|
|
Vliv parazita na aktivitu biotransformačních a antioxidačních enzymů ve střevě hostitele
Mládková, Zuzana ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Skálová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Zuzana Mládková Školitel: prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv parazita na aktivitu biotransformačních a antioxidačních enzymů ve střevě hostitele Hymenolepis diminuta, tasemnice krysí, je běžně využívána jako modelový organismus třídy Cestoda pro studium fyziologie, biochemie a metabolismu léčiv u tasemnic. V poslední době je Hymenolepis diminuta zkoumána i v souvislosti s helmintoterapií a potenciálním využitím v léčbě střevních zánětlivých chorob. Cílem této studie bylo zjistit, jak H. diminuta ovlivní aktivitu detoxikačních enzymů ve střevě hostitele. Nejdříve bylo infikováno 6 potkanů (kmene Wistar). Těm byly podány cysticerkoidy (larvální stádia tasemnice krysí) získané po předchozí izolaci z nakaženého brouka Tenebrio molitor (mezihostitel). Současně byl podán kontrolní skupině dalších 6 potkanů fyziologický roztok. Všichni potkani pak byli chováni ve vivariu po dobu 2 měsíců za střídavého světelného režimu (12 h světlo/tma). Následně byly tasemnice vyjmuty ze střev infikovaných potkanů a ze všech potkanů byla izolována střevní mukóza obsahující metabolicky aktivní enzymy. Poté byly připraveny subcelulární frakce pro následný in vitro experiment. K měření aktivity enzymů...
|
|
|
Vliv glutamátem navozené obezity na detoxikační enzymy obsahující glutathion
Duchačová, Kateřina ; Boušová, Iva (vedoucí práce) ; Szotáková, Barbora (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Mgr. Kateřina Duchačová Školitel: doc. PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Název rigorózní práce: Vliv glutamátem navozené obezity na detoxikační enzymy obsahující glutathion Obezita a s ní spojené zdravotní komplikace se v populaci vyskytují stále častěji a patří k nejstudovanějším zdravotním tématům dneška. Také stárnutí organismu je velmi diskutované. Používá se různých zvířecích modelů a sledují se změny v organismu na orgánové, tkáňové, buněčné i molekulární úrovni. Úkolem této práce bylo porovnání specifických aktivit a proteinové exprese enzymů glutathionperoxidasy (GPx) a glutathionreduktasy (GR) a specifické aktivity glutathion-S-transferasy (GST) v játrech obézních myší a zdravých kontrol z hlediska patologického stavu, stárnutí a pohlaví. Použity byly skupiny myší s obezitou navozenou glutamátem sodným (MSG), osmolální kontroly (NaCl) a myši bez léčby obou pohlaví a stáří 8 a 20 týdnů. Specifické aktivity enzymů byly stanoveny spektrofotometricky. Proteinová exprese byla stanovena pomocí polyakrylamidové gelové elektroforézy a imunoblottingu. Největší změny v aktivitě enzymu v souvislosti s obezitou jsem zjistila u GST, jejíž aktivita klesla u obézních samců přibližně o 50 %, zatímco u samic nebyl...
|
|
|
Jaterní řezy - modelový systém pro studium vlivu seskviterpenů na detoxikační enzymy
Slavíčková, Zlata ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Ambrož, Martin (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Zlata Slavíčková Školitel: prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Název diplomové práce: Jaterní řezy - modelový systém pro studium vlivu seskviterpenů na detoxikační enzymy Seskviterpeny se přirozeně vyskytují převážně ve vyšších rostlinách jako sekundární metabolity, společně s monoterpeny jsou hlavní součástí rostlinných silic. Seskviterpeny jsou biologicky aktivní sloučeniny, mezi jejich biologické vlastnosti patří protizánětlivý, protirakovinný, antioxidační, antibakteriální a antifungální účinek. Cílem této diplomové práce bylo zjistit vliv tří strukturně podobných acyklických seskviterpenů cis-nerolidolu (CNER), trans-nerolidolu (TNER) a farnesolu (FAR) na aktivitu vybraných biotransformačních enzymů - aldo-ketoreduktasa (AKR1A1 a AKR1C9), karbonylreduktasa 1 (CBR1), NAD(P)H-chinonoxidoreduktasa 1 (NQO1), cytochrom P450 (CYP1A1, CYP1A2, CYP2B CYP3A), sulfotranferasa (SULT), glutathion-S-transferasa (GST), UDP-glukuronosyltransferasa (UGT) v játrech potkana. Vliv seskviterpenů na vybrané enzymy byl studován na ultratenkých precizních řezech o přibližné tloušťce 200-250 µm a průměru 8 mm. Tkáňové řezy byly získány z jater laboratorního potkana (Rattus norvegicus, kmen Wistar). Jaterní řezy byly po dobu 8...
|
|
|
Charakterizace redukce flubendazolu u člověka in vitro
Štěpánková, Jana ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Novotná, Eva (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Mgr. Jana Štěpánková Vedoucí rigorózní práce: Prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Název rigorózní práce: Charakterizace redukce flubendazolu u člověka in vitro Flubendazol (FLU) je anthelmintikum benzimidazolového typu, používané k léčbě a prevenci helmintóz hospodářských i volně žijících zvířat. FLU je také registrován pro léčbu parazitóz způsobených střevními hlísticemi u lidí. Mechanismus jeho účinku spočívá ve specifické vazbě na tubulin, která naruší strukturu a funkci mikrotubulů. Výhodou tohoto léčiva je i nízká systémová toxicita. Proto se nyní studuje i jeho aktivita protinádorová. Cílem této rigorózní práce bylo charakterizovat redukci FLU v lidských jaterních subcelulárních frakcích, protože tyto informace v dostupné literatuře dosud chybí. Byla studována stereospecifita, subcelulární lokalizace, preference koenzymů, enzymová kinetika redukce FLU a aktivita enzymů, které se redukce FLU účastní. Výsledky měření prokázaly, že FLU je více redukován v cytosolu a je preferován redukovaný koenzym nikotinamidadenindinukleotidfosfát (NADPH). Redukce FLU je u člověka striktně stereospecifická, protože FLU byl redukován pouze na (+)-enantiomer FLUR. Při studiu enzymové kinetiky redukce FLU v cytosolu,...
|
|
|
Vliv přírodních látek na transport lékovými OATP transportéry
Zemčíková, Lucie ; Trejtnar, František (vedoucí práce) ; Mičuda, Stanislav (oponent) ; Szotáková, Barbora (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Kandidátka: Mgr. Lucie Zemčíková Školitel: doc. PharmDr. František Trejtnar, CSc. Název dizertační práce: Vliv přírodních látek na transport lékovými OATP transportéry Membránové transportéry ze skupiny OATP (organic anion-transporting polypetides) patří mezi přenašeče odpovědné za transport některých léčiv (např. hypolipidemik ze skupiny statinů) a dalších xenobiotik přes biologické membrány a bariéry v organismu. Tyto transportní proteiny tedy hrají důležitou úlohu při farmakokinetických procesech jako je absorpce, distribuce a eliminace. Potenciální modulace jejich transportní funkce přírodními látkami běžně se vyskytujícími v potravě rostlinného původu či potravních doplňcích může mít za následek změny koncentrací jejich substrátů (léčiv) v buňkách a tělních tekutinách, což může ovlivnit účinek i toxicitu těchto léčiv. Cílem práce bylo získat údaje o interakci vybraných přírodních látek s lidskými transportéry OATP2B1 a OATP1A2, které se podílejí na uptake léčiv na významných farmakokinetických bariérách organismu, a o jejich schopnosti ovlivnit transport lékových substrátů těmito transportéry. Pro studium byly vybrány přírodní látky ze skupiny flavonoidů a isoflavonů. Společnou charakteristikou...
|
|
|
Vliv parazita na aktivitu biotransformačních a antioxidačních enzymů ve střevě hostitele
Mládková, Zuzana ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Skálová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Zuzana Mládková Školitel: prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv parazita na aktivitu biotransformačních a antioxidačních enzymů ve střevě hostitele Hymenolepis diminuta, tasemnice krysí, je běžně využívána jako modelový organismus třídy Cestoda pro studium fyziologie, biochemie a metabolismu léčiv u tasemnic. V poslední době je Hymenolepis diminuta zkoumána i v souvislosti s helmintoterapií a potenciálním využitím v léčbě střevních zánětlivých chorob. Cílem této studie bylo zjistit, jak H. diminuta ovlivní aktivitu detoxikačních enzymů ve střevě hostitele. Nejdříve bylo infikováno 6 potkanů (kmene Wistar). Těm byly podány cysticerkoidy (larvální stádia tasemnice krysí) získané po předchozí izolaci z nakaženého brouka Tenebrio molitor (mezihostitel). Současně byl podán kontrolní skupině dalších 6 potkanů fyziologický roztok. Všichni potkani pak byli chováni ve vivariu po dobu 2 měsíců za střídavého světelného režimu (12 h světlo/tma). Následně byly tasemnice vyjmuty ze střev infikovaných potkanů a ze všech potkanů byla izolována střevní mukóza obsahující metabolicky aktivní enzymy. Poté byly připraveny subcelulární frakce pro následný in vitro experiment. K měření aktivity enzymů...
|
|
|
Vliv trabektedinu na buňky odvozené z kolorektálního karcinomu
Bobek, Jaroslav ; Boušová, Iva (vedoucí práce) ; Szotáková, Barbora (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická Fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Jaroslav Bobek Školitel: Doc. PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Školitel specialista: RNDr. Veronika Skarková, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv trabektedinu na buňky odvezené z kolorektálního karcinomu Trabektedin je alkaloid, který se přirozeně vyskytuje v mořských pláštěncích Ecteinascidia turbinata. Jeho mechanismus účinku spočívá v tvorbě komplexů s DNA, transkripčními faktory a jadernými proteiny. To způsobí blokádu transkripce a poruchu funkce reparačních mechanismů DNA v buňce. Toho můžeme následně využít v léčbě některých typů nádorových onemocnění, konkrétně v této práci jsme zkoumali jeho vliv na buňky kolorektálního karcinomu. Tuto látku jsme testovali na nádorových buněčných liniích SW 480 (odvozena od primárního ložiska adenokarcinomu) a SW 620 (metastatická linie z lymfatických uzlin od stejného pacienta). Primární buněčné kultury označené 36B a 39B byly získány odběrem od pacientů ve Fakultní nemocnici Hradec Králové a jejich následnou kultivací. Primární kultury 36B a 39B byly odvozeny z primárního ložiska nádoru tlustého střeva. U všech linií byla testována cytotoxicita trabektedinu a následně vypočítány hodnoty inhibiční koncentrace IC50. U buněk 36B a 39B byly tyto hodnoty použity při zkoušce...
|
|
|
Účinek flavonoidů na vybrané biotransformační enzymy
Procházková, Eliška ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Skálová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Eliška Procházková Školitel: Prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Název diplomové práce: Účinek flavonoidů na vybrané biotransformační enzymy Katechiny patřící mezi flavonoidy jsou v posledních letech zkoumanými polyfenolickými složkami zeleného čaje. Převážně je sledován jejich prospěšný vliv na lidský organismus. Roste popularita doplňků stravy s vysokým obsahem flavonoidů, čímž ale může docházet k ovlivnění široké řady biotransformačních enzymů a tím i metabolismu velkého množství léčiv. Cílem této diplomové práce bylo zjistit, jak vybrané katechiny - katechin (C), epikatechin (EC), epikatechin-3-gallát (ECG), epigallokatechin (EGC), epigallokatechin-3-gallát (EGCG) a extrakt ze zeleného čaje - polyfenon 60 (P) ovlivňují životnost Caco-2 buněk a jaký mají účinek na aktivitu a expresi vybraných biotransformačních enzymů v těchto střevních buňkách - cytochromů P450 (CYP) isoforem 1A1, 1A2 a 3A, aldehydreduktasy (AKR1A1), aldo-ketoreduktas 1C (AKR1C), karbonylreduktasy 1 (CBR1), UDP-glukuronosyltransferasy (UGT), sulfotransferasy (SULT) a glutathion-S-transferasy (GST). Testy viability (NRU test a MTT test) prokázaly, že katechiny (EGC, EGCG a P) ve vyšších koncentracích (10 µM a 25 µM) snižují životnost...
|
|
|
Vliv seskviterpenů na detoxikační enzymy v jaterních řezech
Horáčková, Hana ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Hana Horáčková Školitel: prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv seskviterpenů na detoxikační enzymy v jaterních řezech Seskviterpeny jsou sekundární metabolity produkované rostlinami, bakteriemi a houbami. Zajišťují přežití a konkurenceschopnost rostliny. Jsou složené ze tří izoprenových jednotek. Vykazují protizánětlivý, antimalarický, antibakteriální, antivirový, antioxidační, analgetický, antifungální, či protimutagenní efekt. Již dlouhá léta jsou používány v lidové medicíně a jako koření. Cílem této práce bylo zjistit, jak ovlivňují vybrané seskviterpeny - α-humulen (HUM), β-karyofylen (CAR) a karyofylen-oxid (CAO) aktivitu vybraných biotransformačních enzymů - karbonylreduktasy 1 (CBR1), aldoketoreduktasy (AKR1C9), aldehydreduktasy (AKR1A1), UDP-glukuronosyltransferasy (UGT), NAD(P)H- chinonoxidoreduktasy 1 (NQO1), glutahion-S-transferasy (GST), sulfotransferasy (SULT) a cytochromu P450 1A1/2, 2B a 3A (CYP1A1/2, CYP2B/3A). Práce byla provedena na modelu ultratenkých tkáňových řezů z jater laboratorního potkana (Rattus norvegicus, kmen Wistar). Tloušťka řezu byla 200-250 μm a průměr 8 mm. Jaterní řezy byly 30 minut preinkubovány a následně inkubovány v přítomnosti seskviterpenů...
|
|
|
Purification of membrane bound enzyme DHRS7B
Mariničová, Valéria ; Novotná, Eva (vedoucí práce) ; Szotáková, Barbora (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Valéria Mariničová Vedúca diplomovej práce: RNDr. Eva Novotná, Ph.D. Názov diplomovej práce: Purifikácia membránovo viazaného enzýmu DHRS7B Membránovo viazaný enzým DHRS7B, pochádzajúci z nadrodiny SDR (dehydrogenázy/reduktáz s krátkym reťazcom), patrí medzi málo preskúmané proteíny ľudského organizmu. Aj napriek nedostatku informácii o jeho vlastnostiach bol pozorovaný u myší, kde sa označuje ako PexRap s lokalizáciou v peroxizomoch a endoplazmatickom retikule (ER). Ide teda o peroxizomálny redukujúci proteín, ktorý ako kofaktor využíva NADPH. V myšacom organizme sa prejavila jeho aktivita na biosyntéze peroxizomálnych éterových lipidov počas adipogenézy. O úlohe ľudského DHRS7B v bunke, a prípadne niektorých ochoreniach, sa doposiaľ iba špekuluje a preto sa stáva predmetom výskumov. Cieľom práce bolo získať čistý rekombinantný ľudský enzým DHRS7B pripravený v Sf9 bunkách. Keďže je to membránový proteín bolo potrebné nájsť vhodný detergent, ktorý dokáže enzým DHRS7B vyňať z fosfolipidickej membrány a zároveň zachovať jeho aktivitu. Najvhodnejším sa javil detergent DDM v koncentrácii 1:1 (w/w) proteín:detergent. Ďalšími krokmi bola purifikácia, afinitná chromatografia pri ktorej sa získal čistý proteín...
|
host ::
RSS.