphatase from intestinal mucosa immobilized to magnetic particles is a subject of this Bachelor Thesis. The enzyme was coupled to cellulose magnetic particles after activation with divinyl sulfone via the protein free amino groups. p-Nitrophenylphosphate was used as a substrate for the phosphatase activity determination. The effect of different conditions on the activity of soluble and immobilized forms of alkaline phosphatase was compared: the effect of pH and Mg2+ ions, storage stability and thermostability and possibility of repeated use of the...
Keywords: dephosphorylation; enzyme reactor; immobilization of enzymes; magnetic particles; properties of alkaline phosphatase; defosforylace; enzymový reaktor; imobilizace enzymů; magnetické částice; vlastnosti alkalické fosfatázy

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/43372

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-307670


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Bachelor's theses