|
|
Interakce amyloidu β s proteiny neuronálních membrán
Manová, Blanka ; Rudajev, Vladimír (vedoucí práce) ; Černá, Barbora (oponent)
Amyloid b (Ab) je výsledný produkt amyloidního štěpení jeho prekurzovového proteinu (APP) pomocí b a γ sekretáz. Dle amyloidní hypotézy je hlavní příčinou časných patogenetických událostí Alzheimerovy choroby (AD), která je dnes nejčastějším neurodegenerativním onemocněním na světě bez existence účinné léčby. Za hlavní patogenezi nemoci je považována ztráta synapsí, narušení plasticity neuronů a neurodegenerace. Amyloid b se může přímo vázat na membránu nebo zprostředkovávat poškození neuronů nepřímo za vzniku toxických zánětlivých mediátorů (reaktivních kyslíkových meziproduktů, NO, cytokinů) aktivací mikroglií a astrocytů. Ab se váže na různé receptory plazmatické membrány a také může přímo interagovat s buněčným povrchem a narušovat membránovou integritu nebo vytvářet selektivní kationtové kanály. Tato práce přibližuje klíčové interakce s membránami synapsí a mechanismy toxicity vyvolané amyloidem prostřednictvím receptorů.
|
|
|
Úloha buněčného prionového proteinu v buňkách imunitního systému
Havlík, Martin ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Pačes, Jan (oponent) ; Pačes, Jan (oponent)
Prionový protein (PrPC) je spojen především s původem transmisivních spongiformních encefalopatií (TSE), smrtelných onemocnění, jejichž molekulární podstatou je konverze buněčné formy proteinu PrPC na infekční formu PrPTSE. Ta je odolná vůči proteázám a běžným dekontaminačním metodám, hromadí se v tkáních a způsobuje degenerativní poškození centrální nervové soustavy. Potenciální fyziologická funkce PrPC v buňkách organismů zůstává nejasná, i když výzkumu tohoto tématu bylo v posledních letech věnováno značné úsilí. Exprese PrPC byla detekována především v nervových buňkách, vysoké hladiny proteinu se však vyskytují i v různých buňkách imunitního systému. Zatímco některé imunokompetentní buňky byly již široce zkoumány, jiné zůstávají z hlediska funkce PrPC nepoznány. PrPC zřejmě hraje roli při diferenciaci a aktivaci řady typů imunitních buněk, podílí se na regulaci produkce cytokinů a dalších imunitních procesů, ovlivňuje růst populace CD4+ T-buněk a také utváření sekundárních lymfatických orgánů. V této bakalářské práci byly shrnuty dosavadní poznatky z oblasti výzkumu úlohy PrPC v imunitních buňkách, jež je důležitý i z hlediska výzkumu diagnostiky a léčby prionových chorob. Klíčová slova: prionový protein, PrPC, PrPTSE, prionové choroby, imunitní systém, imunokompetentní buňky, fagocyty,...
|
|
|
Úloha exprese buněčného prionového proteinu v diferenciaci neuronálních buněčných linií
Kučerová, Johanka ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Janoušková, Olga (oponent)
Buněčný prionový protein PrPC je membránově vázaný glykoprotein, který se běžně vyskytuje u obratlovců, především v nervové soustavě, ale také například v buňkách gastrointestinálního traktu, v kostní dřeni, v pohlavních buňkách či v srdci. PrPC je zároveň nezbytným pro patogenezi prionových chorob, smrtelných onemocnění bez možnosti léčby. Patogenní izoforma PrPSc , vznikající změnou sekundární struktury PrPC , je základním stavebním kamenem infekční prionové částice, jenž se akumuluje v mozku postižených jedinců a tento děj je spojen s neurodegenerací. Samotná fyziologická úloha PrPC v organizmu však nebyla dosud objasněna, při vyřazení genu pro PrPC (PRNP), nebyl pozorován fenotypový rozdíl. Potencionální funkce PrPC jsou spojovány s anti-apoptotickými účinky, metabolismem iontů či ochranou před oxidačním stresem. Výsledky z poslední doby současně naznačují, že by PrPC mohl hrát důležitou roli v buněčné diferenciaci. V průběhu diferenciace by protein mohl mít vliv na vývoj a typizaci buněk, ovlivňovat průběh buněčného cyklu a podílet se na utváření nervové soustavy. Cílem této práce je zmapování míry dopadu snížení exprese PrPC na buněčnou diferenciaci a vlivu prionové infekce na diferenciaci neuronální buněčné linie (CAD 5), která je schopná propagovat priony. V rámci této práce byly porovnávány linie...
|
|
|
Úloha prionových proteinů u diferencujících buněk
Kučerová, Johanka ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Drbal, Karel (oponent)
Buněčný prionový protein (PrPC) je známý především svou patologickou izoformou PrPSc, označovanou jako infekční agens prionových onemocnění, mezi které patří bovinní spongiformní encefalopatie (BSE), klusavka či Creutzfeldt-Jakobova nemoc (CJD). Fyziologická úloha PrPC nebyla doposud objasněna, ale byla popsána jeho účast v regulaci apoptózy, funkci adhezivní molekuly, antioxidantu, či signální molekuly. Navzdory tomu nebylo prokázáno, že by u myší tento protein byl nezbytný pro jejich správný vývoj. Ukázal se však jako esenciální pro regeneraci hematopoetických kmenových buněk po expozici letálním zátěžovým podmínkám. Exprese PrPC může ovlivňovat proliferaci a diferenciaci tím, že pomáhá buňkám udržovat proliferační aktivitu, či zpomalovat spontánní diferenciaci. Množství proteinu pozitivně či negativně koreluje s expresí transkripční faktorů jako je např. Oct4 či Nestin, které jsou zásadní pro vývoj v embryogenezi. Exprese PrPC také reguluje přechod buňky z G1 fáze do S fáze buněčného cyklu. Tato bakalářská práce se zaměřuje na publikované výsledky, které zkoumají vliv PrPC na buněčnou proliferaci a diferenciaci.
|
|
|
Prionové proteiny a jejich interakce s těžkými kovy
Sedláčková, Eliška
Prionové proteiny jsou infekční glykoproteiny, které neobsahují nukleové kyseliny. Jejich specifická funkce v mozku však dosud není zcela objasněná. Konverze buněčné formy prionového proteinu (PrPC) na jeho patologickou izoformu (PrPSc) je považována za příčinu vzniku neurodegenerativních onemocnění. PrPC je glykoprotein, který interaguje s řadou dvojmocných kovových iontů, zejména s Cu2+ a Zn2+. Dalším proteinem, který má schopnost vázat kovy je i metalothionein (MT), který tvoří několik specifických forem. Z hlediska vzniku neurodegenerativních onemocnění je významná izoforma MT-3 obsažena v mozku. Jednou z funkcí MT-3 v mozku je účast na udržování optimální koncentrace kovových iontů. Cílem této práce bylo ověření přítomnosti exprese genů PrPC anebo MT-3 v bakteriálních buňkách E. coli. Dále jsme sledovali vliv přídavků kovů k bakteriální kultuře E. coli exprimující protein PrPC anebo MT-3. V závěru jsme se věnovali stanovení celkové koncetrace MT v bakteriálních buňkách E. coli exprimujících protein PrPC anebo MT-3. Veškerá stanovení proběhla v porovnání se standardním kmenem E. coli Bl21(DE3).
|
|
|
Detekce prionových proteinů a jejich interakce s kovy a metalothioneinem
Cardová, Alžběta
Prionová onemocnění vznikají konformační změnou buněčného prionového proteinu(PrPC) struktury alfa-helixu na jeho patologickou isoformu (PrPSc), která nabývá konformace beta-skládaného listu. Vlastnosti PrPC v mozku stále nejsou dostatečně prozkoumány, ale předpokládá se jeho afinita k iontům kovů. Dalším proteinem, který má kov-vázající vlastnosti je i metalothionein (MT). Mozkově specifická isoforma MT se nazývá MT-III a předpokládá se její účast na udržování koncentrace kovových iontů v mozku. Cílem této práce byla příprava rekombinantního buněčného prionového proteinu v E. coli. Dále využití tohoto proteinu k odhalení interakcí mezi ionty kovů(Cu, Zn), MT a PrPC pomocí metody diferenční pulzní voltametrie. Poslední část pak byla věnována stanovení hladiny MT-III v prion-infekčních a neinfekčních myších mozkových tkáních různých genotypů.
|
host ::
RSS.