|
|
Using of modern molecular methods for isolation and identification of ligninolytic enzymes
Řiháček, Martin
Ligninolytické enzymy jsou schopné degradovat strukturu ligninu. Tohoto efektu se dá využít v různých průmyslech (potravinářský průmysl, textilní průmysl, zemědělství atd.), protože to může nahradit obvyklé chemické procesy. Houba bílé hniloby Phanerochaete chryosporium je známa produkcí těchto enzymů. Bakalářská práce pojednává o identifikaci a charakterizaci chování enzymů lignin peroxidázy, lakázy, mangan peroxidázy produkované touto houbou rostoucí v kapalném médiu při různých koncentracích síranu měďnatého (0, 0.1, 0.5 a 1 mM). Pro izolaci DNA a RNA bylo použito kapalné medium PDB, ve kterém houba rostla po dobu 5 dnů. Pro experimentálcí část byla použita běžná polymerázová řetězová reakce (PCR), reverzně transkripční PCR a kvantitativní rea-time PCR. Amplifikované produkty po běžné PCR byly očištěny a odeslány na sekvenování, aby se potvrdilo, jak se různé isoformy těchto enzymů vyvíjí při stresových podmínkách způsobené přídavkem síranu měďnatého o různých koncentracích. Navíc byla ještě měřena enzymatická aktivita těchto enzymů po dobu 32 dnů. 1 mM koncentrace síranu měďnatého v kapalném médiu ovlivnila transkripci genů, kódující ligninolytické enzymy, produkcí jejich isoforem. Kromě toho, byla při této koncentraci také pozorována vyšší genová exprese těchto 3 genů: lakáza, mangan peroxidáza a lignin peroxidáza při srovnání s kontrolními vzorky. Na druhou stranu, nejlepší podmínky pro produkci těchto enzymů byly pozorovány pro lignin peroxidázu a mangan peroidázu při koncentraci 0.5 mM a pro lakázu 1 mM CuSO4. Proto jsme schopni říct, že produkce těchto enzymů houbou Phanerochaete chrysosporium je ovlivněna vysokou koncentrací měďnatých iontů.
|
|
|
Aplikace ligninolytických hub na pevných substrátech pro degradace endokrinních disruptorů
Slavíková - Amemori, Anna ; Cajthaml, Tomáš (vedoucí práce) ; Gabriel, Jiří (oponent)
V současnosti je mezi látkami vypouštěnými člověkem do životního prostředí věnována velká pozornost tzv. endokrinním disruptorům (ED). Jde o látky schopné narušovat hormonální systém organismů včetně člověka. V různých studiích bylo zjištěno jejich nedostatečné odbourávání na čistírnách odpadních vod, čímž se dostávají do vodních toků, kde mohou poškozovat vodní organismy. Mezi zkoumanými alternativními metodami pro odbourávání ED na čistírnách odpadních vod se jeví jako perspektivní využívání ligninolytických hub. Ty jsou díky svým enzymům s nízkou substrátovou specifitou schopné rozkládat různé aromatické polutanty podobné svou strukturou ligninu. V této diplomové práci byla zkoumána schopnost růstu a produkce ligninolytických enzymů u čtyř vybraných ligninolytických hub na pevných organických substrátech (komerční slámové pelety, topolové piliny smíchané se slámovými peletami, dubové piliny smíchané se slámovými peletami), které by mohly představovat vhodný substrát pro růst hub v houbových bioreaktorech pro čištění odpadních vod, a schopnost těchto enzymů degradovat čtyři běžné ED v pokusu in- vitro. Jako nejlépe degradující houba na tomto typu substrátů byl stanoven Trametes versicolor, který byl schopen zdegradovat během 24 hodin pod mez kvantifikace 20 μg/ml bisfenolu A, 17...
|
host ::
RSS.