|
|
Structure and biocatalytic properties of nitrilases from filamentous fungi
Křenková, Alena ; Martínková, Ludmila (vedoucí práce) ; Macek, Tomáš (oponent) ; Klempier, Norbert (oponent)
Vláknité houby jsou vedle bakterií bohatým zdrojem nitrilas využitelných pro biotechnologické účely. V databázích lze najít velké množství sekvencí domnělých nitrilas, ale jen málo těchto enzymů bylo exprimováno, purifikováno a charakterizováno. Syntetické geny nitrilas z Aspergillus niger CBS 513.88 a Neurospora crassa OR74A byly navrženy podle sekvencí uložených v databázi GenBank. Tyto geny byly exprimovány v Escherichia coli a získané nitrilasy byly purifikovány a charakterizovány. Také byla studována ko-exprese molekulárních chaperonů s nitrilasami pomocí sady komerčních chaperonových plasmidů. Pro studium strukturních vlastností nitrilas byly použity různé metody, jako je homologní modelování, analytická ultracentrifugace nebo elektronová mikroskopie. Produkce rekombinantních nitrilas byla srovnána s produkcí nativními producenty - vláknitými houbami. Vzhledem k nízké produkci enzymu těmito houbami a jejich obtížné kultivaci se ukázalo být výhodným využití prokaryotického expresního systému. Vliv aminokyselin v blízkosti katalytického cysteinu na aktivitu, chemoselektivitu a enantioselektivitu byl studován pomocí bodových mutací. Vliv určitých aminokyselin v blízkosti katalytického centra enzymu na jeho vlastnosti je podobný i u vzdáleně příbuzných nitrilas, proto je možné katalytické...
|
|
| |
|
|
Nitrile hydrolysing enzymes: Fungal nitrilases
Vejvoda, Vojtěch ; Martínková, Ludmila (vedoucí práce) ; Wimmer, Zdeněk (oponent) ; Vosáhlová, Simona (oponent)
Charles University in Prague Faculty of Science Department of Biochemistry A thesis submitted for the degree of Doctor of Philosophy Nitrile-hydrolysing enzymes: Fungal nitrilases Mgr. Vojtěch Vejvoda Supervisor: Ing. Ludmila Martínková, CSc. Laboratory of Biotransformation, Institute of Microbiology, v.v.i. Academy of Sciences of the Czech Republic Consultant: Prof. RNDr. Karel Bezouška, DrSc. Faculty of Science, Department of Biochemistry, , Charles University in Prague Prague 2010 ÚVOD Nitrily jsou v přírodě všudypřítomné, nejen jako přírodní látky tvořené rostlinami, ale i jako sekundární metabolity mikroorganismů a vyšších organismů. Umělé nitrily a anorganické kyanidy se vyskytují v prostředí jako znečištění způsobené člověkem (průmyslové odpady, herbicidy, atd.). Přírodní i umělé nitrily jsou pro mnohé organismy jedovaté. Přírodní nitrily slouží jako obrana proti nepřátelům (např. pro rostliny to jsou býložravci), umělé nitrily jako herbicidy. Jakkoliv tyto sloučeniny negativně ovlivňují živé organismy ve svém okolí, tvoří také evoluční tlak, který pravděpodobně vede k tvorbě enzymů katalyzujících jejich odbourávání, a co více, i k jejich využití jako zdroje energie. Enzymy hydrolyzující nitrily jsou mezi organismy poměrně vzácné. Vyskytují se v určitých čeledích prokaryot (nitrilasy,...
|
|
|
Přepracování katastrálního operátu v katastrálním území Blansko
Martinková, Ludmila ; Sedláček, Svatopluk (oponent) ; Berková, Alena (vedoucí práce)
Diplomová práce se zabývá obnovou katastrálního operátu přepracováním v části katastrálního území Blansko. Předmětem přepracování je katastrální mapa vyhotovená podle Instrukce A, výsledkem je koncept digitální katastrální mapy. Při přepracování jsou využita data platného stavu souboru geodetických a popisných informací z informačního systému katastru nemovitostí a záznamy podrobného měření změn založené v dokumentaci Katastrálního pracoviště Blansko. Určené souřadnice polohopisu katastrální mapy ve vektorové podobě byly v terénu kontrolně zaměřeny. Součástí práce je porovnání výměr parcel uvedených v listech vlastnictví s výměrami určenými z grafického souboru.
|
|
| |
|
|
Seeking Novel Nitrilase Enzyme (Nitrile Aminohydrolase, EC 3.5.5.1)
Martínková, Ludmila ; Kaplan, Ondřej ; Veselá, Alicja Barbara
Our research group has created a library of novel nitrilases. In general, the enzymes are available from heterologous producers in amounts ranging from 10 to 20 mg of protein exhbiting 25-50 % purity. The enzymes differ from each other in substrate specificity, temperature optimum, enantioselectivity (arylacetonitrilases) etc. Preferential substrates are phenylacetonitrile, (R,S)-mandelonitrile, benzonitrile or cyanopyridines (depending on the enzyme).
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
host ::
RSS.