Original title:
Exprese a charakterizace rekombinantního proteinu kapsidy HIV: cesta k inhibici skládání virové částice
Translated title:
Expression and characterization of recombinant capsid protein from HIV and its mutants: towards inhibition of virus assembly
Authors:
Sivá, Monika ; Konvalinka, Jan (advisor) ; Maloy Řezáčová, Pavlína (referee) Document type: Bachelor's theses
Year:
2011
Language:
eng Abstract:
[eng][cze] Human immunodeficiency virus infection has been a threat to the world for the last thirty years. It causes a condition called acquired immunodeficiency syndrome leading to complete collapse of immune system and death if not treated. There are many anti-HIV drugs that are part of the combined antiretroviral treatment but they only slow down the progress of the infection. Although the success of all the 31 antiviral agents is remarkable, the cure is not efficient enough. The research of potencial new HIV drugs is now focusing on new targets of viral inhibition. The capsid protein is a potential target of virion assembly and maturation inhibitors due to its multimerization features. The N-terminal domains of six capsid proteins create hexamers. These are connected to each other by dimers of the C-terminal domains according to X-ray and NMR studies. There are inhibitors that bind to the C-terminal domain, alter its conformation and weaken the protein-protein interaction of the dimer. Protein calorimetry is a method that could detect and quantify protein-protein interactions and thus capsid protein dimerization and its inhibition. We expressed and purified recombinant wild-type capsid protein and its C-terminal domain that both dimerize in solution and crystals. Their dimerization constant was determined by...Virus HIV je pro svět hrozbou již třicet let. Způsobuje syndrom získaného selhání imunity (AIDS), při kterém je infikovaný jedinec náchylný k nádorovým onemocněním a život ohrožujícím infekcím. Součástí kombinované antiretrovirové terapie je mnoho léčiv potlačujících množení viru HIV. Ta však pouze zpomalují průběh onemocnění. Protože zatím nebyla objevena žádná dostatečně efektivní léčba, odborníci neustále hledají nové cíle terapeutického zásahu včetně možnosti virus z těla zcela vymýtit. Díky svým multimerizačním vlastnostem je kapsidový protein HIV potenciálním cílem pro inhibici skládání infekční virové částice. N-terminální doména šesti kapsidových proteinů vytváří hexamery a pentametry. Díky proteinové krystalografii a na základě NMR měření víme, že jsou k sobě vázané dimery C-terminální domény. Existují inhibitory, které se vážou na C-terminální doménu, pozměňují její konformaci a mohou tak ovlivnit protein-proteinové interakce dimeru. Tento efekt lze popsat několika metodami, například proteinovou mikrokalorimetrií. Rekombinantní kapsidový protein tzv. divokého typu a jeho C-terminální doména, jež oba dimerují v roztocích i krystalech, byly připravené v bakteriích a dále vyčištěny. Jejich dimerizační konstanta byla změřená izotermální titrační kalorimetrií. Rekombinantní kapsidový protein a jeho...
Keywords:
recombinant protein expression; site-directed mutagenesis; viral assembly;virostatics; bodová mutageneze; rekombinantní exprese proteinů; skládání virových částic; virostatika;
Institution: Charles University Faculties (theses)
(web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository. Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/38106