|
|
Izolace a charakterizace proteinů oviduktu podílejících se na tvorbě oviduktálního rezervoáru spermií u skotu
Kračmerová, Jana ; Liberda, Jiří (vedoucí práce) ; Postlerová, Pavla (oponent)
Tvorba oviduktálního rezervoáru spermií hraje důležitou roli v procesu fertilizace savčího vajíčka. Izolace a charakterizace některých komponent hovězího oviduktu účastnících se interakce spermií s povrchovými složkami oviduktu byla předmětem této studie. Byly připraveny dva afinitní nosiče obsahující imobilizované proteinové složky býčí semenné plasmy: jednak neseparované proteiny býčí semenné plasmy a jednak frakci fosforylcholin vázajících proteinů z býčí semenné plasmy. Tyto afinitní matrice pak byly použity pro studium interakcí imobilizovaných ligandů se složkami oviduktálních epithelů. Byly izolovány dva preparáty oviduktálních membránových proteinů oblasti isthmu: celkové membránové proteiny a apikální frakce membránových proteinů. Tyto membránové preparáty byly separovány pomocí afinitní chromatografie s použitím připravených afinitních nosičů. Afinitní chromatografie ani v jednom případě neposkytla dostatečné množství membránových složek interagujících s afinitními nosiči pro další studie. Dále byla pozornost věnována identifikaci čtyř proteinových zón detekovaných po elektroforetické separaci v přítomnosti SDS (relativní molekulová hmotnost 15 500 - 18 500) ve frakci apikálních membránových proteinů Tyto proteiny byly identifikován po elektroforetické separaci a tryptickém štěpení pomocí...
|
|
|
Detection of mannosidase in the porcine urogenital tract – study of the sperm releasing from oviductal reservoir
Maňásková, Pavla ; Ren, Š. ; Jelínková, Jitka ; Krejčová, T. ; Liberda, J.
One of the most important steps of reproduction process is the meeting of sperm with oocyte. Binding of sperm with oviductal cells maintains spermatozoa in fertile state. The beginning of sperm capacitation is associated with oocyte ovulation resulting in the sperm release from oviductal reservoir. Hormonal changes after ovulation probably induce distinct oviductal secretion leading to disruption of the sperm protein binding with oviductal saccharide moieties. Another eventuality of the sperm releasing from oviductal reservoir is a change of oviductal environment caused by components of follicular fluid transported with oocyte after ovulation. In the pig, previous studies indicate lectin-type interaction of sperm protein receptors by mannose structures on the surface of oviductal cells. Our study was focused on enzymatic activity of mannosidase and its detection in porcine oviduct (fluid and tissue) and follicular fluid during hormonal cycle. In fluid from follicles in early and late hormonal stages, we measured mannosidase activity by colorimetric methods at physiological and acidic pH. Expression of secreted mannosidase was studied by specific antibody in follicular and oviductal fluids, and oviductal tissues during hormonal cycle. Clearly increased enzymatic activity of secreted mannosidase was found as specific-species in porcine fluid from follicles in late stage of hormonal cycle. On the other hand, detection of secreted mannosidase in follicular fluid as well as in oviductal fluid did not shown any significant differences during hormonal cycle. In oviductal isthmic tissue, we detected decreased protein expression of secreted mannosidase at middle and late follicular phases. These results suggest possible role of follicular mannosidase rather than oviductal one in the sperm releasing from oviductal reservoir in the pig. The additional study of the gene expression of secreted form of mannosidase in oviductal tissue during hormonal cycle should be necessary.
|
|
| |
host ::
RSS.