|
|
Zavedení bezobratlého zvířecího modelu, Galleria mellonella, pro studium účinnosti in vivo, stávajících a nově syntetizovaných, kandidátních antituberkulotik
Kubíček, Jiří ; Konečná, Klára (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Studijní obor: Farmacie Autor: Jiří Kubíček Vedoucí práce: RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Název diplomové práce: Zavedení bezobratlého zvířecího modelu, Galleria mellonella, pro studium účinnosti in vivo, stávajících a nově syntetizovaných, kandidátních antituberkulotik. Cíl práce: Cílem této diplomové práce bylo představit bezobratlý organismus, Galleria mellonella (G. mellonella), Pyralidae, jakožto alternativní, ekonomicky výhodnější a morálně lépe akceptovatelný model pro studie účinnosti antituberkulotických látek in vivo. V experimentální části této práce byla úvodem věnována pozornost optimalizaci metodických kroků, které by měly vést k vyšší reprodukovatelnosti a validitě získaných dat. Byl hodnocen vliv disagregačního suplementu, tyloxapolu, na růst bakterie Mycobacterium aurum (M. aurum). Byl rovněž mapován růst tohoto mikrobiálního kmene v kultivačním médiu, Middlebrook 7H9, za účelem určit exponenciální fázi růstu. V rámci druhé části experimentů byla provedena infekce larev G. mellonella bakteriálním kmenem M. aurum, s následnou administrací vybraných, komerčně dostupných antituberkulotik (anti-TB). Metody: Pro mapování exponenciální fáze růstu bakterie M. aurum byla provedena kultivace...
|
|
|
Screening systémových amyloidóz v materiálu endoskopických biopsií.
Květoň, Martin ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Diplomová práce Kandidát: Bc. Martin Květoň Studijní obor: Odborný pracovník v laboratorních metodách Školitel: prof. PharmDr. Petr Nachtigal, Ph.D. Název: Screening systémových amyloidóz v materiálu endoskopických biopsií CÍL PRÁCE Systémové amyloidózy tvoří komplexní a heterogenní skupinu závažných onemocnění, které jsou výsledkem konformační poruchy proteinů a jejichž společným znakem je ukládání patologických proteinových hmot (amyloidu) v extracelulárním prostoru tkání. Diagnostika amyloidóz je založena na histopatologickém vyšetření tkáňových vzorků a přímé demonstraci přítomnosti amyloidových depozit. Celkovým účelem této diplomové práce bylo vytvořit, aplikovat a následně evaluovat screeningový program zaměřený na systémové amyloidózy. METODY V první části experimentální studie byly porovnány dostupné barvící techniky, používané k průkazu amyloidových hmot ve tkáni. Druhá část experimentální studie spočívala v provádění screeningových vyšetření u endoskopických bioptických vzorků gastrointestinálního traktu. VÝSLEDKY Na základě výsledků porovnání byla jako vhodná screeningová technika zvolena metoda, využívající barvivo Sirius red F3B. V rámci screeningového programu bylo histopatologicky...
|
|
|
Markery dysfunkce endotelu a solubilní endoglin
Pešlová, Lenka ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Školitel: Doc. PharmDr. Petr Nachtigal, PhD. Posluchač: Lenka Pešlová Název diplomové práce: Markery dysfunkce endotelu a solubilní endoglin Cíl práce: Popsat případné změny v histologické stavbě srdce u myší s nízkou a vysokou hladinou solubilního endoglinu (Sol-Eng+). Zaměřili jsme se na popis obecné histologie, na sledování změn ve vazivu a na případný rozvoj zánětlivých reakcí pomocí imunohistochemických metod. Metoda: Použili jsme geneticky modifikované samice kmene CBAxC57BL/6J s nízkými či vysokými hladinami solubilního endoglinu (Sol-Eng+ ). Šest měsíců staré samice byly krmeny vysokotukovou dietou pro hlodavce obsahující 1,25 % cholesterolu a 40 % tuku po dobu tří měsíců. Poté byly samicím odebrány myokardy. K detekci exprese endoglinu byla využita metodika imunohistochemie En Vision- CD3-T-lymfocyty (rabbit anti mouse). Při histologické analýze bylo zvoleno barvení hematoxylin-eosin a zelený trichrom. Výsledky: Histologická analýza neprokázala patologickou akumulaci kolagenu v myokardu u žádného sledovaného zvířete, nebyly pozorovány ani žádné změny v barvení jader ani v cytoplazmě, ani žádná infiltrace leukocytů. Imunohistochemická analýza neprokázala přítomnost lymfocytů T u žádného...
|
|
|
Imunohistochemická detekce makrofágů v aterosklerotických plátech arteria brachiocephalica I
Škodová, Sabina ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Sabina Škodová Imunohistochemická detekce makrofágů v aterosklerotických plátech arteria brachiocephalica. Bakalářská práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Zdravotní laborant Cíl práce: Cílem této bakalářské práce bylo nastavit imunohistochemické metody pro detekci makrofágů v arteria brachiocephalica apoE/LDLR receptor deficientních myší. Práce se dále zaměřuje na kvantifikaci exprese těchto makrofágů u skupiny myší, které byla podávána standardní dieta a u myší, kterým byla podávána dieta s nízkým obsahem sacharidů a vysokým obsahem proteinů Metody: Ke studii byly použity samice apoE/LDLR deficientní myši rozdělené do dvou skupin (v každé skupině bylo 6 myší). Jedné skupině byla podávána standardní dieta (kontrolní skupina) a druhé skupině byla podávána dieta s nízkým obsahem sacharidů a vysokým obsahem proteinů (LCHP). Tato dieta byla myším podávána 8 týdnů. Následně byla na řezech arteria brachiocephalica provedena imunohistochemická analýza, využívající ke zviditelnění makrofágů metodiku Immpress s detekčním činidlem diaminobenzidin (DAB). Poté byla provedena biochemická a stereologická analýza. Výsledky: Biochemická analýza prokázala zvýšení hladin celkového cholesterolu u myší krmených LCHP dietou. Imunohistochemická analýza prokázala přítomnost makrofágů v...
|
|
| |
|
|
Sledování markerů oxidačního stresu u modelu chronického zánětu tlustého střeva
Hocková, Erika ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Crohnova nemoc a ulcerózní kolitida se řadí do idiopatických střevních zánětů. NF - κB představuje skupinu pěti různých proteinů - p65 (RelA), c-Rel, RelB, p50 a p52. NF - κB je schopen nastartovat expresi různých prozánětlivých genů a ovlivnit tak proces mukosálního zánětu, také zprostředkovává různé specifické buněčné děje. Bilirubin je endogenní látka, u které byly zjištěny antioxidační a protizánětlivé účinky, které by mohly ovlivnit proces zánětu a mít protektivní účinek. Tato diplomová práce se zabývala vypracováním metodiky pro detekci nukleárního transkripčního faktor kappa B na parafinových řezech a sledováním jeho exprese ve stěně tlustého střeva normobilirubinemických a hyperbilirubinemických (Gunn kmen) potkanů po indukci chronického zánětu pomocí imunohistochemických metod. Ve studii bylo použito 8 potkanů kmene Gunn (G+ ) a 8 potkanů kmene Wistar (K+ ), kterým byl dlouhodobě podáván dextran sulfát (DSS). Sedm dnů po sobě byl do pitné vody přidáván DSS (koncentrace 2% w/v) s následným podáváním pouze pitné vody bez DSS po dobu 14 dnů. Popsaný třítýdenní cyklus se 2x zopakoval (proběhly tedy 3 cykly). Jako kontroly byli opět použiti potkani kmene Gunn (n=6) a Wistar (n=6), kteří nebyly vystaveni vlivu DSS. Výsledky imunohistochemické analýzy prokázaly detekci NF-κB receptoru ve stěně...
|
|
|
Vliv atorvastatinu na expresi markerů kaskády transformujícího růstového faktoru beta v experimentální aterogenezi
Frnochová, Lenka ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Lenka Frnochová Vliv atorvastatinu na expresi markerů kaskády transformujícího růstového faktoru beta v experimentální aterogenezi. Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíl práce: Cílem této diplomové práce bylo pozorovat expresi ALK-1 a VEGF v aterosklerotických plátech u apoE a LDL-receptor deficientních myší s ohledem na podávání atorvastatinu. Metody: K výzkumu jsme použili samice myší kmene C57BL/6J s dvojitým deficitem apolipoproteinu E a LDL-receptoru. Myši byly staré 8 týdnů. Myši byly rozděleny do dvou skupin: skupiny atorvastatinové a kontrolní. Oběma skupinám byla podávána po 8 týdnů cholesterolová dieta a u atorvastatinové skupiny byl také podáván atorvastatin. Poté byla provedena biochemická analýza krve. K detekci lipidů v aterosklerotických lézích jsme využili histologického barvení olejovou červení. Imunohistochemická analýza byla uskutečněna v 1 cm aortálního sinu a části aortálního oblouku. Použitou metodikou pro detekci exprese ALK-1 a VEGF byla metodika avidin-biotin s detekcí pomocí DAB. Výsledky: Biochemická analýza ukázala, že atorvastatin snížil hladiny celkového cholesterolu. Po barvení olejovou červení byly u obou skupin viditelné aterosklerotické léze. Atorvastatin snižoval velikost aterosklerotických plátů....
|
|
|
Vliv Sunitinibu na expresi ICAM-1 u normotenzních a hypertenzních potkanů
Frnochová, Lenka ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Mgr. Lenka Frnochová Vliv Sunitinibu na expresi ICAM-1 u normotenzních a hypertenzních potkanů Rigorózní práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíl práce: Kvantifikovali jsme expresi ICAM-1 v aortě normotenzních Wistar Kyoto potkanů a spontánně hypertenzních potkanů při užívání sunitinibu. Pro kvantifikaci jsme aplikovali stereologické a imunohistochemické metody. Metody: Pro výzkum jsme používali inbrední samce Wistar Kyoto potkanů a spontánně hypertenzních potkanů. Potkani obou kmenů byli rozděleni do dvou skupin - skupina se sunitinibem a kontrolní skupina. Experimentální skupina přijímala sunitinib v pitné vodě v dávce 10 mg/kg denně a potkani v kontrolní skupině dostávali pouze pitnou vodu. Spontánně hypertenzní potkani přijímali sunitinib po 8 týdnů a po 5 dnech regenerace opětně dostávali do vody sunitinib po dalších 8 týdnů. Wistar Kyoto potkani dostávali nejprve také 8 týdnů sunitinib do vody, ale po 5 dnech regenerace, sunitinib byl podáván těmto potkanům už jenom 2 týdny z důvodu toxicity a snížení váhy. Imunohistochemická analýza byla použita na aortě potkana. K detekci exprese ICAM-1 byla užita metoda En Vision s detekcí prostřednictvím DAB. Výsledky: Imunohistochemické barvení prokázalo, že exprese ICAM-1 byla vyšší u potkanů, kteří byli...
|
|
|
Vliv Sunitinibu na endoteliální expresi hemooxygenázy-I u normotenzních potkanů
Svobodová, Barbora ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Barbora Svobodová Vliv sunitinibu na endoteliální expresi hemooxygenázy I u normotenzních potkanů. Bakalářská práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Zdravotní laborant Cíl práce: Cílem této práce bylo popsat a vyhodnotit expresi hemoxygenázy-1 (HO-1) v aortě normotenzních Wistar Kyoto (WKY) potkanů s ohledem na podávání sunitinibu za použití imunohistochemických a stereologických metod. Metody: Použili jsme dvě skupiny WKY potkanů (v každé bylo 6 zvířat), přičemž jedné z nich byl podáván sunitinib a druhé (kontrolní) byla podávána pouze voda. Aplikace sunitinibu probíhala podle schématu: 8 týdnů podávání/5 týdnů pauza/2 týdny podávání. Následně jsme na 60 preparátech potkaních aort provedli imunohistochemickou analýzu, která sledovala expresi HO-1 metodikou En Vision s detekcí pomocí DAB. Poté byla provedena stereologická analýza. Výsledky: Imunohistochemická analýza ukázala expresi HO-1 pouze u endotelových buněk a obecně lze konstatovat, že byla pozorována jen u několika zvířat, zejména ze skupiny zvířat léčených sunitinibem. Exprese HO-1 nebyla pozorována mimo cévní endotel. Závěr: Imunohistochemická a následná stereologická analýza prokázala signifikantní nárůst exprese HO-1 u potkanů, kterým byl podáván sunitinib. Tato zvýšená exprese může souviset s rozvojem...
|
|
|
Molekulární genetika celiakie
Němečková, Iva ; Daňková, Pavlína (vedoucí práce) ; Tučková, Ludmila (oponent)
Celiakie je orgánově specifické autoimunitní onemocnění, které vzniká jako důsledek přecitlivělosti na obilný lepek u geneticky vnímavých jedinců. Genetickou predispozicí jsou geny HLA-DQ2 a HLA-DQ8, které jsou nutné, avšak ne dostačující pro vznik celiakie; podílejí se cca na 40% dědičnosti. Postupně jsou vytipovávány další geny, které by se mohli podílet na patogenezi celiakie. Mezi tyto tzv. kandidátní geny, které jsou vyhledávány na základě známých poznatků molekulárních mechanismů vrozené a adaptivní imunitní odpovědi, patří např. geny MIC, TNF, CTLA-4, CD28, ICOS, MYO9B, MMP, PTPN22 a TLR. Imunitní odpověď vyvolána proniknutím peptidů lepku do lamina propria vede ke slizničnímu poškození. Různé peptidy lepku jsou do patologie celiakie zapojeny různým způsobem, některé peptidy spouštějí adaptivní imunitní odpověď, jiné např. peptid p31-43 spouští vrozenou imunitní odpověď.
|
host ::
RSS.