|
| |
|
| |
|
|
Refraktometrická studie lipoproteinu o velmi nízké hustotě (VLDL)
Šinglárová, Simona ; Pacáková, Věra (vedoucí práce) ; Staňková, Barbora (oponent)
Znalost chemického složení lipoproteinů má široký význam. Pří stanovení velikosti částic lipoproteinových frakcí je nutná předběžná separace pomocí ultracentrifugace v hustotních roztocích. Obvykle se samotné stanovení provádí elektroforeticky či gelovou filtrací s vhodnou detekcí, která výsledek zkresluje. Lepší řešení nabízí nový detektor, tzv. Light Scattering Detector, který detekuje ohyb laserového paprsku na molekulách či částicích v roztoku. Pro výpočet velikosti částic vyžaduje závislost indexu lomu na koncentraci dn/dc. Koncentrace je stanovena gravimetricky a indexy lomu metodou refraktometrickou. Závislosti nejlépe vyhovuje polynomická funkce. Zda koreluje s chemickým složením lipoproteinu VLDL je možné určit na základě studia většího počtu vzorků.
|
|
| |
|
| |
|
|
Use of the modern separation techniques for the analysis of insect pheromones
Žáček, Petr ; Jelínek, Ivan (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Cvačka, Josef (oponent)
(ČJ) Komunikace zprostředkovaná chemickými sloučeninami (semiochemikáliemi) je hlavní způsob dorozumívání se u hmyzu, zvláště pak hmyzu společenského. Metody plynové chromatografie v jednorozměrném, dvourozměrném komprehensivním a preparativním uspořádání spojené s hmotnostním a/nebo elektroantenografickým detektorem byly použity ke studiu těkavých nebo středně těkavých semiochemikálií u různých druhů hmyzu. V rámci této práce byla zkoumána biosyntéza pohlavního feromonu u samců čmeláků druhů Bombus terrestris, B. lucorum a B. lapidarius pomocí aplikace předpokládaných biosyntetických prekurzorů feromonů (octan sodný, vyšší mastné kyseliny) izotopicky značených atomy 2 H a 14 C. Pro tento účel bylo zkoumáno chromatografické chování a možnosti detekce izotopicky značených sloučenin v jednorozměrném a dvourozměrném komprehensivním systému (2 H, 13 C). U všech testovaných kolon byl pro sloučeniny značené oběma izotopy potvrzen "inverzní izotopický efekt". Vyvinuté analytické postupy byly aplikovány na reálné vzorky čmeláků. Analýza extraktů tkání čmeláků druhů B. terrestris a B. lucorum po in vitro inkubaci se značeným octanem sodným dokázala přítomnost značených metabolitů a potvrdila tak možnost de novo biosyntézy feromonu přímo v labiální žláze. Značené metabolity byly nalezeny i v případě in vivo...
|
|
|
Determination of proteinogenic amino acids by high-performance separation techniques
Hodek, Ondřej ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Tůma, Petr (oponent)
(CZ) Proteinogenní aminokyseliny patří mezi základní stavební jednotky živých organismů. Proto byl v poslední době výzkum v metabolomice zaměřen na vývoj rychlých a citlivých analytických metod pro stanovení aminokyselin. Tato práce obsahuje dvě studie popisující vývoj vysoce účinných separačních metod pro kvantifikaci aminokyselin. V první studii byla vyvinuta metoda kapilární elektroforézy pro stanovení aminokyselin v rostlinách tabáku. Nedílnou součástí této studie byla optimalizace extrakce aminokyselin z rostlinného materiálu. Extrakce byla optimalizována postupem "design of experiments" (DoE), pomocí kterého byly vyhodnoceny faktory ovlivňující výtěžek extrakce aminokyselin. Nejdůležitějšími faktory byly objem a koncentrace extrakčního činidla (kyselina chlorovodíková), jejichž optimální hodnoty byly určeny pomocí "response surface methodology" (RSM). Poté byly aminokyseliny separovány pomocí kapilární elektroforézy s bezkontaktní vodivostní detekcí a stanoveny za použití kalibrace s vnitřním standardem, což přispělo ke zlepšení přesnosti metody. Druhá studie byla zaměřena na vývoj metody pro stanovení aminokyselin v lidské plasmě pomocí superkritické fluidní chromatografie. Jedním z cílů této studie bylo zvýšit rozpustnost aminokyselin v mobilní fázi bohaté na CO2. Nejdříve byla zvýšena...
|
|
| |
|
| |
|
|
Stanovení neesterifikovaných mastných kyselin v krevní plasmě
Lacinová, Petra ; Pacáková, Věra (vedoucí práce) ; Staňková, Barbora (oponent)
Stanovení celkové koncentrace neesterifikovaných mastných kyselin (nonesterified fatty acids, NEFA) v plazmě patří mezi rutinní biochemické vyšetřovací metody. Pro detailnější metabolické studie je třeba i stanovení jejich profilu, tj. identifikace a kvantifikace jednotlivých složek. Stanovení profilu NEFA se běžně provádí kapilární plynovou chromatografií, není však ujednocen způsob jejich izolace od ostatních plazmatických lipidů. To lze provést buď extrakcí, nebo preparativní tenkovrstevnou chromatografií. Cílem předkládané práce bylo srovnat obě separační techniky. Vzorky směsné krevní plazmy od dobrovolných dárců byly analyzovány kapilární plynovou chromatografií po předchozí separaci tenkovrstevnou chromatografií a alternativně extrakcí kapalina-kapalina. Srovnání výsledků t-testem bylo provedeno jak pro absolutní koncentrace jednotlivých mastných kyselin, stanovené metodou vnitřního standardu (kyselina margarová), tak pro relativní zastoupení (Rel%). Reprodukovatelnost výsledků byla výrazně lepší u extrakční metody než u metody TLC - hodnoty relativní směrodatné odchylky jednotlivých skupin FA podle nenasycenosti byly 4,3- 11,3% vs. 8,6-33,8% pro relativní zastoupení (Rel%) a 16,5-25,5% vs. 15,4-47,4% pro absolutní koncentrace. U jednotlivých FA, které měly zastoupení větší než 0,1 Rel%,...
|
host ::
RSS.