Název:
Role dvou lysinů v transmembránové doméně lidského P2Y12 receptoru a vliv na vazbu agonistů
Překlad názvu:
Role of two lysine amino acid residues in transmembrane regions in agonist recognition of the human P2Y12 receptor
Autoři:
Ćwierz, Jan ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent) Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok:
2011
Jazyk:
eng
Abstrakt: [eng][cze] Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmacology and Toxicology Candidate: Jan Ćwierz Supervisors: Prof. Dr. med. Ivar von Kügelgen Doc. PharmDr. Petr Pávek, Ph.D. Title of diploma thesis: Role of two lysine amino acid residues in transmembrane regions in agonist recognition of the human P2Y12 receptor Human P2Y12 receptor expressed on platelets plays a key role in their physiological function. It importantly participates in maintenance of normal haemostasis and is often targeted by antiplatelet medication, such as clopidogrel. Replacement of amino acid residues responsible for ADP binding, which is a naturally occurring negatively charged agonist, can lead to impaired ligand-receptor interaction. Aim of this work was to study the role of two lysine amino acid residues in the position 173 and 174 of the P2Y12 receptor protein and subsequent changes in 2-methylthio-ADP binding. Two positively charged lysine amino acid residues were substituted with neutral residue alanine. Receptor expression in Chinese hamster ovary was analyzed by immunofluorescence staining and laser scanning confocal microscopy. Subsequently, the wild-type receptor and three mutant variants (K173A, K174A and K173A/K174A) were examined by means of 2-methylthio-ADP-induced responses in...Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Kandidát: Jan Ćwierz Školitelé: Prof. Dr. med. Ivar von Kügelgen Doc. PharmDr. Petr Pávek, Ph.D. Název: Úloha dvou lysinových aminokyselin v transmembránových regionech lidského P2Y12 receptoru v rozpoznání agonisty. Lidský receptor P2Y12 exprimovaný na krevních destičkách hraje klíčovou úlohu v jejich fyziologické funkci. Význačně se podílí na zachování normální hemostázy a je často cílem protidestičkové léčby, jako je podávání clopidogrelu. Nahrazení aminokyselin zodpovědných za vazbu ADP, což je negativně nabitý endogenní agonista, může vést ke snížené interakci mezi ligandem a receptorem. Cílem práce bylo studovat roli dvou lysinových aminokyselin na pozici 174 a 173 aminokyselinového řetězce receptoru P2Y12 a následné změny jeho vazebného místo pro rozpoznávání 2-MeSADP. V rámci mé diplomové práce byly dva lysinové řetězce nesoucí kladný náboj nahrazeny neutrálním alaninem. Míra exprese receptorů v CHO buňkách byla analyzována pomocí imunofluorescenčního proteinu a konfokální mikroskopie. Přirozená (wild-type) a tři mutantní varianty receptoru (K173A, K174A and K173A/K174A) byly následně zkoumány s využitím standardní reportérové eseje. Exprese luciferázy byla stimulována pomocí...