|
|
Vliv analogů hemu na strukturu a konformační stabilitu cytochromu b5
Maroušková, Růžena ; Martínek, Václav (vedoucí práce) ; Hudeček, Jiří (oponent)
Cytochrom b5 je součástí systému oxidas se smíšenou funkcí (MFO systému), který se podílí na metabolismu řady endogenních i exogenních látek. Jeho funkce je úzce spjata s dalším významným enzymem tohoto systému - cytochromem P450. Cílem této bakalářské práce bylo prozkoumat, jak analogy hemu ovlivňují strukturu a konformační stabilitu cytochromu b5. Ke studiu byla použita v laboratoři dosud nezavedená metoda - pulzní proteolýza, která využívá štěpení proteinu v různých koncentracích močoviny. Protein byl štěpen nespecifickou proteasou thermolysinem, která je aktivní i v prostředí s vysokou koncentrací močoviny. Pro studium stability cyt b5 byly připraveny holoformy cytochromu b5 obsahující hem a jeho analogy, kde jsou místo železitých iontů vázány ionty Mn3+ , Cr3+ či Co3+ . Analogy cytochromu b5 byly připraveny pomocí titrace apoformy cytochromu b5 heminem a jeho analogy. Pulzní proteolýza byla provedena i s apoformou cytochromu b5 a výsledky byly vyhodnoceny za použití elektroforézy v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti dodecylsulfátu sodného. Klíčová slova: elektroforéza, proteolýza, cytochrom b5, stabilita.
|
|
|
Vliv analogů hemu na strukturu a konformační stabilitu cytochromu b5
Maroušková, Růžena ; Martínek, Václav (vedoucí práce) ; Hudeček, Jiří (oponent)
Cytochrom b5 je součástí systému oxidas se smíšenou funkcí (MFO systému), který se podílí na metabolismu řady endogenních i exogenních látek. Jeho funkce je úzce spjata s dalším významným enzymem tohoto systému - cytochromem P450. Cílem této bakalářské práce bylo prozkoumat, jak analogy hemu ovlivňují strukturu a konformační stabilitu cytochromu b5. Ke studiu byla použita v laboratoři dosud nezavedená metoda - pulzní proteolýza, která využívá štěpení proteinu v různých koncentracích močoviny. Protein byl štěpen nespecifickou proteasou thermolysinem, která je aktivní i v prostředí s vysokou koncentrací močoviny. Pro studium stability cyt b5 byly připraveny holoformy cytochromu b5 obsahující hem a jeho analogy, kde jsou místo železitých iontů vázány ionty Mn3+ , Cr3+ či Co3+ . Analogy cytochromu b5 byly připraveny pomocí titrace apoformy cytochromu b5 heminem a jeho analogy. Pulzní proteolýza byla provedena i s apoformou cytochromu b5 a výsledky byly vyhodnoceny za použití elektroforézy v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti dodecylsulfátu sodného. Klíčová slova: elektroforéza, proteolýza, cytochrom b5, stabilita.
|
host ::
RSS.