|
|
Analýza fluorochinolonových antibiotik v půdě
Vdolečková, Monika ; Řezáčová, Veronika (oponent) ; Mravcová, Ludmila (vedoucí práce)
Diplomová práce se zabývala celosvětovým problémem výskytu léčiv v životním prostředím, konkrétně pak fluorochinolovými antibiotiky (ciprofloxacin a enrofloxacin), které mimo jiné patří mezi kriticky důležitá antibiotika. Tato léčiva se dostávají do půdního prostředí aplikací již kontaminovaného živočišného odpadu (např. hnůj) nebo prostřednictvím odpadní vody, která je využívána při zavlažování nebo také aplikací upravených čistírenských kalů, které mohou obsahovat rezidua léčiv. Zvyšující se koncentrace těchto léčiv antimikrobiálních látek v životním prostředí představuje prostředí pro vznik a rozšiřování mikrobiální rezistence. Kumulace těchto léčiv pak způsobuje vznik rezistencí na tato antibiotika. Experimentální část diplomové práce byla zaměřena na optimalizaci metody pro extrakci a následné stanovení fluorochinolonů v půdě a podestýlce. Za tímto účelem byly optimalizovány parametry týkající se výtěžnosti extrakce fluorochinolonů z půdní matrice, a to například navážka vzorku, výběr vhodného extrakčního média, provedení SPE, způsob eluce z SPE atd. V rámci optimalizace bylo dosaženo výtěžností extrakce 70 až 140 %. Na závěr byla použita optimalizovaná metoda pro extrakci fluorochinolonů ze vzorků podestýlky a půdy, které byly poskytnuty ÚKZÚZ. Výsledky experimentální práce potvrzují dlouhodobou perzistenci těchto léčiv v životním prostředí.
|
|
|
Využití metody LC/MS k analýze vybraných přírodních fyziologicky aktivních látek
Trčková, Marie ; Čáslavský, Josef (oponent) ; Kočí, Radka (vedoucí práce)
Předložená práce je zaměřena na aplikaci kombinované instrumentální metody RP-HPLC/ESI-MS a její možnosti využití v analýze vybraných skupin přírodních látek, které jsou známé svými pozitivními fyziologickými účinky. Tyto látky byly dále sledovány v běžných a hojně konzumovaných potravinách. Nově pak byly ve vzorcích identifikovány některé další sloučeniny, pro které nebyly dostupné standardní preparáty. Ze studie je patrné, že metoda HPLC/ESI-MS je poměrně výhodnou koncovkou pro stanovení velké řady polyfenolických sloučenin, zatímco k analýze karotenoidů by bylo vhodnější využít jiného typu ionizace.
|
|
|
Studium fenolických látek ve vybraných biologických materiálech s využitím metody LC/MS
Měřínská, Radana ; Zemanová, Jana (oponent) ; Kočí, Radka (vedoucí práce)
Předložená bakalářská práce se zabývá metodami vhodnými k analýze fenolických látek, jako jsou polyfenolické kyseliny či flavonoidy. V teoretické části byla provedena podrobná literární rešerše, která shrnuje především moderní instrumentální techniky běžně využívané ke stanovení polyfenolů. V experimentální části byly pak analyzovány vybrané standardní polyfenolické sloučeniny s využitím kombinované metody HPLC/ESI-MS s off-line a on-line detekcí. Spektra jednotlivých standardů i jejich směsí byla stanovena v režimu MS full scan a pomocí tandemové hmotnostní spektrometrie, a to v kladném i záporném módu. Byly identifikovány kvasi-molekulární ionty reserpinu (PI 609,9, NI 607,7), kyseliny chlorogenové (NI 353), kvercetinu (PI 303,5, NI 301,5), rutinu (PI 611, NI 609) a morinu (PI 303,1, NI 301,1). Produktové ionty pak byly získány štěpením v režimu MS/MS full scan. Jako charakteristické štěpy byly určeny u kyseliny chlorogenové čára s m/z 191 (NI), u kvercetinu 229,1 a 257,1 (PI) a 179,0 a 151 (NI), u rutinu 301,0 (NI) a u morinu 285,1 a 257,1 (PI) a 283,2, 273,2, 257,1, 229,1 (NI). Štěp rutinu 301 byl dále fragmentován pomocí MS3/full scan za vzniku fragmentů 179 a 151,1 (NI). V optimalizačním experimentu byly stanoveny podmínky vhodné pro HPLC separaci polyfenolů zahrnující gradientovou eluci a separační systém s chromatografickou kolonou Restek. Ve spojení LC/MS bylo stanoveno, že jedině on-line detekce v záporném módu vede k uspokojivým výsledkům ve stanovení polyfenolů.
|
|
|
Analýza fluorochinolonových antibiotik v půdě
Vdolečková, Monika ; Řezáčová, Veronika (oponent) ; Mravcová, Ludmila (vedoucí práce)
Diplomová práce se zabývala celosvětovým problémem výskytu léčiv v životním prostředím, konkrétně pak fluorochinolovými antibiotiky (ciprofloxacin a enrofloxacin), které mimo jiné patří mezi kriticky důležitá antibiotika. Tato léčiva se dostávají do půdního prostředí aplikací již kontaminovaného živočišného odpadu (např. hnůj) nebo prostřednictvím odpadní vody, která je využívána při zavlažování nebo také aplikací upravených čistírenských kalů, které mohou obsahovat rezidua léčiv. Zvyšující se koncentrace těchto léčiv antimikrobiálních látek v životním prostředí představuje prostředí pro vznik a rozšiřování mikrobiální rezistence. Kumulace těchto léčiv pak způsobuje vznik rezistencí na tato antibiotika. Experimentální část diplomové práce byla zaměřena na optimalizaci metody pro extrakci a následné stanovení fluorochinolonů v půdě a podestýlce. Za tímto účelem byly optimalizovány parametry týkající se výtěžnosti extrakce fluorochinolonů z půdní matrice, a to například navážka vzorku, výběr vhodného extrakčního média, provedení SPE, způsob eluce z SPE atd. V rámci optimalizace bylo dosaženo výtěžností extrakce 70 až 140 %. Na závěr byla použita optimalizovaná metoda pro extrakci fluorochinolonů ze vzorků podestýlky a půdy, které byly poskytnuty ÚKZÚZ. Výsledky experimentální práce potvrzují dlouhodobou perzistenci těchto léčiv v životním prostředí.
|
|
|
Metody sledování profilu karnitinových metabolitů v moči a jejich využití v klinické diagnostice
NOVÁKOVÁ, Martina
Tato práce se zabývá sledováním profilu karnitinových metabolitů v moči pacientek s diagnostikovanou rakovinou prsu. L-karnitin je látka velice významná pro metabolismus tuků, a proto některé současné výzkumy ukazují, že by mohl sloužit jako podpůrný prostředek pro léčbu rakoviny postihující různé orgány či tkáně. V teoretické části se práce zabývá obecnou charakteristikou a obecným popisem L-karnitinu a jeho účinkem na organismus. Tato část je rozdělena do kapitol, které shrnují různé informace o L-karnitinu a acylkarnitinech, například se zabývá metabolismem, dále různými účinky v organismu včetně popisu reakcí organismu na nedostatek těchto látek, či jakými metodami a z jakých biologických materiálů můžeme sledovat jejich hladinu. Metody sledování L-karnitinu jsou v práci popsány podrobněji a byly mezi sebou porovnávány na základě dříve publikovaných vědeckých výsledků. Autoři různých vědeckých prací uvádějí postupy a výhody či nevýhody jimi navržených metod pro stanovení L-karnitinu a acylkarnitinů, které byly v této práci podrobně zkoumány a analyzovány a na jejich základě byla navržena mnou prezentovaná metoda pro stanovení karnitinových metabolitů v moči. Závěrem této části je stručný popis nejčastěji používané metody pro stanovení karnitinových metabolitů, kterou je kapalinová chromatografie s hmotnostní detekcí (LC/MS). Pozitivní výsledky studií této metody mě motivovaly k použití této analytické metody i pro mou práci. Výzkumná část zahrnuje vlastní popis práce při přípravě vzorků a celkové nastavení parametrů důležitých pro provedení metody. Vzorky pro výzkum byly získány od pacientek s diagnostikovanou rakovinou prsu z českobudějovické nemocnice. V této části je také popsána úprava vzorků před detekcí, použité materiály, přístroje a chemikálie, a to včetně samotného postupu a nastavení přístroje pro analýzu. Metodou byly získány chromatografické záznamy jednotlivých látek a hmotnostní spektra, která byla jednotlivě zpracovávána pro každou látku zvlášť. Při detekci L-karnitinu a acylkarnitinů v moči pacientek s diagnostikovanou rakoviny prsu byly pro porovnání analyzovány i vybrané vzorky poskytnuté kontrolní skupinou zdravých žen, které nám umožnily sledovat možné rozdíly. Pro přehlednost a základní vhled byl sestaven graf, ve kterém je možné sledovat jen nepatrné rozdíly mezi hladinami karnitinových metabolitů u žen s rakovinou prsu versus kontrolní vzorky. Tento rozdíl není statisticky významný, a to zejména proto, že variabilita mezi jednotlivými jedinci je o řád vyšší než samotné rozdíly mezi sledovanými skupinami. Tento výsledek byl způsoben tím, že do studie nebyly zahrnuty další informace o pacientkách, jako například informace o jejich medikaci či zdravotním stylu, celkové kondici organismu atd. Podrobná studie těchto změn vyžaduje systematickou a časově velmi náročnou práci, která nebyla a ani nemohla být cílem mé bakalářské práce.
|
|
|
Využití metody LC/MS k analýze vybraných přírodních fyziologicky aktivních látek
Trčková, Marie ; Čáslavský, Josef (oponent) ; Kočí, Radka (vedoucí práce)
Předložená práce je zaměřena na aplikaci kombinované instrumentální metody RP-HPLC/ESI-MS a její možnosti využití v analýze vybraných skupin přírodních látek, které jsou známé svými pozitivními fyziologickými účinky. Tyto látky byly dále sledovány v běžných a hojně konzumovaných potravinách. Nově pak byly ve vzorcích identifikovány některé další sloučeniny, pro které nebyly dostupné standardní preparáty. Ze studie je patrné, že metoda HPLC/ESI-MS je poměrně výhodnou koncovkou pro stanovení velké řady polyfenolických sloučenin, zatímco k analýze karotenoidů by bylo vhodnější využít jiného typu ionizace.
|
|
|
Studium fenolických látek ve vybraných biologických materiálech s využitím metody LC/MS
Měřínská, Radana ; Zemanová, Jana (oponent) ; Kočí, Radka (vedoucí práce)
Předložená bakalářská práce se zabývá metodami vhodnými k analýze fenolických látek, jako jsou polyfenolické kyseliny či flavonoidy. V teoretické části byla provedena podrobná literární rešerše, která shrnuje především moderní instrumentální techniky běžně využívané ke stanovení polyfenolů. V experimentální části byly pak analyzovány vybrané standardní polyfenolické sloučeniny s využitím kombinované metody HPLC/ESI-MS s off-line a on-line detekcí. Spektra jednotlivých standardů i jejich směsí byla stanovena v režimu MS full scan a pomocí tandemové hmotnostní spektrometrie, a to v kladném i záporném módu. Byly identifikovány kvasi-molekulární ionty reserpinu (PI 609,9, NI 607,7), kyseliny chlorogenové (NI 353), kvercetinu (PI 303,5, NI 301,5), rutinu (PI 611, NI 609) a morinu (PI 303,1, NI 301,1). Produktové ionty pak byly získány štěpením v režimu MS/MS full scan. Jako charakteristické štěpy byly určeny u kyseliny chlorogenové čára s m/z 191 (NI), u kvercetinu 229,1 a 257,1 (PI) a 179,0 a 151 (NI), u rutinu 301,0 (NI) a u morinu 285,1 a 257,1 (PI) a 283,2, 273,2, 257,1, 229,1 (NI). Štěp rutinu 301 byl dále fragmentován pomocí MS3/full scan za vzniku fragmentů 179 a 151,1 (NI). V optimalizačním experimentu byly stanoveny podmínky vhodné pro HPLC separaci polyfenolů zahrnující gradientovou eluci a separační systém s chromatografickou kolonou Restek. Ve spojení LC/MS bylo stanoveno, že jedině on-line detekce v záporném módu vede k uspokojivým výsledkům ve stanovení polyfenolů.
|
|
|
Moč, její složení a vliv věku na její metabolický obraz
MENHART, Roman
Tato práce je zaměřená na sledování vlivu věku na složení moči. Korelace věku se složením moči byla zkoumána cíleným výzkumem čtyř vybraných analytů - kreatininu, acetylkarnitinu, karnitinu a alaninu u anonymizované skupiny lidí ve věku 15, 25, 35, 45 a 55 let. V teoretické části je obecně popsána anatomie a funkce ledvin, je zde definováno co je to moč, jaké organické a anorganické látky obsahuje. Popsány jsou faktory, které se podílejí na změnách složení moči, jako je index tělesné hmotnosti, barva pleti a především věk, který je hlavním předmětem zkoumání této práce. Dále jsou uvedeny metody používané v klinické praxi, ale i ve výzkumu, sloužící k analýze moči. Metodická část zahrnuje postupy odběru, uchování a předanalytické přípravy moči. Je zde uveden seznam všech chemikálií, pomůcek, vnitřních standardů, standardů a přístrojového vybavení, použitých pro přípravu a analýzu vzorků, a také popis HPLC/MS metody. Výstupní data z použité LC/MS metody byla zpracována v počítačovém programu XcaliburTM. Jedná se o chromatogramy a hmotnostní spektra kreatininu, acetylkarnitinu, karnitinu a alaninu získaných analýzou padesáti vzorků močí lidí různých věkových skupin, které proběhly ve třech opakováních. Pomocí tabulek a přehledných grafů byly zpracovány hodnoty ploch píků pro jednotlivé látky, které následně byly přepočítané na plochu píku kreatininu z důvodu jejich normalizace. Řešené téma je velice komplexní a nelze ho celé obsáhnout v rámci mé bakalářské práce.
|
|
| |
|
|
Lipidome LC/MS Analysis in the Insect Adaptation and Development Studies
TOMČALA, Aleš
Insects represent very useful experimental model in various branches of biological research. The investigation is driven by economic importance of many insect species, and also by biological features of insects as model organisms such as short period of reproduction, easy breeding and manipulation and, in particular, the minimal regulatory requirements which are associated to the management of vertebrates. Here we report robust and efficient LC/MS/MS methodology for the determination of the physiologically important lipid molecular species in insects. The target metabolites represent polar glycerophos-phopholipids (GPL) and nonpolar lipids diacylglycerols (DG) and triacylglycerols (TG). Combination of the LC/MS data with the subsequent GC fatty acid analysis enables complete structural elucidation of particular lipid species including their fatty acid compositions. The developed methodology was applied to studies of the chill tolerance of the firebug Pyrhocorris appterus. Fields and laboratory experiments were conducted to separate the triggering effects of low temperature, desiccation and diapause progression on the physiological characteristics related to chill tolerance with emphasis on the restructuring of GPL composition. The same effect on the GPL composition was observed during acclimatization in the field and cold acclimation in laboratory. By contrast, the GPL changes related to desiccation and diapause progression were relatively small (Tomčala et al, 2006). In adults of Drosophila melanogaster it has been found that acclimation at 15, 20 and 25°C during preimaginal development affects thermal tolerance and composition of membrane GPLs. Low temperature acclimation was associated with increase in proportion of ethanolamine at the expense of choline in GPLS. Relatively small, but statistically significant changes in lipid molecular compositon were observed with decreasing acclimation temperature (Overgard et al, 2008). Hormonal treatment studies on insect model Locusta migratoria showed a heterogeneous distribution of individual DGs in haemolymph after the hormone application and revealed that mobilization of the DGs is molecular species-specific with the highest proportion of DG 16:0/18:1 and forming in summary about 20% of the total mobilized DG content. Additional analysis of fat body triacylglycerols revealed that the AKH mobilizes the DGs specifically with the preference of those possessing the unsaturated C18 fatty acids (FAs). The fat body FAs with more than 18 carbons did not participate on the mobilization (Tomcala et al, 2009). The LC/MS methodology was further applied to lipid composition studies of several samples with very diverse biological origin (fish, human blood etc.) and was proved to be universally applicable to the wide scope of biological samples.
|
host ::
RSS.