|
|
Studium role konformace N-konce řetězce B insulinu ve vazbě na insulinový receptor
Kosinová, Lucie ; Žáková, Lenka (vedoucí práce) ; Obšil, Tomáš (oponent)
Insulin je významný peptidový hormon slinivky břišní. Jeho základní funkcí v organismu je regulace vstupu molekul glukosy do buněk, čímž ovlivňuje metabolismus sacharidů a následně i proteinů a lipidů. Nedostatek insulinu, ať už částečný nebo úplný, vyvolává komplexní onemocnění diabetes mellitus. Podle Mezinárodní diabetologické federace (IDF) žilo v roce 2012 na naší planetě 371 milionů lidí ve věku 20-79 let trpících touto chorobou. Diabetes se tak stává celosvětovým zdravotně sociálním problémem a důležitost jeho výzkumu stále roste. Při interakci insulinu s insulinovým receptorem dochází v molekule insulinu ke konformačním změnám, ke kterým patří i přechod N-konce řetězce B insulinu mezi stavem T a R. Význam těchto dvou konformací nebyl doposud objasněn a zůstává předmětem intenzivního výzkumu. V této práci bylo celkovou chemickou syntézou připraveno celkem pět nových insulinových analogů - AibB3-insulin, AibB5-insulin, AibB8-insulin, D-ProB8- insulin a N-MeAlaB8-insulin. Všechny analogy byly připraveny za účelem získání informací, které by mohly přispět k objasnění významu konformací T a R insulinu a jejich úlohy při interakci insulinu s insulinovým receptorem. Kyselina α-aminoisomáselná byla použita z důvodu její výjimečné schopnosti silně indukovat šroubovicovou strukturu v peptidovém...
|
|
|
Syntéza a charakterizace AibB8LysB28ProB29-insulinu za účelem studia významu T a R konformací insulinu
Kosinová, Lucie ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Flegel, Martin (oponent)
Souhrn Ve své bakalářské práci jsem celkovou chemickou syntézou připravila nový analog insulinu - AibB8LysB28ProB29-insulin. Tento analog byl připraven za účelem objasnění významu T a R konformací insulinu a jejich úlohy při interakci insulinu s receptorem. Aminokyselina Aib byla v pozici B8 použita z důvodu její schopnosti silně indukovat šroubovicové struktury v peptidových řetězcích. Prolin a lysin v pozicích B28 a B29 byly zaměněny z důvodu snížení schopnosti analogu vytvářet dimery a hexamery. Metodou syntézy na pevné fázi byl připraven insulinový řetězec A a modifikovaný insulinový řetězec AibB8LysB28ProB29-B. Surové A a B řetězce byly po štěpení nejprve převedeny na S- sulfonáty, poté odsoleny gelovou chromatografií a následně purifikovány a izolovány pomocí preparativního provedení RP-HPLC. Řetězce byly spojeny rekombinační reakcí za vzniku nového insulinového analogu AibB8LysB28ProB29-insulinu. Tento nový analog byl opět přečištěn nejprve gelovou chromatografií a poté pomocí RP-HPLC. Oba řetězce i výsledný analog byly charakterizovány pomocí analytického provedení RP-HPLC a hmotnostní spektrometrií. Nakonec byla stanovena vazebná afinita AibB8LysB28ProB29-insulinu k insulinovému receptoru. Hodnota jeho disociační konstanty ve srovnání s hodnotou disociační konstanty lidského insulinu vypovídá o...
|
|
|
Studium role konformace N-konce řetězce B insulinu ve vazbě na insulinový receptor
Kosinová, Lucie ; Žáková, Lenka (vedoucí práce) ; Obšil, Tomáš (oponent)
Insulin je významný peptidový hormon slinivky břišní. Jeho základní funkcí v organismu je regulace vstupu molekul glukosy do buněk, čímž ovlivňuje metabolismus sacharidů a následně i proteinů a lipidů. Nedostatek insulinu, ať už částečný nebo úplný, vyvolává komplexní onemocnění diabetes mellitus. Podle Mezinárodní diabetologické federace (IDF) žilo v roce 2012 na naší planetě 371 milionů lidí ve věku 20-79 let trpících touto chorobou. Diabetes se tak stává celosvětovým zdravotně sociálním problémem a důležitost jeho výzkumu stále roste. Při interakci insulinu s insulinovým receptorem dochází v molekule insulinu ke konformačním změnám, ke kterým patří i přechod N-konce řetězce B insulinu mezi stavem T a R. Význam těchto dvou konformací nebyl doposud objasněn a zůstává předmětem intenzivního výzkumu. V této práci bylo celkovou chemickou syntézou připraveno celkem pět nových insulinových analogů - AibB3-insulin, AibB5-insulin, AibB8-insulin, D-ProB8- insulin a N-MeAlaB8-insulin. Všechny analogy byly připraveny za účelem získání informací, které by mohly přispět k objasnění významu konformací T a R insulinu a jejich úlohy při interakci insulinu s insulinovým receptorem. Kyselina α-aminoisomáselná byla použita z důvodu její výjimečné schopnosti silně indukovat šroubovicovou strukturu v peptidovém...
|
|
|
Syntéza a charakterizace AibB8LysB28ProB29-insulinu za účelem studia významu T a R konformací insulinu
Kosinová, Lucie ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Flegel, Martin (oponent)
Souhrn Ve své bakalářské práci jsem celkovou chemickou syntézou připravila nový analog insulinu - AibB8LysB28ProB29-insulin. Tento analog byl připraven za účelem objasnění významu T a R konformací insulinu a jejich úlohy při interakci insulinu s receptorem. Aminokyselina Aib byla v pozici B8 použita z důvodu její schopnosti silně indukovat šroubovicové struktury v peptidových řetězcích. Prolin a lysin v pozicích B28 a B29 byly zaměněny z důvodu snížení schopnosti analogu vytvářet dimery a hexamery. Metodou syntézy na pevné fázi byl připraven insulinový řetězec A a modifikovaný insulinový řetězec AibB8LysB28ProB29-B. Surové A a B řetězce byly po štěpení nejprve převedeny na S- sulfonáty, poté odsoleny gelovou chromatografií a následně purifikovány a izolovány pomocí preparativního provedení RP-HPLC. Řetězce byly spojeny rekombinační reakcí za vzniku nového insulinového analogu AibB8LysB28ProB29-insulinu. Tento nový analog byl opět přečištěn nejprve gelovou chromatografií a poté pomocí RP-HPLC. Oba řetězce i výsledný analog byly charakterizovány pomocí analytického provedení RP-HPLC a hmotnostní spektrometrií. Nakonec byla stanovena vazebná afinita AibB8LysB28ProB29-insulinu k insulinovému receptoru. Hodnota jeho disociační konstanty ve srovnání s hodnotou disociační konstanty lidského insulinu vypovídá o...
|
host ::
RSS.