|
|
Study of properties of voltage membrane sensor ASAP1 expressed in HEK293 cell line
Jablonská, Dominika ; Čmiel, Vratislav (referee) ; Svoboda, Ondřej (advisor)
This thesis deals with the problematice of measuring membrane potential and monitoring the propagation of electrical activity of cells. For this purpose, fluorescence membrane voltage sensors have been developed to detect changes in the membrane potential by changing their fluorescence intensity. The practical part is focused on the study of the properties of the ASAP1 fluorescence probe, which was transfected into the HEK293 cell line, which are kidney cells from the human embryo. Cell membrane potential was changed using the patch-clamp technique.
|
|
| |
|
|
Preparation of the human NK cell receptor KACL
Nový, Jiří ; Vaněk, Ondřej (advisor) ; Moserová, Michaela (referee)
NK buňky neboli přirození buněční zabíječi jsou důležitou součástí imunitního systému organismů. Jejich specifickou vlastností je to, že dokážou rozeznat a zneškodnit některé nádorové buňky a buňky infikované virem bez jakéhokoliv předchozího signálu. Jejich funkce je závislá na aktivitě povrchových stimulačních a inhibičních receptorů, které se aktivují interakcí s ligandy na povrchu cílových buněk. Interakce lidského NK receptoru NKp65 a ligandu KACL je velmi specifická, což potvrzuje velmi vysoká afinita interakce, která je oproti jiným příbuzným komplexům až 400× vyšší. O tomto komplexu je zatím známo jen málo informací, ale je jisté, že se účastní imunitních procesů v kůži, neboť KACL je produkován výhradně keranocyty. Náplní této bakalářské práce byla příprava rozpustné formy receptoru KACL za pomoci rekombinantní exprese proteinů v lidských embryonálních ledvinných buňkách s homogenní glykosylací (linie HEK293S GnTI- ). Protein byl následně charakterizován gelovou chromatografií a SDS elektroforézou. Správné zapojení čtyř cysteinů do dvou disulfidických můstků bylo ověřeno hmotnostní spektrometrií. S připraveným proteinem KACL bylo zahájeno strukturní studium metodou krystalizace proteinů.
|
|
|
Production of auxin transporter PIN1 in HEK293 cell line
Petermannová, Romana ; Vaněk, Ondřej (advisor) ; Hýsková, Veronika (referee)
PIN1 protein belongs to a PIN family of transporters. This group of transporters is significantly involved in auxin transports outside of the cell. The auxin transport among plant cells gives an important role in plant growth, gravitropism, etc. The principle of auxin transport by this carrier protein is still not explored. This work deals with the production of PIN1 carrier protein by recombinant expression in human embryonic kidney 293 cell line. Production in these cells was checked by the accumulation of radioactive auxin and by the immunofluorescence.
|
|
|
Study of properties of voltage membrane sensor ASAP1 expressed in HEK293 cell line
Jablonská, Dominika ; Čmiel, Vratislav (referee) ; Svoboda, Ondřej (advisor)
This thesis deals with the problematice of measuring membrane potential and monitoring the propagation of electrical activity of cells. For this purpose, fluorescence membrane voltage sensors have been developed to detect changes in the membrane potential by changing their fluorescence intensity. The practical part is focused on the study of the properties of the ASAP1 fluorescence probe, which was transfected into the HEK293 cell line, which are kidney cells from the human embryo. Cell membrane potential was changed using the patch-clamp technique.
|
guest ::
