|
|
Analysis of autenthicity of food products with fruit component
Prachárová, Adriana ; Mikulíková, Renata (oponent) ; Márová, Ivana (vedoucí práce)
The aim of this thesis was to determine the authenticity of fruit food for infants using molecular and instrumental methods. In the experimental part, plant DNA isolations from fruit leaves (peaches, apricots, plums and apples) and bananas were performed. Further, DNA was isolated also from five commercial products, and from model mixtures that were prepared in terms of content identical to the commercial mixtures. The isolated DNA was characterized and verified by qPCR with plant DNA-specific ITS2 primers. Three triple primer pairs were selected, and their specificity was evaluated when performing multiplex PCR. This method makes it possible to detect more types of fruit in one reaction, reducing the economic and time requirements for detection. As none of the selected primer pairs were sufficiently specific for the apricot, the evidence from the plum and peach was further realized using duplex PCR. High resolution melting curve analysis was used for better DNA type recognition. Subsequently, agarose gel electrophoresis was performed to analyse the fragment lengths. Furthermore, experiments have been made to identify some specific phenolic substances in commercial and model fruit mixtures by HPLC. Since phenolic substances are degradable under unsuitable storage conditions, the presence of individual compounds was not detected by this method.
|
|
|
Charakterizace rostlinné složky vybraných potravin pomocí technik molekulární biologie a instrumentálních metod
Tomíšek, Martin ; Němcová, Andrea (oponent) ; Márová, Ivana (vedoucí práce)
Cílem diplomové práce bylo srovnání hodnocení autenticity potravinářských výrobků s ovocnou složkou pomocí instrumentálních a molekulárních metod. Konkrétně byla prokazována přítomnost borůvek ve vybraných komerčně dostupných potravinách. Teoretická část je zaměřena na charakterizaci, chemické složení a botanické zařazení borůvek (borůvka evropská, borůvka kanadská), a na přehled instrumentálních a molekulárně diagnostických metod, které pro analýzu těchto plodů lze použít. Experimentální část se zaměřuje na výběr vhodné metody izolace DNA a vhodných primerů pro molekulární důkaz borůvek v komerčních výrobcích. Analýza DNA byla provedena pomocí metody qPCR a HRM analýzy. DNA byla izolována v dostatečné kvalitě pro PCR a dále byla prokázána přítomnost borůvek u vybraných výrobků metodou qPCR. Pomocí HRM analýzy bylo možné odlišit borůvku evropskou (Vaccinium myrtillus) od borůvky kanadské (Vaccinium corymbosum), jak v kontrolních vzorcích, tak i ve vybraných komerčních výrobcích. Dále byly kapalinovou chromatografií detekovány určité fenolické kyseliny a některé flavonoidy specifické pro borůvky a spektrofotometricky byl stanoven celkový obsah polyfenolů a flavonoidů.
|
|
|
Stanovení autenticity různých typů potravinářských produktů s ovocnou složkou pomocí molekulárních a instrumentálních metod
Pecháček, Michal ; Němcová, Andrea (oponent) ; Márová, Ivana (vedoucí práce)
Diplomová práce byla zaměřena na stanovení autenticity různých typů potravinářských produktů s ovocnou složkou pomocí molekulárních a instrumentálních technik. Práce byla rozdělena na teoretickou a praktickou část. Teoretická část práce byla zaměřena na falšování potravin, metody stanovení autenticity potravin, analyzované druhy nebo technologie výrob jednotlivých potravinářských produktů, které byly v rámci práce analyzovány. Tato část byla rovněž zaměřena na molekulární a instrumentální techniky, které jsou v současnosti využívány právě pro stanovení autenticity potravin. Praktická část diplomové práce byla rozdělena na molekulární a instrumentální část. V rámci molekulární části byla provedena izolace DNA s využitím izolačního kitu EliGene Plant DNA Isolation kit. Největší problém v případě izolace představovaly inhibiční látky, jako jsou polysacharidy. Proto byla v rámci izolace zařazena metoda s využitím inkubace s pektinázou. Vyizolovaná DNA byla následně podrobena PCR, u vzniklých PCR produktů byla pro ITS2 primery, sloužící pro důkaz rostlinné DNA provedena analýza křivek tání. V případě druhově specifických primerů BAS1 a Pa3LTP se kterými bylo pracováno v rámci diplomové práce byly tyto specifické produkty podrobeny vysokorozlišovací analýze křivek tání HRM. U HRM byly sledovány zejména teploty tání specifických produktů, ta byla stanovena na 78,4 °C pro specifický produkt primerů BAS1 a na 86,43 °C pro specifický produkt primerů Pa3LTP. Závěrem byly specifické produkty PCR podrobeny gelové elektroforéze na agarózovém gelu V případě ITS2 primerů, které sloužily pro ověření amplifikovatelnosti rostlinné DNA, byl detekován band o velikosti 500 bp, v případě druhově specifických primerů BAS1 a Pa3LTP pak byly detekovány bandy o velikosti 100-150 bp. V rámci instrumentální části práce pak byla provedena HPLC/PDA analýza fenolických látek. Jako nejvhodnější postup byl pro analýzu fenolických látek zvolen postup s přečištěním pomocí ethanolu bez zakoncentrování. V závěru práce byly porovnány jednotlivé metody mezi sebou. Zároveň byl sledován vliv matrice na celkové stanovení autenticity potravin. Zatímco molekulární techniky by bylo možné využít pro stanovení autenticity potravin tak, že by byla stanovena přítomnost druhové DNA, instrumentální techniky by byly spíše vhodnější pro odhalení falšování potravin a pro detekci specifických látek.
|
|
|
Stanovení autenticity různých typů potravinářských produktů s ovocnou složkou pomocí molekulárních a instrumentálních metod
Pecháček, Michal ; Němcová, Andrea (oponent) ; Márová, Ivana (vedoucí práce)
Diplomová práce byla zaměřena na stanovení autenticity různých typů potravinářských produktů s ovocnou složkou pomocí molekulárních a instrumentálních technik. Práce byla rozdělena na teoretickou a praktickou část. Teoretická část práce byla zaměřena na falšování potravin, metody stanovení autenticity potravin, analyzované druhy nebo technologie výrob jednotlivých potravinářských produktů, které byly v rámci práce analyzovány. Tato část byla rovněž zaměřena na molekulární a instrumentální techniky, které jsou v současnosti využívány právě pro stanovení autenticity potravin. Praktická část diplomové práce byla rozdělena na molekulární a instrumentální část. V rámci molekulární části byla provedena izolace DNA s využitím izolačního kitu EliGene Plant DNA Isolation kit. Největší problém v případě izolace představovaly inhibiční látky, jako jsou polysacharidy. Proto byla v rámci izolace zařazena metoda s využitím inkubace s pektinázou. Vyizolovaná DNA byla následně podrobena PCR, u vzniklých PCR produktů byla pro ITS2 primery, sloužící pro důkaz rostlinné DNA provedena analýza křivek tání. V případě druhově specifických primerů BAS1 a Pa3LTP se kterými bylo pracováno v rámci diplomové práce byly tyto specifické produkty podrobeny vysokorozlišovací analýze křivek tání HRM. U HRM byly sledovány zejména teploty tání specifických produktů, ta byla stanovena na 78,4 °C pro specifický produkt primerů BAS1 a na 86,43 °C pro specifický produkt primerů Pa3LTP. Závěrem byly specifické produkty PCR podrobeny gelové elektroforéze na agarózovém gelu V případě ITS2 primerů, které sloužily pro ověření amplifikovatelnosti rostlinné DNA, byl detekován band o velikosti 500 bp, v případě druhově specifických primerů BAS1 a Pa3LTP pak byly detekovány bandy o velikosti 100-150 bp. V rámci instrumentální části práce pak byla provedena HPLC/PDA analýza fenolických látek. Jako nejvhodnější postup byl pro analýzu fenolických látek zvolen postup s přečištěním pomocí ethanolu bez zakoncentrování. V závěru práce byly porovnány jednotlivé metody mezi sebou. Zároveň byl sledován vliv matrice na celkové stanovení autenticity potravin. Zatímco molekulární techniky by bylo možné využít pro stanovení autenticity potravin tak, že by byla stanovena přítomnost druhové DNA, instrumentální techniky by byly spíše vhodnější pro odhalení falšování potravin a pro detekci specifických látek.
|
|
|
Analysis of autenthicity of food products with fruit component
Prachárová, Adriana ; Mikulíková, Renata (oponent) ; Márová, Ivana (vedoucí práce)
The aim of this thesis was to determine the authenticity of fruit food for infants using molecular and instrumental methods. In the experimental part, plant DNA isolations from fruit leaves (peaches, apricots, plums and apples) and bananas were performed. Further, DNA was isolated also from five commercial products, and from model mixtures that were prepared in terms of content identical to the commercial mixtures. The isolated DNA was characterized and verified by qPCR with plant DNA-specific ITS2 primers. Three triple primer pairs were selected, and their specificity was evaluated when performing multiplex PCR. This method makes it possible to detect more types of fruit in one reaction, reducing the economic and time requirements for detection. As none of the selected primer pairs were sufficiently specific for the apricot, the evidence from the plum and peach was further realized using duplex PCR. High resolution melting curve analysis was used for better DNA type recognition. Subsequently, agarose gel electrophoresis was performed to analyse the fragment lengths. Furthermore, experiments have been made to identify some specific phenolic substances in commercial and model fruit mixtures by HPLC. Since phenolic substances are degradable under unsuitable storage conditions, the presence of individual compounds was not detected by this method.
|
|
|
Charakterizace rostlinné složky vybraných potravin pomocí technik molekulární biologie a instrumentálních metod
Tomíšek, Martin ; Němcová, Andrea (oponent) ; Márová, Ivana (vedoucí práce)
Cílem diplomové práce bylo srovnání hodnocení autenticity potravinářských výrobků s ovocnou složkou pomocí instrumentálních a molekulárních metod. Konkrétně byla prokazována přítomnost borůvek ve vybraných komerčně dostupných potravinách. Teoretická část je zaměřena na charakterizaci, chemické složení a botanické zařazení borůvek (borůvka evropská, borůvka kanadská), a na přehled instrumentálních a molekulárně diagnostických metod, které pro analýzu těchto plodů lze použít. Experimentální část se zaměřuje na výběr vhodné metody izolace DNA a vhodných primerů pro molekulární důkaz borůvek v komerčních výrobcích. Analýza DNA byla provedena pomocí metody qPCR a HRM analýzy. DNA byla izolována v dostatečné kvalitě pro PCR a dále byla prokázána přítomnost borůvek u vybraných výrobků metodou qPCR. Pomocí HRM analýzy bylo možné odlišit borůvku evropskou (Vaccinium myrtillus) od borůvky kanadské (Vaccinium corymbosum), jak v kontrolních vzorcích, tak i ve vybraných komerčních výrobcích. Dále byly kapalinovou chromatografií detekovány určité fenolické kyseliny a některé flavonoidy specifické pro borůvky a spektrofotometricky byl stanoven celkový obsah polyfenolů a flavonoidů.
|
host ::
RSS.