|
|
Tail labelled oligonucleotide probes for the detection of DNA-protein interactions
Pivoňková, Hana ; Němcová, Kateřina ; Horáková Brázdilová, Petra ; Havran, Luděk ; Macíčková-Cahová, Hana ; Hocek, Michal ; Fojta, Miroslav
DNA-protein interactions can be monitored via different ways. We introduce novel, fast and simple approaches in DNA-protein interaction detection based on electrochemical measurements of DNA alone (structure-sensitive DNA sensing), or DNA modified with osmium tetroxide bearing nitrogenous ligands, or measurements of redox-active moieties enzymatically attached to the end of a DNA substrate thus forming a labeled tail (by terminal transferase).
|
|
|
Redox labelling of nucleic acids for analyzing nucleotide sequences and monitoring DNA-protein interactions
Fojta, Miroslav ; Havran, Luděk ; Horáková Brázdilová, Petra ; Pivoňková, Hana ; Kostečka, Pavel ; Macíčková-Cahová, Hana ; Raindlová, Veronika ; Vrábel, Milan ; Hocek, Michal
Nucleobase labelling of DNA for electrochemical sensing was attained through chemical modification of thymine bases with osmium tetroxide in the presence of nitrogenous ligands, or via enzymatic incorporation of nucleotide conjugates with redox-active moieties using labelled deoxynucleoside triphosphates. DNA hybridization, primer extension and PCR techniques were used for sequence-specific DNA assays. Tail-labelled DNA substrates were applied to monitor DNA binding by tumour suppressor p53 protein.
|
|
|
Elektrochemické rozpouštěcí metody pro speciaci olova a kadmia v půdních roztocích
Šestáková, Ivana ; Jaklová Dytrtová, J. ; Jakl, M. ; Navrátil, Tomáš ; Fojta, Miroslav
Půdní roztok je vodná fáze půdy, která je v kontaktu s kořenovým systémem rostlin. V půdním roztoku jsou obsaženy živiny, organické i anorganické látky z půdy a dále tzv. exudáty – látky vylučované rostlinou (např. nízkomolekulární organické kyseliny). Pro bioakumulaci, tj. přenos z půdy do rostlin, je významný obsah volných iontů kovů a labilních komplexů v půdním roztoku, pohybující se většinou v oblasti stopových koncentrací. Proto jsou pro tato stanovení vhodné elektrochemické metody využívající nahromadění analytu na pracovní elektrodě – diferenční pulsní anodická rozpouštěcí voltametrie, anodická rozpouštěcí square-wave voltametrie a rozpouštěcí chronopotenciometrie s konstantním proudem. Uvedené metody s použitím visicí rtuťové kapkové elektrody byly testovány pro speciaci kadmia a olova v modelově připravených i reálných půdních roztocích.
|
|
|
Využití prototypu multikanálového přístroje pro elektrochemickou detekci hybridizace DNA
Brázdilová, P. ; Navrátil, Tomáš ; Josypčuk, Bohdan ; Fojta, Miroslav
Příspěvek se zabývá nově zkonstruovaným 8-kanálovým přístrojem, který umožňuje sekvenční analýzu až na 8 různých nebo stejných čidlech. Přístroj je řízený počítačem. K tomuto přístroji byly připojovány uhlíkové tištěné elektrody (SPCE). Byla detekována hybridizace hybridizace DNA. DNA přítomná ve vzorku spontánně adsorbovala na povrch SPCE a volný povrch byl následně blokován pomocí hovězího sérového albuminu. Na adsorbovanou DNA byla poté hybridizována sonda značená biotinem a na ni pak byl navázán konjugát streptavidinu s enzymem alkalickou fosfatázou (SALP). Tento enzym katalyzuje přeměnu elektrochemicky neaktivního 1-naftylfosfátu přítomného v elektrolytu na aktivní 1-naftol, jehož anodický signál byl detekován pomocí stejnosměrné voltametrie (DCV).
|
host ::
RSS.