|
|
Úloha monocytů a nespecifické imunity v diabetu
Zinková, Alžběta ; Daňková, Pavlína (vedoucí práce) ; Novota, Peter (oponent)
Úvod: Diabetes mellitus je polygenní onemocnění, na jehož vzniku se určitou měrou podílí i environmentální faktory. Vrozená imunita spouští nespecificky první obranné reakce po proniknutí patogenu do organismu, zároveň však nadměrná stimulace složek vrozené imunity může zapříčinit vznik autoimunitních onemocnění, mezi které patří i diabetes 1. typu. Složkami vrozené imunity jsou kromě jiných i Toll-like receptory (TLRs) patřící do skupiny struktur rozeznávajících konzervované molekulární struktury charakteristické pro patogeny. Toll-like receptory jsou hojně exprimovány monocyty, které produkují prolaktin (PRL) mající imunostimulační funkci. Pro objasnění role přirozené imunity v patogenezi diabetu jsme sledovali expresi mRNA i proteinu TLR2 a TLR4. Expresi PRL jsme sledovali pouze na úrovni mRNA. Monocyty jsme pomocí průtokové cytometrie rozdělili na klasické (CD14++) a neklasické (CD14+) a sledovali jejich procentuální zastoupení a míru exprese CD14 antigenu na jejich povrchu. Dílčím cílem této diplomové práce byla optimalizace stimulací monocytů pro plánovanou studii funkce mimohypofyzárního prolaktinu in vitro a určení vhodnosti využití buffy coatů zdravých dárců jako zdravé kontroly. Materiál a metody: Pro sledování exprese mRNA PRL, TLR2 a TLR4 bylo do studie zahrnuto 30 pacientů s...
|
|
|
Role of toll-like receptors and stress hormone prolactin in defects of immune system
Sluková, Veronika ; Daňková, Pavlína (vedoucí práce) ; Hušáková, Markéta (oponent)
Úvod: Diabetes mellitus je polygénne ochorenie, na ktorého vývin majú vplyv taktiež enviromentálne faktory. My sme skúmali spojitosť prolaktínu (PRL) a toll-like receptorov (TLR) 2 a 4 s autoimunitným typom diabetu. PRL je produkovaný najmä hypofýzou, ale v malých koncentráciách aj na periférii, kde sa podieľa aj na imunitných reakciách. Skúmali sme preto vplyv hladín mRNA monocytárneho PRL na vývin diabetu, a tiež vplyv G alely polymorfizmu -1149 G/T v mimohypofýzovom promotore, ktorá už bola asociovaná s inými autoimunitnými ochoreniami. TLRs sú receptory imunitných buniek rozoznávajúce patogény vstupujúce do tela a zastávajú dôležitú úlohu v iniciácii imunitnej odpovede. Detekciou hladín ich mRNA a proteínov na bunečnom povrchu monocytov sme sa snažili zistiť ich úlohu v patogenézii autoimunitného typu diabetu. Materiál a metódy: Do štúdie bolo zahrnutých celkom 30 T1D a 21 LADA pacientov. Tri kontrolné skupiny tvorilo 23 T2D pacientov, 23 pacientov s nediabetickým ochorením (neDM) a 60 zdravých darcov krvi (TO). Jedincom boli odobraté krvné vzorky, z ktorých sme následne izolovali DNA na genotypizáciu SNP -1149 G/T pomocou RFLP, mRNA z monocytov na analýzu hladín expresie PRL, TLR2 a TLR4 pomocou real-time PCR, a mononukleárne bunky, z ktorých sme vďaka značeniu protilátkami proti TLR2, TLR4 a...
|
|
|
Význam periferního prolaktinu a vrozené imunitní reakce v těžkých imunopatologických stavech.
Chromá, Věra ; Daňková, Pavlína (vedoucí práce) ; Gabalec, Filip (oponent)
Úvod: Komunikace mezi neuroendokrinním a imunitním systémem je mimo jiné zprostředkována hormony a cytokiny a to jak endokrinní, tak i parakrinní a autokrinní cestou. Jedním z těchto činitelů je i prolaktin, adenohypofyzární hormon, ale i imunitní cytokin. Sepse je systémová reakce na zánět, zprostředkovaná Th1 imunitní odpovědí, která je podporovaná i prolaktinem. Prvotní ochranu při sepsi zprostředkovává vrozená imunita. Toll- like receptory rozpoznávají molekuly, které jsou spojeny s patogeny a po tomto rozpoznání příslušného patogenu zahajují imunitní reakce s cílem ho zneškodnit a obnovit rovnováhu organismu. Předpokládá se, že v organismu těžce napadeném patogenem se zvyšuje genová exprese PRL, TLR2 a TLR4. Tyto hodnoty jsme sledovali u septických pacientů. Hodnotili jsme také vliv jednonukleotidového polymorfismu PRL -1149 G/T jednak na fyziologickou expresi PRL mRNA, a jednak na míru exprese v průběhu sepse. Materiál a metody: Pro tuto studii byly jako materiál použity vzorky krve 43 septických pacientů a 40 zdravých kontrol. Krev septických pacientů byla odebrána celkem třikrát s určitým časovým rozestupem, krev kontrol pouze jednou. Pro určení exprese mRNA PRL, TLR2 a TLR4 byla použita polymerázová řetězová reakce v reálném čase s fosfoglycerát-kinázou 1 jako endogenní kontrolou. Metodou...
|
|
|
Vrozená imunita a cirkulující monocyty - význam a funkce v patogenezi celiakie.
Němečková, Iva ; Daňková, Pavlína (vedoucí práce) ; Palová Jelínková, Lenka (oponent)
8 Abstract Introduction: Celiac disease is indentified as the loss of oral tolerance to gluten, it is an organ-specific autoimmune disease in which both, adaptive and innate immunity participate. Monocytes are important part of immune system; they have many functions and express very diverse membrane receptors including Toll-like receptors (TLRs). TLRs are involved in the innate immune response, specifically TLR2 and TLR4 are crucial for recognition of bacterial components and TLR7 recognizes virus's ssRNA. Monocytes also produce prolaktin (PRL), which acts as a cytokine that modulates immune responses. To clarify the role of innate immunity and circulating monocytes in pathogenesis of celiac disease, we focused on changes in expression of selected Toll-like receptors (TLR2, TLR4, TLR7), prolactin, some pro- a anti-inflammatory cytokines (TNF-α, IL-6, IL-12, IL-10). We monitored the influence of the SNP - 1149 G/T on the expression of PRL mRNA. Another objective of this work was the introduction and optimization of in vitro methods for cultivation and stimulation of peripheral monocytes. Material and Methods: This pilot study includes 21 patients with celiac disease and 40 healthy controls. For determination of mRNA levels of the studied genes we isolated RNA from monocytes that were isolated by...
|
|
|
Imunogenetické a hormonální predispoziční markery systémových revmatických onemocnění,zejména systémového lupus erythematodu
Fojtíková, Markéta ; Pavelka, Karel (vedoucí práce) ; Hrnčíř, Zbyněk (oponent) ; Rovenský, Jozef (oponent)
Fojtikova2011 ÚVOD: V multifaktoriální etiopatogenezi systémových revmatických chorob je nezbytná genetická vnímavost. PRL je účinný imunomodulátor, který podporuje rozvoj autoimunity. CÍLE PRÁCE: 1. Zjistit imunogenetický background, HLA II. a I. třídy a alely mikrosatelitového polymorfismu transmembránové části exonu 5 genu MIC-A (dále MIC-A), u SLE a PsA. 2. Zjistit, zda PRL v séru a synoviální tekutině ovlivňuje klinický a laboratorní průběh RA. 3. Zjistit, zda se funkční polymorfismus -1149 G/T SNP mimohypofyzárního promotoru PRL genu podílí na rozvoji a fenotypu SLE, RA, PsA, SSc a zánětlivých myopatií. METODIKA: Genetické analýzy u souborů nemocných se SLE (n=156), RA (n=173), PsA (n=100), SSc (n=75), PM (n=47) a DM (n=68) a 123 zdravých jedinců: PCR-SSP (HLA I. a II. třídy), PCR-fragmentační analýza (MIC-A) a PCR-RFLP (-1149 G/T SNP PRL). Detekce PRL v séru a synoviální tekutině u 29 RA a 26 OA pomocí radioimunometrické analýzy. VÝSLEDKY: 1. Rizikové imunogenetické markery SLE v české populaci jsou alela HLA-DRB1*03 (pc = 0.008; OR 2.5) a haplotyp HLA-DRB1 *03-DQB1*0201 (pc <0.001;OR 4.54). Frekvence MIC-A5.1 je vyšší u SLE než u zdravých (pc =0.005; OR 1.88). MIC-A5.1 spolu s HLA-DRB1*03 výrazně zvyšuje riziko SLE, pc <0.000001; OR 9.71. Alela HLA-Cw*0602 je častější u PsA s psoriázu I....
|
|
|
Význam prolaktinu jako periferního cytokinu u dysbalance imunitního systému
Janatová, Kateřina ; Černá, Marie (vedoucí práce) ; Holáň, Vladimír (oponent)
Úvod: Interakce mezi neuroendokrinním a imunitním systémem hrají klíčovou roli v udržení homeostáze organismu. Tato komunikace je zprostředkována cytokiny, neurotransmitery a hormony a působí endokrinní, parakrinní a autokrinní cestou. Prolaktin (PRL), adenohypofyzární hormon, je produkován i řadou jiných tkání a také buňkami imunitního systému. Na periferii PRL působí jako cytokin. Sepse je zánětlivá odpověď organismu na těžkou infekci, zprostředkovaná Th1 imunitní odpovědí na jejíž aktivaci by se mohl podílet i PRL. Toll-like receptory (TLR) jsou klíčové pro rozpoznání bakteriálních komponent a zprostředkovávají systémovou odpověď (se sekrecí PRL) během infekce. Předpokládá se, že aktivace imunitního systému vede ke zvýšení genové exprese TLR2, TLR4 a PRL v monocytech. Zaměřili jsme se tedy na detekci hladin mRNA PRL, TLR2 a TLR4 v monocytech pacientů s celkovým zánětem. Sledovali jsme i vliv jednonukleotidového polymorfismu (SNP -1149 G/T)) v promotoru genu pro PRL, kde se v případě alely G předpokládá vliv na zvýšení exprese PRL. Materiál a Metody: Do pilotní studie bylo zahrnuto 30 pacientů s těžkou infekční epizodou. Pacientům byly krevní vzorky odebrány celkem třikrát, a to v určitých časových intervalech. V kontrolní skupině bylo 40 zdravých jedinců. Od nich bylo odebráno po jednom krevním...
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
host ::
RSS.