Original title: Exprese a charakterizace proteinu Phr2 z Candida albicans
Translated title: Expression and characterization of Phr2 protein of Candida albicans
Authors: Vlčková, Zuzana ; Ing.Zuzana Firáková (referee) ; Kováčová, Kristína (advisor)
Document type: Bachelor's theses
Year: 2014
Language: cze
Publisher: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická
Abstract: [cze] [eng]
Transglykozylázy mají významnou funkci v buněčné stěně kvasinek. Tyto enzymy štěpí molekulu donoru s následným přenesením nově vytvořeného redukujícího konce na neredukující konec molekuly akceptoru. Tím je umožněn růst, rozpínání a tvarování buněčné stěny kvasinek během jejich života. Tato bakalářská práce se zaměřuje na charakteristiku rekombinantního Phr2 proteinu z Candida albicans na úrovni její transglykozylační aktivity. Fluorescenční papírovou metodou byly zjištěny optimální podmínky transglykozylační aktivity Phr2 proteinu, tedy pH optimum a teplotní optimum. Stejná metoda byla využita ke stanovení substrátové a donorové specifity Phr2p která potvrdila výsledky experimentů na úrovni genetiky, tj. vysokou donorovou a i akceptorovou specifitu k -1,3-glukanu. Substrátová specifita byla také měřena pomocí HPLC. Produkty transglykozylační reakce katalyzované Phr2p s laminarinem jako donorem a L5-SR jako akceptorem obsahující fluorescenční značku, byly detekovány pomocí TLC a MALDI-TOF. Transglycosylases have an import function in yeast the cell wall. These enzymes cleave a molecule of donor, which is followed by transferring a newly created reducing end to a non-reducing end of a molecule of an acceptor. This process enables a growth, expansion and shaping of the yeast cell walls during their life. The aim of this Bachelor Thesis is to characterise the role of Phr2 recombinant protein of Candida albicans in a transglycosylase activity. Using fluorescent paper method, optimal pH and optimal temperature of transglycosylase activity of Phr2 protein were found. The same method was used to establish the acceptor and donor specificity of Phr2p was performed as another method for substrate specificity measurement. High donor and acceptor specificity of Phr2 protein to -1,3-glucan was confirmed. HPLC products of transglycosylase reaction catalysed by Phr2p with laminarin as a donor and L5-SR as an acceptor containing a fluorescent marker were detected by TLC and MALDI-TOF.
Keywords: Candida albicans; Phr2 protein; Pichia pastoris; transglycosylases; yeast cell wall; buněčná stěna kvasinek; Candida albicans; Phr2 protein; Pichia pastoris; transglykozylázy

Institution: Brno University of Technology (web)
Document availability information: Fulltext is available in the Brno University of Technology Digital Library.
Original record: http://hdl.handle.net/11012/31284

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-216243


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Brno University of Technology
Academic theses (ETDs) > Bachelor's theses