Original title: Separace a charakterizace atelokolagenu
Translated title: Atelocollagen separation and characterization
Authors: Konečná, Zuzana ; Zubal, Lukáš (referee) ; Vojtová, Lucy (advisor)
Document type: Bachelor's theses
Year: 2014
Language: cze
Publisher: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická
Abstract: [cze] [eng]
Cílem předložené bakalářské práce byla optimalizace separace rozpustného atelokolagenu z komerčně dostupného hovězího kolagenu a jeho následná charakterizace. Kollagen byl podroben enzymatickému trávení pomocí pepsinu a následně přečištěn pomocí filtrace, centrifugace a dialýzy. Získané vzorky byly následně charakterizovány pomocí infračervené spektrometrie, elektroforézy v polyakrylamidovém gelu a Hartree-Lowryho metody pro stanovení celkového obsahu proteinů. Vhodný časový rozsah enzymatického trávení pro získání vyhovujících výtěžků, byl určen na 60 – 70 hodin při hmotnostním poměru pepsinu a kolagenu 1:25. Nejvyšší výtěžek (72.6 %) byl získán při tomto poměru a době reakce 66 hodin. Dostatečné filtrace, která byla pro čistotu produktu klíčová, byla zajištěna kombinací filtračních technik s následnou centrifugací. Kvalita produktů z hlediska molekulových hmotností byla charakterizována pomocí gelové elektroforézy. Rozpustnost a její závislost na pH a koncentraci NaCl v roztoku byla měřena pomocí Hartree – Lowryho metody. Poměr mezi helikálním kolagenem a denaturovaným kolagenem ve vzorku byl měřen pomocí infračervené spektroskopie. Výsledná spektra se však nejevila zcela věrohodná. Jako vhodnější metodu pro zkoumání struktury kolagenu je možné použít například metodu cirkulárního dichroismu. The aim of the presented bachelor thesis was to optimize separation of soluble atelocollagen out of commercially available bovine collagen and its characterization. Collagen went through an enzymatic digestion using pepsin as a protease and subsequently purified by filtration, centrifugation and dialysis. Obtained samples were characterized using infrared spectrometry, polyacrylamide gel electrophoresis and Hartree-Lowry assay for total protein determination. Suitable digestion time range to gain sufficient yields was decided from 60 – 70 hours at pepsin/collagen weight ratio 1:25. Highest yield (72.6 %) was obtained at mentioned ratio after 66 hours of reaction. Sufficient filtration, which was decisive for final product purity, was assured by combination of several filtration techniques with centrifugation. Quality of prepared product according to their molecular weight was characterized by gel electrophoresis. Solubility and its dependence on pH and NaCl concentration in solution were measured by Hartree – Lowry assay. Ratio between helical collagen and denaturated collagen was measured by infrared spectroscopy. Obtained spectra yet did not seem fully reliable and provided only a rough estimate. More accurate information about structure could be achieved by using circular dichroism spectroscopy.
Keywords: atelocollagen; collagen; enzymatic digestion; pepsin; atelokolagen; enzymatické štěpení; kolagen; pepsin

Institution: Brno University of Technology (web)
Document availability information: Fulltext is available in the Brno University of Technology Digital Library.
Original record: http://hdl.handle.net/11012/31484

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-215227


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Brno University of Technology
Academic theses (ETDs) > Bachelor's theses