|
|
Příprava neprosinu I - unikátní kyselé proteasy s potenciálem pro použití ve strukturní biologii, proteomice a terapii glutenových intolerancí.
Pelechová, Kamila ; Man, Petr (vedoucí práce) ; Šmídová, Aneta (oponent)
Proteasy se vyskytují napříč všemi říšemi, od virů a mikroorganismů po rostliny a živočichy, včetně lidí. Pro živé organismy jsou nezbytné. Degradují proteiny na peptidy a jednotlivé aminokyseliny, což umožňuje organismům lépe vstřebávat živiny. Zároveň plní funkci regulátoru - kontrolují buněčný cyklus, jsou zodpovědné za přeměnu prekurzorů na biologicky aktivní látky, jsou součástí signalizačních kaskád. Díky svým vlastnostem jsou proteasy využívány pro terapeutické účely a nalézají uplatnění i v průmyslu a výzkumu. Tato práce se zabývá produkcí rekombinantně připraveného neprosinu - nově objevené prolyl-endopeptidasy izolované z masožravých rostlin Nepenthes ventrata. Jedná se o kyselou proteasu s potenciálem pro využití ve strukturní biologii, proteomice a medicíně. Díky své schopnosti štěpit především C-koncové prolinové zbytky se neprosin stává slibnou možností pro enzymovou terapii celiakie.
|
|
|
Příprava a využití proteas vhodných ke studiu struktury proteinů.
Jirečková, Barbora ; Man, Petr (vedoucí práce) ; Vaňková, Pavla (oponent)
Vodík/deuteriová výměna spojená s hmotnostní spektrometrií (HDX-MS) je metoda, která umožňuje studium struktury a dynamiky proteinů. Pro lokalizaci této výměny je do HDX-MS zařazena proteolýza analyzovaného proteinu, která určuje prostorové rozlišení. Standardně se používá pepsin, který má ale své limitace, a také štěpení pouze jednou proteasou často neposkytuje optimální prostorové rozlišení. V několika publikacích byl akcentován význam alternativních proteas nepenthesinu-2 (Nep-2) a aspergillopepsinu (XIII), které oproti pepsinu štěpí za bazickými aminokyselinami. Při studiu na prolin bohatých proteinů získává význam prolyl endoproteasa z Aspergillus niger (AnPEP). Tato práce se zabývá charakterizací imobilizovaného AnPEPu v kombinaci s proteasami pepsinem, aspergillopepsinem nebo Nep-2 za účelem jejich aplikace v HDX-MS. Nejprve byly na sadě modelových proteinů otestovány kolony s pouze jednou proteasou. Bylo zjištěno, že imobilizovaný AnPEP oproti ostatním proteasám nemá optimální štěpné charakteristiky. Za účelem spojení výhod výše uvedených proteas byly modelové proteiny štěpeny pomocí kolon s AnPEP koimobilizovaným s pepsinem, Nep-2 nebo XIII a také pomocí dvou proteasových kolon v sériovém zapojení (vždy AnPEP kolona s pepsinovou, Nep-2 nebo XIII kolonou v obou směrech). V rámci štěpení...
|
|
|
Eukaryotické exprese kyselých proteas.
Vodolánová, Lucie ; Man, Petr (vedoucí práce) ; Pavlíček, Jiří (oponent)
Nepenthesin I a neprosin jsou kyselé proteasy, které se přirozeně vyskytují v trávicích šťávách masožravých rostlin rodu Nepenthes. Oba enzymy jsou syntetizovány jako zymogeny, které jsou aktivovány v kyselém prostředí. Díky svým vlastnostem a štěpným preferencím jsou vhodné pro studium proteinů pomocí hmotnostní spektrometrie či jako doplněk bezlepkové diety při celiakii. Protože v trávicích šťávách rostlin Nepenthes se vyskytují v nízké koncentraci a prokaryotický expresní systém nevykazoval uspokojivé výsledky, je snaha o nalezení vhodnějšího expresního systému pro produkci jejich rekombinantních forem, který by produkoval enzymy se stejnými vlastnostmi jako ty přírodní a zároveň poskytoval vysoké výtěžky. Cílem této práce je příprava expresních vektorů s geny nepenthesinu I a neprosinu pro transfekci do eukaryotických expresních systémů buněk S2 a HEK 293. Klíčová slova: kyselé proteasy, nepenthesin I, neprosin, expresní vektory
|
|
|
Eukaryotické exprese kyselých proteas.
Vodolánová, Lucie ; Man, Petr (vedoucí práce) ; Pavlíček, Jiří (oponent)
Nepenthesin I a neprosin jsou kyselé proteasy, které se přirozeně vyskytují v trávicích šťávách masožravých rostlin rodu Nepenthes. Oba enzymy jsou syntetizovány jako zymogeny, které jsou aktivovány v kyselém prostředí. Díky svým vlastnostem a štěpným preferencím jsou vhodné pro studium proteinů pomocí hmotnostní spektrometrie či jako doplněk bezlepkové diety při celiakii. Protože v trávicích šťávách rostlin Nepenthes se vyskytují v nízké koncentraci a prokaryotický expresní systém nevykazoval uspokojivé výsledky, je snaha o nalezení vhodnějšího expresního systému pro produkci jejich rekombinantních forem, který by produkoval enzymy se stejnými vlastnostmi jako ty přírodní a zároveň poskytoval vysoké výtěžky. Cílem této práce je příprava expresních vektorů s geny nepenthesinu I a neprosinu pro transfekci do eukaryotických expresních systémů buněk S2 a HEK 293. Klíčová slova: kyselé proteasy, nepenthesin I, neprosin, expresní vektory
|
|
|
Příprava neprosinu I - unikátní kyselé proteasy s potenciálem pro použití ve strukturní biologii, proteomice a terapii glutenových intolerancí.
Pelechová, Kamila ; Man, Petr (vedoucí práce) ; Šmídová, Aneta (oponent)
Proteasy se vyskytují napříč všemi říšemi, od virů a mikroorganismů po rostliny a živočichy, včetně lidí. Pro živé organismy jsou nezbytné. Degradují proteiny na peptidy a jednotlivé aminokyseliny, což umožňuje organismům lépe vstřebávat živiny. Zároveň plní funkci regulátoru - kontrolují buněčný cyklus, jsou zodpovědné za přeměnu prekurzorů na biologicky aktivní látky, jsou součástí signalizačních kaskád. Díky svým vlastnostem jsou proteasy využívány pro terapeutické účely a nalézají uplatnění i v průmyslu a výzkumu. Tato práce se zabývá produkcí rekombinantně připraveného neprosinu - nově objevené prolyl-endopeptidasy izolované z masožravých rostlin Nepenthes ventrata. Jedná se o kyselou proteasu s potenciálem pro využití ve strukturní biologii, proteomice a medicíně. Díky své schopnosti štěpit především C-koncové prolinové zbytky se neprosin stává slibnou možností pro enzymovou terapii celiakie.
|
host ::
RSS.