|
|
Porovnání HPLC-UV a HPLC-MS/MS metod v analýze vybraných 1,4-benzodiazepinů
Slováček, Jan ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
Cílem této práce byla optimalizace separačních podmínek vysokoúčinné kapalinové chromatografie pro separaci oxazepamu a lorazepamu. Dále byla porovnána detekce s diodovým polem a hmotnostním spektrometrem. Pro hmotnostní spektrometr byly použity dva druhy iontových zdrojů - klasického elektrosprej a elektrosprej s přídavným tryskovým proudem. Optimálních separačních podmínek bylo dosaženo použitím mobilní fáze obsahující acetonitril/0,1% octovou kyselinu (30/70) (v/v) a separační kolony Kinetex C8 100A (75 x 2,1 mm, 2,6 μm). Za těchto separačních podmínek došlo k rozdělení studovaných analytů na základní linii a celková doba analýzy nepřesáhla tři minuty. Ze studovaných detekcí bylo dosaženo nejnižších hodnot limitu detekce (LOD) a limitu stanovitelnosti (LOQ) pomocí ionizace elektrosprejem s přídavným tryskovým proudem. Pro tento typ ionizace se limity detekce pohybovaly od 17 µg ml−1 do 32 µg ml−1 .
|
|
|
Cílená analýza eikosanoidů pomocí LC/MS
Moravcová, Marie ; Kuda, Ondřej (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Eikosanoidy představují velkou třídu biologicky aktivních metabolitů polynenasy- cených mastných kyselin, které hrají důležitou roli v mnoha fyziologických procesech. Metabolismus těchto látek je velice složitý a pro jeho pochopení byly použity metody analýzy zahrnující preseparaci z biologického vzorku pomocí extrakce na pevné fázi a kapalinovou chromatografii ve spojení s detekcí na hmotnostním spektrometru. V rámci této bakalářské práce byly porovnány způsoby preseparace eikosanoidů z biologických vzorků na kolonkách pro extrakci na pevné fázi rozdělené podle typu sorbentu. Extrakce na pevné fázi byla testována na čtyřech kolonkách pro reverzní fázi, která se prokázala jako nejúčinnější metoda za použití kolonky Strata X 60 mg/3 ml, 33 µm (Phenomenex, USA). Extrakce na pevné fázi byla optimalizována také pomocí alternativních metod za použití dvou kolonek s iontovou výměnou a jedné s normální fází, které se ukázaly jako nevhodné pro cílenou analýzu eikosanoidů. Zvolená metoda extrakce na kolonkách Strata X 60 mg/3 ml, 33 µm (Phenomenex, USA) byla použita pro separaci frakce eikosanoidů ve vzorku gonadálního tuku myši. Eikosanoidy byly analyzovány pomocí kapalinové chromatografie, kde byly testovány mechanismy separace pomocí tří kolonek Kinetex o různých délkách (50 mm, 100 mm, 150 mm), účinná...
|
|
|
Analýza degradace účinných látek historických léčivých přípravků
Vašíčková, Pavla ; Nesměrák, Karel (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Cílem diplomové práce bylo analyzovat změny ve složení historických léčivých přípravků z let 1930-1997. Účinné látky těchto přípravků zahrnovaly opiáty a alkaloidy, léčiva byla ve formě tablet a injekčních roztoků. Byla studována přítomnost účinných látek a jejich degradačních produktů. Téměř u všech účinných látek byl stanoven jejich obsah. Měření bylo prováděno pomocí RP-HPLC s hmotnostní detekcí. Pomocí MS/MS byly navrženy fragmentace jednotlivých složek. Některé účinné látky prokázaly i po letech vysokou stabilitu (kodein, ethylmorfin, theobromin), zatímco jiné se zcela rozložily (acetyldemethyldihydrothebain).
|
|
|
Moderní trendy ve vysokoúčinné kapalinové chromatografii a jejich aplikace
Kozlík, Petr
(CZ) Dizertační práce se zabývá významnými trendy ve vysokoúčinné kapalinové chromatografii. Jedním z těchto trendů je miniaturizace separačních systémů ve spojení s vysokou citlivostí detekce nebo charakterizace a aplikace nových typů stacionárních fází pro separaci polárních látek v systémech vhodných pro hmotnostní detekci, tedy stacionárních fází pro hydrofilní interakční kapalinovou chromatografii (HILIC). Pro stanovení pěti estrogenních polutantů ve vzorcích vod byla vyvinuta miniaturizovaná metoda, tedy metoda kapilární kapalinové chromatografie s tandemovou hmotnostní spektrometrií (cLC-MS/MS). Bylo testováno několik nových sorpčních materiálů pro extrakci tuhou fází (SPE) s ohledem na výtěžnost extrakce. Nejlepší výtěžnosti (95 - 100 %) bylo dosaženo na kolonce Discovery DSC-18Lt. Optimalizovaná SPE-cLC-MS/MS metoda umožňuje stanovení jednotlivých estrogenů ve vzorcích vody v jednotkách až desítkách ng/l. V HILIC módu byly charakterizovány a porovnány tři stacionární fáze - silikagelová, cyklofruktanová a isopropyl cyklofruktanová. Bylo zjištěno, že na cyklofruktanových stacionárních fázích se uplatňuje vodíková interakce a disperzní síly. U silikagelové fáze jsou tyto interakce méně významné. Ukázalo se, že modifikace silikagelu cyklofruktanem a derivatizovaným cyklofruktanem vede ke...
|
|
|
Analýza obranných látek potápníků (Dytiscidae) metodou ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie s hmotnostní detekcí
Bosáková, Tereza ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Nesměrák, Karel (oponent)
Obranný sekret potápníků (Dytiscidae) produkovaný jejich prothorakálními žlázami obsahuje řadu steroidních látek. Pro analýzu obranného sekretu potápníka druhu Ilybius fenestratus byla využita ultra- vysokoúčinná kapalinová chromatografie ve spojení s detekcí diodovým polem a hmotnostní detekcí. Analýza methanolického extraktu sekretu probíhala na koloně Acquity BEH C18 za podmínek gradientové eluce s dvousložkovou mobilní fází tvořenou methanolem s 0,1% obsahem amoniaku a 0,1% vodným roztokem amoniaku. V sekretu byla zjištěna přítomnost dvou steroidních hormonů, a to boldenonu a testosteronu a jejich identifikace byla potvrzena na základě shody jejich retenčních časů i hmotnostních spekter s příslušnými standardy.
|
|
|
Srovnání citlivosti bezkontaktní vodivostní detekce a přímé UV detekce při elektroforetickém stanovení N-acetylaminosacharidů
Malý, Michal ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Tato práce se zabývá vývojem a optimalizací metody separace N-acetylglukosaminu a jeho dimeru a tri- meru kapilární zónovou elektroforézou s využitím bezkontaktní vodivostní detekce. Bylo zjištěno, že sepa- race a detekce těchto látek je možná, pokud je jako pracovní elektrolyt použit hydroxid sodný, použití jiných elektrolytů jako hydrogenfosforečnanu sodného mělo za následek nepřijatelně vysoký šum základní linie. Optimální podmínky pro provedení separace byly při koncentraci pracovního elektrolytu 40 mmol dm−3 a pracovním napětí 15 kV. Metoda je velmi citlivá na pH pracovního elektrolytu a použitý pracovní elektrolyt způsobuje rychlou degradaci kapiláry. Z těchto důvodů je obtížné spolehlivě provést kalibraci. Vyvinutá metoda byla porovnána s již existující metodou pro separaci těchto analytů využívající UV detekci. Exis- tující metoda má v porovnání s vyvinutou metodou nižší meze detekce a stanovitelnosti a je méně citlivá na pracovní podmínky. Meze detekce a stanovitelnosti vyvinuté metody jsou 34 µmol dm−3 , respektive 104 µmol dm−3 , meze detekce a stanovitelnosti metody využívající UV detekci jsou 7 µmol dm−3 , respek- tive 21 µmol dm−3 . Uvedené meze stanovitelnosti jsou uvedeny pro analyt, pro který byla detekce nejméně citlivá, v obou případech šlo o dimer. Výhodou vyvinuté metody proti...
|
|
| |
|
|
Spektrofotometrické stanovení chondroitinsulfátu technikou sekvenční injekční analýzy
Hrubá, Lucie ; Hraníček, Jakub (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Tato diplomová práce se zabývá optimalizací stanovení chondroitin sulfátu sekvenční injekční analýzou za spektrofotometrické detekce. Reakce probíhá za přítomnosti fenothiazinových kationtových barviv (azur A, azur B a methylenová modř) a měří se pokles absorbance barviv v jejich absorpčním maximu po přidání chondroitin sulfátu (CS). Byly nalezeny optimální podmínky pro toto stanovení: koncentrace barviv 5 10-5 mol dm-3 , dávkovaný objem 100 µl CS+ 50 µl barviva + 100 µl CS, reakční čas 0 s a průtoková rychlost 40 µl s-1 . Pro stanovení CS ve statickém uspořádání bylo zjištěno, že nejnižší meze detekce a stanovitelnosti bylo dosaženo při použití methylenové modře (LOD = 0,23 mg l-1 a LOQ = 0,76 mg l-1 ). Pro toto barvivo bylo dosaženo i nejlepší opakovatelnosti a to 2,4 %. Ovšem nejcitlivější bylo stanovení s použitím azuru A. Pro stanovení CS v SIA uspořádání bylo dosaženo nejnižší meze detekce a stanovitelnosti u azuru A (LOD = 0,34 mg l-1 a LOQ =1,01 mg l-1 ), opakovatelnost byla taktéž nejlepší 1,9 %. Jako nejcitlivější metoda se projevilo stanovení s použitím azuru B Na základě těchto poznatků byl chondroitin sulfátu stanoven v potravinových doplňcích, kde se ukázala jako vhodnější metoda kalibrační přímky. Stanovení bylo provedeno i v přítomnosti interferujících látek a to chloridu sodného a...
|
|
|
Moderní trendy ve vysokoúčinné kapalinové chromatografii a jejich aplikace
Kozlík, Petr ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Cajthaml, Tomáš (oponent)
(CZ) Dizertační práce se zabývá významnými trendy ve vysokoúčinné kapalinové chromatografii. Jedním z těchto trendů je miniaturizace separačních systémů ve spojení s vysokou citlivostí detekce nebo charakterizace a aplikace nových typů stacionárních fází pro separaci polárních látek v systémech vhodných pro hmotnostní detekci, tedy stacionárních fází pro hydrofilní interakční kapalinovou chromatografii (HILIC). Pro stanovení pěti estrogenních polutantů ve vzorcích vod byla vyvinuta miniaturizovaná metoda, tedy metoda kapilární kapalinové chromatografie s tandemovou hmotnostní spektrometrií (cLC-MS/MS). Bylo testováno několik nových sorpčních materiálů pro extrakci tuhou fází (SPE) s ohledem na výtěžnost extrakce. Nejlepší výtěžnosti (95 - 100 %) bylo dosaženo na kolonce Discovery DSC-18Lt. Optimalizovaná SPE-cLC-MS/MS metoda umožňuje stanovení jednotlivých estrogenů ve vzorcích vody v jednotkách až desítkách ng/l. V HILIC módu byly charakterizovány a porovnány tři stacionární fáze - silikagelová, cyklofruktanová a isopropyl cyklofruktanová. Bylo zjištěno, že na cyklofruktanových stacionárních fázích se uplatňuje vodíková interakce a disperzní síly. U silikagelové fáze jsou tyto interakce méně významné. Ukázalo se, že modifikace silikagelu cyklofruktanem a derivatizovaným cyklofruktanem vede ke...
|
|
|
Chirální a achirální separace na připravené β-cyklodextrinové koloně, porovnání s komerční β-cyklodextrinovou kolonou
Procházková, Hana ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Předkládaná bakalářská práce je zaměřena na přípravu nové chirální stacionární fáze dynamickým "coatingem" PEMPDA-β-cyklodextrinu (N1 , N1 , N3 , N3 , N3 - pentametylpropan-1,3-diamin-β-cyklodextrin) na iontově výměnnou stacionární fázi, otestování separačních schopností a selektivity této kolony na chirální i achirální sadě analytů, zjištění stability připravené kolony a porovnání separačních vlastností s komerční β-cyklodextrinovou chirální stacionární fází (kolona Astec Cyclobond I 2000). Sada testovaných chirálních analytů byla tvořena pěti strukturně odlišnými analyty - lorazepam, oxazepam, BNP, HDDP a Cl-HDDP. Sada testovaných směsí achirálních analytů byla tvořena šesti skupinami, z nichž každá obsahovala strukturně podobné analyty. Pro analýzu byl použit reverzní separační mód vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Mobilní fáze byly tvořeny metanolem a 10mM octanovým pufrem o pH 4,00 v různých objemových poměrech. Na připravené PEMPDA-β-cyklodextrinové chirální stacionární fázi byly nalezeny podmínky pro separaci na základní linii pro enantiomery oxazepamu a pět směsí achirálních analytů. Částečná separace byla pozorována u dvou chirálních analytů (HDDP a Cl-HDDP) a jedné směsi achirálních analytů. Při použití kolony Astec Cyclobond I 2000 byly nalezeny podmínky pro separaci na základní...
|
host ::
RSS.