|
|
Izolace a identifikace DNA probiotických bakterií v komplexních matricích
Balogová, Petra ; Horák, Daniel (oponent) ; Rittich, Bohuslav (vedoucí práce)
V dnešní době jsou hojně využívány v potravinářském průmyslu probiotické bakterie mléčného kvašení (BMK) a bifidobakterie. Tvoří mikroflóru gastrointestinálního traktu. Mohou být do organismu dodávané jako potravinové doplňky. Nejnovější metody identifikace bakterií mléčného kvašení a bifidobakterií jsou založeny na analýze DNA s využitím amplifikačních metod. Nejvíce se využívá polymerázová řetězová reakce (PCR). Cílem diplomové práce bylo využití rodově a druhově specifických PCR pro identifikaci kmenů rodu Lactobacillus a Bifidobacterium v komplexních matricích (6 potravinových doplňků: Zenflo, Linex Forte, Probian, Nutra Bona, GS Laktobacily Forte, Pangamin Bifi Plus). Do PCR směsi byla použita celková DNA izolovaná z tablet pomocí magnetických nosičů pokrytých karboxylovými skupinami. DNA byla izolována z hrubých lyzátů buněk. Při přípravě hrubých lyzátů bylo testováno množství lysozymu (3 mg/ml, 10 mg/ml) v lyzačním roztoku, délka inkubace s lysozymem při laboratorní teplotě (1,5 hod, 3 hod) a s proteinázou K a SDS při 55 °C (1 hod, 3 hod, přes celou noc). Izolovaná DNA byla detekována pomocí agarósové gelové elektroforézy a spektrofotometricky. Přítomnost bakteriální DNA byla ověřena v PCR .K identifikaci byly použity specifické primery pro rod Lactobacillus, Bifidobacterium a druhy Lb. acidophilus, Lb. casei/paracasei, Lb.rRhamnosus, Lb. Plantarum, B. animalis, B. bifidum, B. infantis, B. longum. U třech probiotických preparátů (Zenflo, Linex Forte a Pangamin Bifi Plus) byla prokázána shoda PCR produktů s deklarovanými údaji. U ostatních probiotických tablet (Probian, Nutra Bona, GS Laktobacily Forte) byla shoda jen na úrovni rodů.
|
|
|
Izolace a identifikace DNA probiotických bakterií v komplexních matricích
Balogová, Petra ; Horák, Daniel (oponent) ; Rittich, Bohuslav (vedoucí práce)
V dnešní době jsou hojně využívány v potravinářském průmyslu probiotické bakterie mléčného kvašení (BMK) a bifidobakterie. Tvoří mikroflóru gastrointestinálního traktu. Mohou být do organismu dodávané jako potravinové doplňky. Nejnovější metody identifikace bakterií mléčného kvašení a bifidobakterií jsou založeny na analýze DNA s využitím amplifikačních metod. Nejvíce se využívá polymerázová řetězová reakce (PCR). Cílem diplomové práce bylo využití rodově a druhově specifických PCR pro identifikaci kmenů rodu Lactobacillus a Bifidobacterium v komplexních matricích (6 potravinových doplňků: Zenflo, Linex Forte, Probian, Nutra Bona, GS Laktobacily Forte, Pangamin Bifi Plus). Do PCR směsi byla použita celková DNA izolovaná z tablet pomocí magnetických nosičů pokrytých karboxylovými skupinami. DNA byla izolována z hrubých lyzátů buněk. Při přípravě hrubých lyzátů bylo testováno množství lysozymu (3 mg/ml, 10 mg/ml) v lyzačním roztoku, délka inkubace s lysozymem při laboratorní teplotě (1,5 hod, 3 hod) a s proteinázou K a SDS při 55 °C (1 hod, 3 hod, přes celou noc). Izolovaná DNA byla detekována pomocí agarósové gelové elektroforézy a spektrofotometricky. Přítomnost bakteriální DNA byla ověřena v PCR .K identifikaci byly použity specifické primery pro rod Lactobacillus, Bifidobacterium a druhy Lb. acidophilus, Lb. casei/paracasei, Lb.rRhamnosus, Lb. Plantarum, B. animalis, B. bifidum, B. infantis, B. longum. U třech probiotických preparátů (Zenflo, Linex Forte a Pangamin Bifi Plus) byla prokázána shoda PCR produktů s deklarovanými údaji. U ostatních probiotických tablet (Probian, Nutra Bona, GS Laktobacily Forte) byla shoda jen na úrovni rodů.
|
host ::
RSS.