|
|
Purifikace rekombinantních proteinů pomocí afinitní chromatografie
Zemek, Ondřej ; Mácha, Jaroslav (vedoucí práce) ; Hrdý, Ivan (oponent)
Izolace a purifikace rekombinantních proteinů je základním předpokladem pro studium jejich strukturních a funkčních vlastností. Mezi nejdůležitější metody, které jsou k tomuto účelu využívány patří afinitní chromatografie. V této práci jsou shrnuty v literatuře publikované vlastnosti a zkušenosti s využitím nejpoužívanějších afinitních tagů. Zde probrané tagy zahrnují:CBP, MBP, GST, polyhistidinové a polyargininové tagy, FLAG-tag, Strep-tag II a SpA a některé jejich modifikace. U jednotlivých tagů je probrán jejich původ a vlastnosti, vliv na formu a lokalizaci fúzního proteinu, způsob jeho vazby a eluce ze substrátu a možnosti jeho odstranění nebo využití v jiných metodách. Klíčová slova: afinitní chromatografie, rekombinantní protein, purifikace, afinitní tag
|
|
|
The use of RNA affinity tags in RNA biology
Vaškovičová, Michaela ; Svoboda, Petr (vedoucí práce) ; Drbal, Karel (oponent)
Molekuly RNA hrajú podstatnú úlohu v mnohých dôležitých procesoch v živých organizmoch. Mediátorové RNA nesú genetickú informáciu z DNA do miesta syntézy proteínov. RNA, ktoré nekódujú proteíny, majú mnoho špecializovaných funkcií v regulácii génovej expresie, zostrihu, transporte, lokalizácii, translácii a stabilite RNA. Ribozomálne a transferové RNA sú nevyhnutné pre transláciu proteínov, malé jadrové RNA sa podieľajú na zostrihu a malé jadierkové RNA modifikujú iné molekuly RNA. MikroRNA a malé interferujúce RNA sú nevyhnutnými regulátormi génovej expresie. Ďalšie nekódujúce RNA regulujú chromatín a transkripciu. RNA sa obvykle vyskytuje v ribonukleoproteínových (RNP) komplexoch, obsahujúcich rôzne proteíny, ktorých prítomnosť je nevyhnutná pre funkciu daného komplexu. Pochopenie interakcií medzi RNA a proteínmi a tiež zloženie RNP komplexu je kritickým bodom pri charakterizácii ich funkcií. Bežne používanou stratégiou štúdia RNP komplexov je značenie RNA tak, aby bolo možné izolovať, čistiť a analyzovať značené RNA spoločne s ich väzbovými partnermi. Značené RNP komplexy môžu byť následne podrobené ďalšiemu výskumu. V prvej časti svojej práce popisujem štyri základné stratégie značenia RNA, ktoré môžu byť použité na štúdium RNA a RNP komplexov. V druhej časti bližšie popisujem vlastnosti,...
|
|
|
Purifikace rekombinantních proteinů pomocí afinitní chromatografie
Zemek, Ondřej ; Mácha, Jaroslav (vedoucí práce) ; Hrdý, Ivan (oponent)
Izolace a purifikace rekombinantních proteinů je základním předpokladem pro studium jejich strukturních a funkčních vlastností. Mezi nejdůležitější metody, které jsou k tomuto účelu využívány patří afinitní chromatografie. V této práci jsou shrnuty v literatuře publikované vlastnosti a zkušenosti s využitím nejpoužívanějších afinitních tagů. Zde probrané tagy zahrnují:CBP, MBP, GST, polyhistidinové a polyargininové tagy, FLAG-tag, Strep-tag II a SpA a některé jejich modifikace. U jednotlivých tagů je probrán jejich původ a vlastnosti, vliv na formu a lokalizaci fúzního proteinu, způsob jeho vazby a eluce ze substrátu a možnosti jeho odstranění nebo využití v jiných metodách. Klíčová slova: afinitní chromatografie, rekombinantní protein, purifikace, afinitní tag
|
host ::
RSS.