|
|
Vliv sloučenin selenu na proliferaci buněčných linií izolovaných z kolorektálního karcinomu - srovnání vhodnosti použitých metod
Voráčová, Adéla ; Szotáková, Barbora (oponent) ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce)
autor: Adéla Voráčová název: Vliv sloučenin selenu na proliferaci buněčných linií izolovaných z kolorektálního karcinomu - srovnání vhodnosti použitých metod Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové studijní obor: farmacie Abstrakt Bylo prokázáno, že selen má protinádorové vlastnosti v in vivo i in vitro modelech, včetně buněk kolorektálního karcinomu. Účinek je závislý na jeho chemické formě a koncentraci. Srovnávali jsme antiproliferativní efekt tří sloučenin selenu; seleničitanu sodného, seleno-L-methioninu (SeMet) a Se-(Methyl)selenocysteinu (SeMCys) na tři linie buněk odvozených z kolorektálního karcinomu - HT29, SW480 a SW620 K měření byly použity metody WST, XTT, MTT, Brilliant blue (BB) a neutrální červeň (NR). Buňky byly ovlivněny jednotlivými sloučeninami selenu v koncentracích od 0-256 μM po dobu 48 hodin. Ve všech třech liniích metodami WST a XTT nebylo možné prokázat cytotoxický účinek, s výjimkou nejvyšších koncentrací sloučenin selenu, dokonce metabolická aktivita ovlivněných buněk významně vzrostla oproti kontrole. MTT, neutrální červeň a Brilliant blue byly citlivější a poskytly vzájemně podobné výsledky s významným poklesem měřených parametrů v závislosti na koncentraci. Nejvyšší cytotoxický účinek byl spojen se Se- (Methyl)selenocysteinem,...
|
|
|
In vitro hodnocení antiproliferativních účinků nových intracelulárních chelátorů železa
Macková, Eliška ; Kvasničková, Eva (oponent) ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce)
rnáverzáía harlova v mraze carmaceuíácká fakulía v eradcá hrálové haíedra báochemáckých věd handádáí: bláška jacková Školáíel: aocK mharmarK Tomáš ŠámůnekI mhKaK kázev dáélomové éráce: In vitro hodnocení aníáéroláferaíávních účánků nových áníracelulárních cheláíorů železa Aroylhydrazony jsou írádeníální láéofální cheláíory železa s velmá dobrou érosíuénosíí do buněkK gejách významný zásíuéceI salácylaldehyd ásonákoíánoyl hydrazon EpfeFI vykázal v éředchozích exéerámeníech érovedených na našem éracovášíá velmá zajímavé aníáoxádační a aníáéroláferaíávní vlasínosíáK geho hlavní nevýhodou je však nízká síabáláíaI daná rychlou hydrolýzou hydrazonové vazby Z íohoío důvodu byla na kaíedře anorganácké a organácké chemáe cac rh éřáéravena séráe devííá nových analogů pfe odvozených od aromaíáckých keíonůK kaše současná síudáe navazuje na éředchozí exéerámeníy s íěmáío láíkamá na našem éracovášíá a zaměřuje se na další éoíencáální možnosí využáíí nových aroylhydrazonůI a ío aélákacá v éroíánádorové léčběK mro naše exéerámeníy jsme éoužálá buněčnou lánáá érsního adenokarcánomu jCcJT a buněčnou lánáá eiSM odvozenou od ládské éromyelocyíární leukémáeK mroláferační íesíy érobíhaly éo dobu T2 hodánI kdy byly buňky vysíaveny éůsobení láíek nebo jejách kombánacíK r všech nových cheláíorů byla zaznamenána síaíásíácky...
|
|
|
Vztah mezi homeostázou kationtů alkalických kovů a rezistencí k antimykotikům u kvasinek rodu Candida
Elicharová, Hana ; Buchta, Vladimír (oponent) ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra biochemických věd Kandidát: Hana Elicharová Školitel: Doc. PharmDr. Tomáš Šimůnek, Ph.D; Katedra biochemických věd, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Univerzita Karlova v Praze Školitel specialista: RNDr. Hana Sychrová, DrSc.; Oddělení membránového transportu, Fyziologický ústav AV ČR, v.v.i. Název práce: Vztah mezi homeostází kationů alkalických kovů a rezistencí k antimykotikům u kvasinek rodu Candida Rod Candida zahrnuje asi 200 druhů jednobuněčných kvasinkových organismů, z nichž několik desítek druhů je potenciálně patogenních. Candidy jsou běžnou součástí přirozené lidské mikroflóry, avšak při oslabení imunity mohou vyvolat lokální záněty i život ohrožující systémové infekce. Mezi nejčastější původce infekcí patří druhy Candida albicans, C. glabrata a C. parapsilosis - právě tyto druhy a patogenní druh C. dubliniensis byly v centru zájmu naší práce. Tyto druhy se významně liší halotolerancí i rezistencí k azolovým antimykotikům. Nejpoužívanější antimykotika v léčbě candidos i candidémií jsou azolová antimykotika, která inhibují syntézu ergosterolu a tím poškozují plasmatickou membránu Candid. Jedna z esenciálních funkcí plasmatické membrány je regulace a udržování iontové homeostáze. Je známo, že subinhibiční...
|
|
|
Cytotoxicita a metabolismus doxorubicinu v buněčné linii MCF7
Hanušová, Veronika ; Šimůnek, Tomáš (oponent) ; Skálová, Lenka (vedoucí práce)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Titul, jméno, příjmení kandidáta: Bc. Veronika Hanušová Titul, jméno, příjmení školitele: Doc. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Název diplomové práce: Cytotoxicita a metabolismus doxorubicinu v buněčné linii MCF-7. Doxorubicin (DOX) patří mezi antracyklinová chemoterapeutika významně se podílející na léčbě mnoha solidních nádorů, včetně karcinomu prsu, ale také mnoha hematoonkologických onemocněních. DOX je metabolizován na 13-OH-doxorubicinol (DOX-OL) produkovaný zejména karbonyl reduktasou 1 (CBR1). DOX-OL je méně antineoplastický, ale více kardiotoxický než původní sloučenina. Cílem této práce bylo studium redukce DOX a testování možného zvýšení cytotoxicity DOX inhibicí jeho reduktas. K experimentům byla zvolena buněčná linie MCF-7, odvozená z prsního adenokarcinomu. Nejprve bylo zjištěno vhodné složení kultivačního média a optimalizován postup při přípravě vzorku pro HPLC analýzu. Při studiu metabolismu DOX v cytosolu MCF-7 buněk působil oracin (potencionální cytostatikum) jako významný kompetitivní inhibitor reduktas DOX. V testech cytotoxicity působil DOX toxičtěji v buňkách s přídavkem séra do média, oracin byl naopak toxičtější v buňkách bez přídavku séra. Kombinace DOXu s oracinem působila toxičtěji než...
|
|
|
Proteomová charakterizace hostitelské buňky po interakci s intracelulárním pathogenem Francisella tularensis
Římalová, Pavla ; Klimentová, Jana (oponent) ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce)
Diplomová práce Proteomová charakterizace hostitelské buňky po interakci s intracelulárním patogenem Francisella tularensis. Pavla Římalová Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd 2009 Francisella tularensis (F. tularensis) je intracelulární gram-negativní bakterie navozující u člověka závažné onemocnění tularémii. Je příkladem bakterie, jejíž mechanismy patogeneze nebyly doposud zcela popsány. K jejich objasnění by mohla významně přispět proteomová charakterizace interakce mezi hostitelem a patogenem. Cílem diplomové práce bylo odhalit změny proteinové výbavy u buněk myší makrofágové linie J774.2, vystavených působení bakterie F. tularensis za použití kvantitativní "shotgun" proteomové technologie. Proteom buněk infikovaných F. tularensis ve třech různých časových intervalech (6, 12 a 24 hodin) byl porovnán s proteomem buněk neiinfikovaných. Pomocí komerčního kitu ProteoExtract Subcellular Extraction Kit (S-PEK, Calbiochem) byly připraveny čtyři subcelulární frakce. Frakce obohacená o cytosolové proteiny byla dále analyzována a kvantifikována prostřednictvím iTRAQ-HPLC- MS/MS techniky. Tímto přístupem se podařilo identifikovat celkem 248 proteinů, z toho u 37 z nich byly pozorovány změny v produkci proteinů v infikovaných buňkách oproti buňkám...
|
|
|
Komplementace dsbA mutantního kmene Francisella tularensis a analýza potenciálních vazebných partnerů proteinu DsbA
Šenitková, Iva ; Červený, Lukáš (oponent) ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Iva Šenitková Školitel: doc. PharmDr. Tomáš Šimůnek, Ph.D. Školitel - konzultant: RNDr. Petra Špidlová, Ph.D. Název diplomové práce: Komplementace dsbA mutantního kmene Francisella tularensis a analýza potenciálních vazebných partnerů proteinu DsbA Konzervovaný hypotetický lipoprotein FTT1103 je virulenčním faktorem gramnegativní intracelulární bakterie F. tularensis. Tento protein je homologní k proteinům disulfid oxidoreduktázové rodiny DsbA. Proteiny této rodiny katalyzují tvorbu disulfidických vazeb, které jsou nezbytné pro utvoření správné konformace proteinů, pro jejich aktivitu a stabilitu. Cílem práce byla identifikace vazebných partnerů lipoproteinu FTT1103 běžně nazývaného DsbA, jejichž znalost by nám mohla pomoci v hlubším pochopení role lipoproteinu DsbA ve virulenci F. tularensis. Pomocí metod molekulární biologie jsme vytvořili fúzní gen ftt1103 se sekvencí kódující FLAG® kotvu a klonovali ho do plazmidového vektoru replikujícího se ve F. tularensis. Plazmidový vektor jsme elektroporací vnesli do in frame delečního mutanta F. tularensis subsp. holarctica kmen FSC200/∆1103, čímž došlo k jeho komplementaci in trans. Protein DsbA obsahující FLAG® epitop jsme spolu s jeho...
|
|
|
The role of hDia1 and hDia2 in melanoma cell invasion
Šťastná, Jana ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
Cílem diplomové práce bylo objasnit roli proteinů hDia1a hDia2 v invazním chování melanomových A375-M2 buněk. Při práci byla použita metodika siRNA transfekce, western blotting, fluorescenční a konfokální mikroskopie. Výsledky ukázaly, že oba proteiny skutečně hrají roli v invasním chování nádorových buněk. Dále vznikla hypotéza, která navrhuje mechanismus ovlivnění invasního chování nádorových buněk těmito proteiny.
|
|
| |
|
|
Studium vlivu inositol hexafosfátu na apoptózu buněčných linií izolovaných z kolorektálního karcinomu
Hašková, Pavlína ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Rudolf, Emil (oponent)
Úvod: Apoptóza - programovaná buněčná smrt se významně podílí na udržení tkáňové homeostázy. Její narušení vede k nádorovým onemocněním. Inositolhexafosfát (IP6) je přirozeně se vyskytující látka, která je přítomna v luštěninách, obilovinách a semenech. IP6 a jeho méně fosforylované formy jsou také přítomny ve většině buněk savců, kde asistují na regulaci různých důležitých buněčných funkcí (včetně regulace buněčného cyklu) Metody: Tato práce se zabývala studiem vlivu IP6 na apoptózu buněk izolovaných z kolorektálního karcinomu metodou in vitro stanovení enzymové aktivity kaspázy 3 v buněčném extraktu. Výsledky: Pomocí Studentova t-testu bylo prokázáno, že IP6 statisticky významně ovlivňuje apoptózu buněk izolovaných z kolorektálního karcinomu.
|
|
|
Gene expression profiling after experimental perinatal asphyxia and the effect of complement-derived anaphylatoxin C3a
Šourková, Hana ; Wsól, Vladimír (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
Úvod: Komplement se účastní ochrany a reparace mozku po jeho poškození. Pro porozumění molekulárním mechanismům těchto procesů jsme provedli profilování genové exprese s využitím kvantitativní polymerázové řetězové reakce v reálném čase (qPCR), která je jednou z nejpřesnějších moderních strategií pro analýzu genové exprese. Projekt: Projekt byl zaměřen na profilování exprese vybraných genů potenciálně ovlivňujících ztrátu a ochranu neuronální tkáně, a to během tří týdnů po hypoxicko-ischemickém poškození mozku, modelujícím perinatální asphyxii. Nedávné experimenty ukázaly, že exprese C3a pod kontrolou GFAP promotoru (C3a/GFAP) zmenšila poškození hipokampu po ligaci levé karotidy u novorozených myší o 50% ve srovnání s kontrolními myšmi. Projekt rovněž posuzuje jak místní exprese C3a/GFAP transgenu ovlivňuje expresi vybraných genů. Exprese genů byla analyzována na vzorcích z ipsilaterální a kontralaterální části hipokampu a ipsilaterální části mozkové kůry, které byly získány v čase poranění, 6 a 24 hodin; 3, 7 a 21 dní po něm. Výsledky: Výsledky ukázaly, že se regulace genové exprese po hypoxicko-ischemické příhodě liší v čase a intenzitě a může být také odlišná v příslušných oblastech mozku. Zkoumané geny lze zařadit do rodin se vztahem k uvolnění a deaktivaci neurotransmiteru (SYN II, SYN III,...
|
host ::
RSS.