Original title: Klonování a charakterizace vybraných forminů II. třídy
Translated title: Cloning and characterisation of selected Class II formins
Authors: Stillerová, Lenka ; Cvrčková, Fatima (advisor) ; Rösel, Daniel (referee)
Document type: Master’s theses
Year: 2012
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
Forminy jsou proteiny, které se účastní regulací a výstavby aktinových vláken eukaryotních organismů. Tím se řadí mezi proteiny, které regulují cytokinezi a polarizovaný růst, a tak ovlivňují i vývoj celého organismu. U Arabidopsis thaliana se forminy dělí na 2 třídy. FH1 a FH2 domény (formin homology 1 a 2) jsou přítomny u forminů obou tříd. I. třída se liší od II. třídy přítomností N-koncové transmembránové domény. Některé forminy II. třídy mají na N-konci PTEN doménu (Phosphatase and Tensin Homolog). Její sekvenční analýza naznačila, že by se mohla vázat na membrány skrze fosfatázovou nebo C2 subdoménu. V této práci jsem se zaměřila na formin AtFH14, v první řadě na jeho PTEN doménu. Na základě predikované sekvence jsem klonovala úsek DNA kódující tuto doménu, sekvenčně jsem jej ověřila a zaklonovovala do vektoru pro fúzi s YFP a EOS. Takto značený protein jsem vizualizovala metodou tranzientní exprese v listech Nicotiana benthamiana a připravila jsem transformované rostliny Arabidopsis thaliana pro stabilní expresi značeného proteinu. Ten byl lokalizován v kortikální cytoplazmě, cytoplazmatických provazcích, pravděpodobně na jaderné membráně nebo kolem jádra. Nejpozoruhodnější byly "měchýřkovité" útvary, které mohly být způsobeny vazbou PTEN na membránu některé buněčné organely. Taktéž byly pozorovány... Formins are proteins involved in regulation and construction of actin filaments of eucaryotic organism. They parcipitate in regulating cytokinesis, polar tip growth, and thus participate in development of whole organisms. There are 2 classes of formins in Arabidopsis thaliana. Both classes include FH1 and FH2 domains (formin homology 1 a 2). Class I formins have N-terminal transmembrane domain, unlike class II formins. Some formins of class II have a N-terminal PTEN domain (Phosphatase and Tensin Homolog). Sequence analyses predicted membrane binding via phosphatase or C2 subdomain of PTEN. This thesis was focused on the formin AtFH14, specifically its PTEN domain. Based on predicted sequence, a DNA fragment encoding the PTEN domain was amplified, sequenced and cloned to destination vectors for YFP and EOS phusions. Marked protein was visualized by transient expression in Nicotiana benthamiana. Stably transformed Arabidopsis lines were prepared for stably expression of protein. The tagged protein was localized in cortical cytoplasm, cytoplasmatical strands, probably in nuclear membrane or perinuclear cytoplasm, as well as in peculiar "folicle-like" structures that might be due to binding of PTEN at the periphery of some membrane organelles. Also were seen filament structures, maybe caused by PTEN binding...
Keywords: actin; Arabidopsis thaliana; formin; Golgi apparatus; PTEN; Yellow fluorescent protein; aktin; Arabidopsis thaliana; formin; Golgiho aparát; PTEN; Yellow fluorescent protein

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/41463

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-305763


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Master’s theses