|
|
Vyhodnocení aktivity potenciálně antimykotických látek pomocí mikrodiluční bujónové metody III
Zavřelová, Alena ; Konečná, Klára (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Název diplomové práce: Vyhodnocení aktivity potenciálně antimykotických léčiv mikrodiluční bujónovou metodou III Autor diplomové práce: Alena Zavřelová Vedoucí diplomové práce: Mgr. Klára Konečná, Ph.D. Cíl: Cílem této práce, díky narůstajícímu počtu mykotických onemocnění a narůstajícímu výskytu rezistence, bylo zjistit aktivitu u potenciálně antimykoticky působících látek. Testovaly se nově syntetizované látky, strukturně vycházející z molekuly pyrazinamidu, což je významné antituberkulotikum. Metody: Testování látek probíhalo pomocí mikrodiluční bujónové metody na osmi kmenech patogenních hub, tvořené pěti kmeny kvasinek: Candida albicans, Candida tropicalis, Candida krusei, Candida glabrata, Trichosporon asahii a třemi kmeny vláknitých hub: Aspergillus fumigatus, Absidia corymbifera, Trichophyton mentagrophytes. Výsledky: V rozsahu testovaných koncentrací, z celkového počtu třiceti testovaných látek, vykazovala nejvýraznější antifungální aktivitu látka 5-methyl- 6-(2-fenylhydrazinyl)pyrazin-2,3-dikarbonitril. Všechny kmeny, kromě Trichophyton mentagrophytes, vykazovaly poměrně slibnou citlivost vůči testovaným látkám. Obecně, nejcitlivějším kmenem byl kmen Candida krusei, kde bylo dosaženo...
|
|
|
Optimalizace metod pro stanovení aktivace receptoru CD44
Skalická, Nela ; Němečková, Ivana (vedoucí práce) ; Konečná, Klára (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Název diplomové práce: Optimalizace metod pro stanovení aktivace receptoru CD44. CD44 je transmembránový glykoprotein přítomný na většině buněčných typů, který je zapojen do řady fyziologických i patologických procesů, taktéž představuje hlavní receptor pro kyselinu hyaluronovou (HA). HA je nesulfatovaný glykosaminoglykan, přítomný ve velké míře v extracelulární hmotě, kde zajišťuje hydrataci buněk, je zapojen do nádorových procesů, ovlivňuje buněčnou migraci, podporuje angiogenezi, podílí se na hojení ran. V této práci jsme se zaměřili na optimalizaci metod sledujících aktivaci, množství a štěpení receptoru CD44 u buněčné linie HT-29. Pomocí metod Western Blot, ELISA a průtokové cytometrie jsme pozorovali množství celkového receptoru a jeho rozštěpených domén. K aktivaci jsme využili HA o molekulové hmotnosti 71 kDa a PMA (Phorbol-12-Myristate-13-Acetate). Po aktivaci došlo k časově závislým změnám množství celkového CD44 i jeho fragmentů. Sledovali jsme také buněčnou smrt v závislosti na přítomnosti HA a PMA. Neprokázali jsme žádný významný vliv těchto látek na viabilitu buněk. Pro vizuální vyhodnocení translokace odštěpené intracelulární domény do jádra jsme použili fluorescenční a konfokální...
|
|
|
Vliv C-reaktivního proteinu na endotel v aortě spontánně hypertenzních potkanů
Kosán, Aleš ; Němečková, Ivana (vedoucí práce) ; Doleželová, Eva (oponent)
VLIV C-REAKTIVNÍHO PROTEINU NA ENDOTEL V AORTĚ SPONTÁNNĚ HYPERTENZNÍCH POTKANŮ Diplomová práce Autor: Aleš Kosán Studijní obor: Farmacie Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Endotelová dysfunkce a chronický zánět jsou faktory hrající roli v patogenezi metabolického syndromu. Tato práce je koncipována jako pilotní studie, jejímž cílem je navrhnout další směr zkoumání v oblasti vlivu C-reaktivního proteinu na endotel. Pomocí metody Western blot byla sledována exprese čtyř látek, v minulosti spojených se vznikem endotelové dysfunkce: endotelinu-1, hemoxygenázy-1, endoglinu a fosforylované syntázy oxidu dusnatého. Měření bylo provedeno na vzorcích z homogenizovaných potkaních aort transgenních spontánně hypertenzních potkanů exprimujících lidský C reaktivní protein. Jako kontrolní skupina byl využit kmen standardních spontánně hypertenzních potkanů. Detekce byla provedena pomocí chemiluminiscenčního substrátu na RTG filmy a získaná data byla semikvantitativně vyhodnocena denzitometrickou metodou. U endoglinu jsme zaznamenali zvýšenou expresi v hodnotě 186,3 % oproti kontrolní skupině. Exprese fosforylované formy endotelové syntázy představovala 325,6 % v porovnání s kontrolní skupinou. U hemoxygenázy-1 byl nárůst exprese minimální (109,0 %) a exprese endotelinu-1 byla...
|
|
|
Soluble endoglin effects on endothelial dysfunction markers in mouse aorta
Kalmanová, Lenka ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lekárskych vied Názov diplomovej práce: Vplyv dlhodobého pôsobenia solubilného endoglínu na markery endotelovej dysfunkcie v myšacej aorte Autor diplomovej práce: Lenka Kalmanová Vedúci diplomovej práce: prof. PharmDr. Petr Nachtigal, Ph.D. Cieľ práce: Cieľom tejto diplomovej práce bolo identifikovať a následne vyhodnotiť expresiu markerov endotelovej dysfunkcie (ICAM-1, VCAM-1, P-selektín) v aortách dvoch skupín transgénnych myší. Kontrolná a experimentálna skupina myší sa líšili hladinou ľudského solubilného endoglínu. Metódy: Pre experiment boli použití 12 mesiacov starí samci myšacieho kmeňa CBAxC57BL/6J, ktorým bola do organizmu vložená genetická informácia pre expresiu ľudského sEng. Pomocou ELISA analýzy hladín sEng v plazme boli myši rozdelené do dvoch skupín - experimentálna skupina (vysoké hladiny sEng) a kontrolná skupina (nízke hladiny sEng). Obidve skupiny myší boli kŕmené štandardnou laboratórnou diétou pre hlodavce. Bola vykonaná Western blot analýza adhéznych molekúl ICAM-1, VCAM-1 a P-selektín v myšacej aorte a následne ELISA analýza plazmatických hladín molekuly sVCAM-1. Hladiny celkového cholesterolu a triacylglycerolov boli stanovené pomocou biochemickej analýzy. Výsledky: Western blot analýza...
|
|
|
Optimalization of Leishmania antigen formulations for the diagnosis of canine leishmaniasis.
Danková, Barbora ; Němečková, Ivana (vedoucí práce) ; Vokřál, Ivan (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékářských věd Studentka: Barbora Danková Školitel: RNDr. Ivana Němečková, Ph.D. Školitel specialista: Prof. Anabela Cordeiro da Silva Název práce: Optimalizace diagnostiky leišmaniózy u psů Leišmanióza je parazitální onemocnění způsobené prvokem z rodu Leishmania, šířící se pomocí přenašeče. Vyskytuje se v 98 zemích po celém světě. Pro laboratorní diagnózu leišmaniózy jsou nezbytné spolehlivé a přesné testy, protože se může vyskytnout široké spektrum klinických znaků, symptomů a vysoká míra asymptomatických infekcí. Sérologické stanovení leišmaniózy u psů, zejména metoda enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), se ukázala být užitečnou. Údaje získané z ELISA testu pro detekci protilátek proti vybraným rekombinantním proteinům A, B, C, D, E a F byly vyhodnoceny z infekčních sér, které byly získány v Portugalsku a Brazílii. Tato práce prezentuje nejlepší formulaci rekombinantních proteinů pro sérologické stanovení diagnózy. Zjistili jsme, že antigen C ukázal vysoký stupeň senzitivity a specificity v rozpoznání pozitivních a asymptomatických sér infikovaných leišmaniózou. Klíčová slova: leišmanióza u psů, rezervoár, diagnóza, ELISA.
|
|
|
Změna exprese transportních proteinů během obstrukční cholestázy u potkanů II
Skořepová, Zuzana ; Doleželová, Eva (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
4 Abstrakt Zuzana Skořepová Změna exprese transportních proteinů během obstrukční cholestázy u potkanů II Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíle práce: Cílem diplomové práce bylo ověření cholestatického poškození jater navozené podvazem žlučovodu po dobu trvání 28 dnů u potkanů analýzou exprese efluxních transportních proteinů v játrech (Bsep, Bcrp, Mrp2, Mdr1, Mdr2, Mrp3, Mrp4) na úrovni mRNA a proteinu. Metody: Potkani kmene Wistar (n = 6, v každé skupině; 280 - 320 g) byli rozděleni do dvou skupin: kontrolní skupina sham-operovaných potkanů (Sham) a BDO skupina (obstrukce žlučovodu v trvání 28 dnů). Byla provedena analýza exprese efluxních transportních proteinů na úrovni mRNA a proteinu metodou qRT-PCR a Western blot. Výsledky: Ve skupině BDO bylo pozorováno významné zvýšení mRNA exprese u Mdr2 proteinu na 303 %, Mdr1b na 340 % a Mrp3 na 9900 % v porovnání s kontrolní skupinou. Exprese Mrp2 mRNA byla snížena na 42 %. Významné zvýšení exprese proteinu ve skupině BDO bylo prokázáno u Bcrp na 160 %, Mdr1 na 1010 %, Mrp3 na 940 % a Mrp4 na 140 % v porovnání se Sham skupinou. Exprese proteinu byla významně snížena u Mrp2 na 31 %, Bsep na 59 % a Mdr2 na 82 % v porovnání s kontrolní skupinou. Závěr: Z výsledků diplomové práce vyplývá, že při obstrukční...
|
|
|
Screening systémových amyloidóz v materiálu endoskopických biopsií.
Květoň, Martin ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Diplomová práce Kandidát: Bc. Martin Květoň Studijní obor: Odborný pracovník v laboratorních metodách Školitel: prof. PharmDr. Petr Nachtigal, Ph.D. Název: Screening systémových amyloidóz v materiálu endoskopických biopsií CÍL PRÁCE Systémové amyloidózy tvoří komplexní a heterogenní skupinu závažných onemocnění, které jsou výsledkem konformační poruchy proteinů a jejichž společným znakem je ukládání patologických proteinových hmot (amyloidu) v extracelulárním prostoru tkání. Diagnostika amyloidóz je založena na histopatologickém vyšetření tkáňových vzorků a přímé demonstraci přítomnosti amyloidových depozit. Celkovým účelem této diplomové práce bylo vytvořit, aplikovat a následně evaluovat screeningový program zaměřený na systémové amyloidózy. METODY V první části experimentální studie byly porovnány dostupné barvící techniky, používané k průkazu amyloidových hmot ve tkáni. Druhá část experimentální studie spočívala v provádění screeningových vyšetření u endoskopických bioptických vzorků gastrointestinálního traktu. VÝSLEDKY Na základě výsledků porovnání byla jako vhodná screeningová technika zvolena metoda, využívající barvivo Sirius red F3B. V rámci screeningového programu bylo histopatologicky...
|
|
|
Imunohistochemická detekce PECAM-1 exprese u hypertenzních potkanů
Hocková, Erika ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
4 ABSTRAKT Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Farmakologie a toxikologie Kandidát: Mgr. Erika Hocková Konzultant: Doc. PharmDr. Petr Nachtigal, Ph.D. Název rigorózní práce: Imunohistochemická detekce PECAM-1 exprese u hypertenzních potkanů Hypertenze - vysoký krevní tlak je civilizační nemoc, která patří k nejčastějším kardiovaskulárním onemocněním. Svou prevalencí 25 - 30% v dospělé populaci představuje neinfekční epidemii a tím závažný zdravotnický problém. PECAM - 1 je adhezní a signální molekula, exprimovaná na hematopoetických a endoteliálních buňkách, kde tvoří hlavní složku cévní stěny. Strukturně je členem imunoglobulinové "superrodiny" adhezních molekul. Sunitinib je biologická látka ze skupiny tyrozinkinázových inhibitorů používaný v léčbě generalizovaného karcinomu ledviny a gastrointestinálních stromálních tumorů. Patří do farmakologické skupiny antineoplastika - inhibitory proteinkinázy. Mezi jeho hlavní nežádoucí účinky patří hypertenze. Tato rigorózní práce se zabývala popisem endoteliální exprese PECAM-1 v aortě u spontánně hypertenzních potkanů (SHR) a jejich normotenzních kontrol (WKY potkanů) s ohledem na podávání léčiva sunitinibu za použití imunohistochemických metod a vyhodnocení pomocí stereologických metod. V experimentu byly použity dva kmeny...
|
|
|
Vliv délky fixace a typu fixačního roztoku na imunohistochemickou analýzu při detekci kmenových buněk ve tkáni endometria.
Macháčová, Dominika ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Název diplomové práce: Vliv délky fixace a typu fixačního roztoku na imunohistochemickou analýzu při detekci kmenových buněk ve tkáni endometria Autor: Bc. Dominika Macháčová Vedoucí diplomové práce: prof. PharmDr. Petr Nachtigal, Ph.D. Cíle: Cílem této práce je zjistit, jak typ fixačního roztoku a délka fixace ovlivňuje imunohistochemii. Materiály a metody: Do této studie bylo zahrnuto celkem pět prasečích a pět kravských endometrií pocházejích z resekátů hysterektomie. Zjišťována byla imunohistochemická exprese progesteronových receptorů a SOX2 ve tkáních endometria fixovaných v pěti fixačních roztocích (Formol, Antigenfix, Greenfix, Bouin, Methacarn) po 1,5; 8,5; 15,5; 29,5; 64,5 a 189,5 dnech fixace. Imunohistochemické barvení bylo provedeno na barvícím automatu Ventana Benchmark ULTRA. Výsledky: Imunohistochemická exprese progesteronových receptorů byla po 1,5 - 64,5 dnech fixace formolem prokázána u 92-87 % žlázových buněk a u 59 % buněk po 189,5 dnech fixace. Intenzita reakce byla hodnocena jako silná, po 189,5 dnech klesla na slabou. U tkání fixovaných Antigenfixem byla pozorována silná exprese progesteronových receptorů u 96,4 % žlázových buněk po 1,5 dni fixace, u 77 % buněk po 29,5 dnech...
|
|
|
Imunohistochemická analýza exprese endoglinu a adhezních molekul u experimentálního modelu NASH
Vašinová, Martina ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Nealkoholová steatohepatitida (NASH) je agresivní forma tzv. nonalcoholic fatty liver disease neboli jaterních tukových chorob, která je charakterizována zánětem a fibrózou v játrech. Bylo prokázáno, že se endoglin (ENG) podílí na fibróze, a plazmatické koncentrace solubilního endoglinu jsou zvýšené u pacientů s diabetem mellitem II. typu a hypercholesterolémií. Cílem této studie bylo analyzovat expresi ENG, biomarkeru fibrózy (αSMA/alfa smooth muscle actin) a biomarkerů zánětu (ICAM-1, VCAM-1) u myších jater. Wild type myši byli rozděleny do dvou skupin (n=8 v každé skupině), kontrolní skupina byla krmena standardní dietou a experimentální/NASH skupina byla krmena vysokotukovou dietou s fruktózou a glukózou v pití (NASH dieta) po dobu 6 měsíců. Exprese vybraných proteinů byla hodnocena pomocí imunohistochemie (ImmPRESSTM a VECTASTAIN® ELITE® ABC kit) na jaterních řezech, které byly fixovány formalínem a zalité do parafínu. Výsledky této diplomové práce ukazují, že exprese VCAM-1 a ICAM-1 byla detekována v jaterních sinusoidách a byla výrazně vyšší v NASH skupině v porovnání s kontrolní skupinou. Podobně exprese ENG v NASH skupině byla vyšší. Dále αSMA byl detekován nejenom v krevních cévách, ale i v hvězdicovitých buňkách u NASH skupiny, což poukazuje na fibrotický proces po NASH dietě. Závěrem...
|
host ::
RSS.