|
|
Přínos Next Generation Sequencing pro laboratorní diagnostiku
Votýpka, Pavel ; Beránek, Martin (vedoucí práce) ; Macháček, Miloslav (oponent)
4 ABSTRAKT Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Pavel Votýpka Školitel: Doc. PharmDr. Martin Beránek, Ph.D. Konzultant: Mgr. Nikola Ptáková Název diplomové práce: Přínos Next Generation Sequencing pro laboratorní diagnostiku Snaha o přečtení lidského genomu ve svém důsledku vedla nejen k získání poznatků o lidské genetické informaci, ale také k vývoji nových sekvenačních metod a technologií. Pro udržení kroku s rozvojem v oblasti genetiky se na řadě klinických i výzkumných pracovišť do běžného provozu zavádějí přístroje druhé generace na principu masivního paralelního sekvenování. Na trhu dnes dominují čtyři platformy - Illumina, Solid, Ion Torrent a 454 Life Technologies. Proces celé sekvenační analýzy lze shrnout do tří hlavních kroků - příprava sekvenační knihovny, sekvenování a detekce nukleotidů a analýza dat. Každá část analýzy přináší v závislosti na použité platformě svá specifika, se kterými je nutné počítat a také úskalí, kterým je vhodné se vyhnout či minimalizovat jejich vliv na finální výsledek analýzy. V posledních několika letech jsou vyvíjeny i nové metody označované jako třetí generace sekvenování, které umožňují čtení jediné molekuly nukleové kyseliny bez její amplifikace. NGS technologie dnes umožňují, aby si každé...
|
|
|
Studium nových fotosensitizérů ze skupiny ftalocyaninů a azaftalocyaninů pro fotodynamickou léčbu nádorových onemocnění
Macháček, Miloslav ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Řezáčová, Martina (oponent) ; Mosinger, Jiří (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát Mgr. Miloslav Macháček Školitel doc. PharmDr. Tomáš Šimůnek, Ph.D. Název disertační práce Studium nových fotosensitizérů ze skupiny ftalocyaninů a azaftalocyaninů pro fotodynamickou léčbu nádorových onemocnění Fotodynamická terapie (PDT) nádorů je neinvazivní metoda určená k léčbě solidních nádorů. Jejími základními složkami jsou molekulární kyslík, světlo a fotosensitizér (PS) - komponenty samy o sobě netoxické, ale v kombinaci vedoucí k tvorbě reaktivních forem kyslíku (ROS; především singletového kyslíku), které poškozují buněčné struktury a vedou k buněčné smrti. Způsob, jakým je nádorová buňka zničena závisí především na typu PS, délce ozáření a lokalizaci léčiva, protože singletový kyslík je vysoce reaktivní a je schopen jen minimální difúze v biologických systémech. Kromě přímého cytotoxického působení PS se na eradikaci nádoru podílí také poškození cév (deprivace živin a kyslíku) a aktivace imunitního systému. V současné době se při návrhu struktur PS přistupuje buď vytvářením vhodné kombinace dostatečně aktivní látky a nosičového systému, tvorbou cílených konjugátů, nebo syntézou látek s vysokou aktivitou a minimální mírou tvorby agregátů ve vodném prostředí. V naší práci jsme se zaměřili...
|
|
|
In vitro effects of 3-hydroxytyrosol on renal hypoxia and inflammation
Kamasová, Terézia ; Boušová, Iva (vedoucí práce) ; Macháček, Miloslav (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických vied Kandidát: Terézia Kamasová Školitel: Doc. PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Prof. Alice Santos-Silva Maria João Valente, Ph.D. Názov diplomovej práce: Účinky 3-hydroxytyrosolu na renální hypoxii a zánět in vitro Chronické zlyhanie obličiek je spôsobené heterogénnou skupinou ochorení postihujúcich obličky. Renálna hypoxia a hypoxiou-vyvolaný oxidatívny stres, renálna fibróza a zápal, sú veľmi častými sprievodnými javmi v postihnutej obličke, prispievajúcimi k zhoršovaniu chronického zlyhania obličiek. Látky rastlinného pôvodu sú neoddeliteľnou súčasťou modernej medicíny v terapií rôznych ochorení. 3-Hydroxytyrosol, fenolická zlúčenina získaná extrakciou z olív a olivových produktov ako napríklad olivový olej, je nositeľom silnej antioxidačnej, protizápalovej, antitrombotickej, baktericídnej a baktériostatickej aktivity. Cieľom tejto práce bolo stanoviť preventívny efekt 3-hydroxytyrosolu v renálnych bunkách a určiť jeho efekt na hypoxiou-vyvolaný zápal, oxidatívny stres a renálnu fibrózu a tak zhrnúť prínos tejto fenolickej zlúčeniny ako sľubného moderného terapeutického prístupu v liečbe chronického zlyhania obličiek. Na skúmanie efektu chemicky-indukovanej hypoxie a hypoxiou vyvolaného zápalu, oxidatívneho stresu,...
|
|
|
Biologické hodnocení fotodynamické aktivity amfifilních anionických fotosensitizérů
Halašková, Marie ; Macháček, Miloslav (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
1 ABSTRAKT Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Marie Halašková Školitel: RNDr. Miloslav Macháček, Ph.D. Název diplomové práce: Biologické hodnocení fotodynamické aktivity amfifilních anionických fotosenzitizérů Nádorová onemocnění jsou celosvětově rozšířeným zdravotním problémem a jednou z nejčastějších příčin úmrtí ve vyspělých státech, proto je věnováno značné úsilí výzkumu a vývoji nových protinádorových léčiv. Běžné konvenční léčebné metody, jako jsou chemoterapie, radioterapie, chirurgické zákroky či jejich kombinace, jsou často spojeny s vážnými vedlejšími účinky a vysokými náklady na léčbu. Fotodynamická terapie (PDT) se proto stává stále více uznávanou alternativní terapií pro léčbu mnoha maligních i nemaligních stavů. PDT je klinicky schválený neinvazivní způsob léčby, který se skládá ze dvou relativně jednoduchých kroků: podání fotosenzitivní látky a následné ozáření tumoru světlem za účelem aktivace fotosenzitizéru (PS). Aktivovaný PS reaguje s molekulárním kyslíkem za tvorby vysoce reaktivních forem kyslíku (ROS). Ty v nádoru způsobí stav oxidačního stresu, který vede ke smrti nádorových buněk, poškození cévního systému nádoru a vyvolání protinádorové imunitní reakce. Cílem této práce je zhodnocení fotodynamické aktivity nových...
|
|
|
Studium nových fotosensitizérů ze skupiny ftalocyaninů a azaftalocyaninů pro fotodynamickou léčbu nádorových onemocnění
Macháček, Miloslav ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Řezáčová, Martina (oponent) ; Mosinger, Jiří (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát Mgr. Miloslav Macháček Školitel doc. PharmDr. Tomáš Šimůnek, Ph.D. Název disertační práce Studium nových fotosensitizérů ze skupiny ftalocyaninů a azaftalocyaninů pro fotodynamickou léčbu nádorových onemocnění Fotodynamická terapie (PDT) nádorů je neinvazivní metoda určená k léčbě solidních nádorů. Jejími základními složkami jsou molekulární kyslík, světlo a fotosensitizér (PS) - komponenty samy o sobě netoxické, ale v kombinaci vedoucí k tvorbě reaktivních forem kyslíku (ROS; především singletového kyslíku), které poškozují buněčné struktury a vedou k buněčné smrti. Způsob, jakým je nádorová buňka zničena závisí především na typu PS, délce ozáření a lokalizaci léčiva, protože singletový kyslík je vysoce reaktivní a je schopen jen minimální difúze v biologických systémech. Kromě přímého cytotoxického působení PS se na eradikaci nádoru podílí také poškození cév (deprivace živin a kyslíku) a aktivace imunitního systému. V současné době se při návrhu struktur PS přistupuje buď vytvářením vhodné kombinace dostatečně aktivní látky a nosičového systému, tvorbou cílených konjugátů, nebo syntézou látek s vysokou aktivitou a minimální mírou tvorby agregátů ve vodném prostředí. V naší práci jsme se zaměřili...
|
|
| |
|
|
In vitro study of newly synthesized potential cardioprotective drugs
Liptáková, Lucie ; Hašková, Pavlína (vedoucí práce) ; Macháček, Miloslav (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Lucie Liptáková Školiteľ: RNDr. Pavlína Hašková, Ph.D. Názov diplomovej práce: In vitro štúdium novo syntetizovaných potenciálne kardioprotektívnych liečiv Reaktívne formy kyslíka (ROS) a dusíka (RNS) sú v organizme produkované za normálnych i patologických podmienok. Organizmus disponuje antioxidačnými mechanizmami, ktoré ho chránia pred ich škodlivými účinkami. V prípade nerovnováhy medzi produkciou ROS/RNS a antioxidačnými mechanizmami, dochádza k oxidačnému stresu, ktorý pôsobí v patogenéze mnohých ochorení vrátane kardiovaskulárnych. Z dôvodu prítomnosti veľkého množstva mitochondrií a nižšieho množstva prítomných antioxidantov sú kardiomyocyty obzvlášť citlivé k oxidačnému stresu. Železo, sa katalyzovaním radikálových reakcií významnou mierou podieľa na vzniku a rozvoji oxidačného stresu. Odstránenie voľného železa pomocou chelátorov železa je jednou z možností, ako oxidačnému stresu predchádzať, alebo ho mierniť. Cieľom tejto diplomovej práce bolo štúdium kardioprotektívnych účinkov v prostredí H2O2 i vlastných kardiotoxických vlastností novo syntetizovaných aroylhydrazónových chelátorov železa (H21, H22, H23, H24, H25 a H26), na línii potkaních embryonálnych kardiomyoblastov H9c2....
|
|
|
Studium cytoprotektivních vlastností nových oxidačním stresem aktivovaných aroylhydrazonových prochelátorů železa
Macháček, Miloslav ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Lenčová, Olga (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Miloslav Macháček Školitel: Doc. PharmDr. Tomáš Šimůnek, Ph.D. Název diplomové práce: Studium cytoprotektivních vlastností nových oxidačním stresem aktivovaných aroylhydrazonových prochelátorů železa Oxidační stres hraje důležitou roli v mnohých onemocněních včetně kardiovaskulárních chorob. Fentonova reakce katalyzovaná intracelulárním redoxně aktivním železem je zdrojem vysoce reaktivních a toxických hydroxylových radikálů. Odstranění volných iontů železa se proto jeví jako vhodná strategie k zamezení dalšího rozvoje oxidačního poškození myokardu. Výsledky naší laboratoře, stejně jako jiných vědeckých skupin, ukazují slibné kardioprotektivní účinky jak v in vitro tak v in vivo experimentech. Na druhou stranu, nadměrná deplece železa může také vést k toxickému poškození buněk. Cílem této studie je proto studium nových prochelátorů železa, jejichž chelatační aktivita se projeví až po aktivaci reaktivními formami kyslíku. Boronyl ester salicylaldehydisonikotinoylhydrazonu (BSIH) a jeho derivát BSIH-PD byly studovány in vitro pro jejich potencionální protektivní účinky v prostředí toxických koncentrací reaktivních forem kyslíku. Kromě toho byla hodnocena i vlastní toxicita těchto látek....
|
|
|
Efekt konzumace jednoduchých cukrů na kognitivní funkce potkaních samic
Podhorská, Gabriela ; Macháček, Miloslav (vedoucí práce) ; Vokřál, Ivan (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Gabriela Podhorská Školitel: Mgr. Miloslav Macháček, Ph.D. Název diplomové práce: Efekt konzumace jednoduchých cukrů na kognitivní funkce potkaních samic. Konzumace jednoduchých cukrů, především fruktosy, se za několik uplynulých desetiletí zvýšila. Nadměrný příjem cukrů byl spojen s rozvojem inzulinové rezistence, hypertriglyceridémií a oxidačním stresem, což vede k narušení kognitivních funkcí. Nicméně, stále zůstává nejasné, zda jsou tyto změny v kognitivních funkcích způsobeny vysokým kalorickým příjmem, či zda jsou zapříčiněné příjmem specifického monosacharidu. Mimoto, mechanismus na molekulární úrovni není zatím kompletně rozluštěn. Naše výzkumná skupina podávala potkaním samicím Sprague-Dawley v dlouhodobé studii po dobu 7 měsíců 10% w/v roztok glukosy ve vodě a 10% roztok fruktosy, což simulovalo chronický příjem cukrů u lidí. Plazmatické parametry a exprese proteinů, které jsou zahrnuty v metabolických drahách, byly zkoumány v prefrontální kúře. Kognitivní funkce byly hodnoceny pomocí testu rozpoznávání nového objektu (NOR) a Morris Water Maze (MWM) testu. Výsledky získané v naší studii ukázaly významný nárůst v hladině triacylglycerolů nalačno i postprandiálně (1,9x a 1,4x, p<0,05) pouze ve...
|
|
|
In vitro hodnocení fotodynamické aktivity derivátů tetrapyridoporphyrazinu pro léčbu solidních nádorů
Jedličková, Adéla ; Macháček, Miloslav (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Adéla Jedličková Školitel: Mgr. Miloslav Macháček Název diplomové práce: In vitro hodnocení fotodynamické aktivity derivátů tetrapyridoporphyrazinu pro léčbu solidních nádorů Mezi hlavní příčiny úmrtí v dnešní době bezesporu patří nádorová onemocnění, jejichž výskyt stále stoupá. Proto se výzkum v oblasti léčby významně zaměřuje na vývoj nových potenciálních protinádorových léčiv a terapeutických přístupů. Fotodynamická terapie (PDT) dnes patří mezi klinicky schválené terapeutické metody pro léčbu maligních i nemaligních onemocnění. Jejími hlavními složkami jsou fotosenzitizér (PS), světlo a kyslík, které samy o sobě nejsou toxické, ale společnou interakcí vedou ke vzniku vysoce reaktivních molekul. Metoda je založena na absorpci světla o vhodné vlnové délce molekulou PS a následném přenosu energie fotonů na okolní molekuly, především na kyslík, za vzniku cytotoxických reaktivních forem kyslíku (ROS), kde hlavní roli hraje singletový kyslík. ROS následně poškozují okolní buněčné struktury, jejichž destrukce vede k nevratnému poškození buněčných funkcí a následné buněčné smrti, jejíž typ úzce souvisí s lokalizací PS uvnitř buňky. Výsledný efekt léčby je dán třemi propojenými mechanismy - přímým...
|
host ::
RSS.