|
|
Průtoková injekční analýza vybraných glykosaminoglykanů se spektrofluorimetrickou detekcí
Tichá, Renata ; Nesměrák, Karel (vedoucí práce) ; Rychlovský, Petr (oponent)
Diplomová práce se zabývá stanovením heparinu a chondroitin sulfátu technikou průtokové injekční analýzy se spektrofluorimetrickou detekcí. Stanovení je založeno na interakci negativně nabitého heparinu respektive chondroitin sulfátu s kationtovým barvivem (azur A nebo fenosafranin), která se projevuje poklesem intenzity fluorescence barviva v jeho emisním maximu. Byly nalezeny optimální podmínky stanovení ve statickém uspořádání a změřeny kalibrační závislosti. Byly optimalizovány podmínky FIA stanovení a zjištěny parametry: objem dávkovaného vzorku 100 μl, délka reakční cívky 60 cm, průtoková rychlost 0,7 ml min-1 , koncentrace azuru B 1,6×10-5 mol dm-3 , koncentrace fenosafraninu 3,5×10-5 mol dm-3 . Pro stanovení heparinu pomocí azuru B byl zjištěn LOD = 0,023 IU ml-1 a LOQ = 0,186 IU ml-1 s lineárním dynamickým rozsahem 0,19-1,43 IU ml-1 . Pro stanovení heparinu pomocí fenosafraninu byl zjištěn LOD = 0,102 IU ml-1 a LOQ = 0,192 IU ml-1 s lineárním dynamickým rozsahem 0,19-1,79 IU ml-1 . Pro stanovení chondroitin sulfátu pomocí azuru B byl zjištěn LOD = 0,58 mg dm-3 a LOQ = 2,37 mg dm-3 s lineárním dynamickým rozsahem 2,37-8,32 mg dm-3 . Vyvinutá stanovení byla aplikována na stanovení heparinu, resp. chondroitin sulfátu, v léčivých přípravcích. Klíčová slova Azur B Fenosafranin...
|
|
|
Příprava a charakterizace buněčných modelů lysosomálních dědičných onemocnění - mukopolysacharidos
Presová, Gabriela ; Dobrovolný, Robert (vedoucí práce) ; Dvořáková, Lenka (oponent)
Mukopolysacharidosy jsou skupinou nemocí, které patří mezi lysosomální střádavá onemocnění. Jedná se o vzácné monogenní multisystémové poruchy, jejichž společným znakem je mutace genu, která vede k deficitu lysosomálního enzymu účastnícího se degradace glykosaminoglykanů. Nedegradované glykosaminoglykany se pak akumulují v tkáních a orgánech, kde způsobují progresivní poškození. U většiny mukopolysacharidos není dostupný účinný způsob léčby, navíc je jejich výzkum komplikován nízkým výskytem v populaci a typem postihovaných tkání. Zvířecí modely těchto lidských onemocnění se využívají pro studium účinnosti nových terapeutických přístupů, mají však řadu omezení především kvůli mezidruhovým rozdílům v patogenezi a katabolických drahách akumulovaných substrátů, proto jsou v mnoha ohledech zastupovány lidskými buněčnými modely. V této práci je popsán vývoj buněčných modelů čtyř typů mukopolysacharidos (MPS IIID, MPS IVA, MPS IVB, MPS VI). Inaktivace genů souvisejících s těmito onemocněními (GNS, GALNS, GLB1, ARSB) bylo dosaženo technologií CRISPR/Cas9, při které jsou plasmidy obsahující specifické inserty dopraveny elektroporací do lidských indukovaných pluripotentních kmenových buněk (iPSC). Izolované klony představující iPSC modely zmíněných onemocnění byly charakterizovány Sangerovou sekvenační...
|
|
|
Průtoková injekční analýza vybraných glykosaminoglykanů se spektrofluorimetrickou detekcí
Tichá, Renata ; Nesměrák, Karel (vedoucí práce) ; Rychlovský, Petr (oponent)
Diplomová práce se zabývá stanovením heparinu a chondroitin sulfátu technikou průtokové injekční analýzy se spektrofluorimetrickou detekcí. Stanovení je založeno na interakci negativně nabitého heparinu respektive chondroitin sulfátu s kationtovým barvivem (azur A nebo fenosafranin), která se projevuje poklesem intenzity fluorescence barviva v jeho emisním maximu. Byly nalezeny optimální podmínky stanovení ve statickém uspořádání a změřeny kalibrační závislosti. Byly optimalizovány podmínky FIA stanovení a zjištěny parametry: objem dávkovaného vzorku 100 μl, délka reakční cívky 60 cm, průtoková rychlost 0,7 ml min-1 , koncentrace azuru B 1,6×10-5 mol dm-3 , koncentrace fenosafraninu 3,5×10-5 mol dm-3 . Pro stanovení heparinu pomocí azuru B byl zjištěn LOD = 0,023 IU ml-1 a LOQ = 0,186 IU ml-1 s lineárním dynamickým rozsahem 0,19-1,43 IU ml-1 . Pro stanovení heparinu pomocí fenosafraninu byl zjištěn LOD = 0,102 IU ml-1 a LOQ = 0,192 IU ml-1 s lineárním dynamickým rozsahem 0,19-1,79 IU ml-1 . Pro stanovení chondroitin sulfátu pomocí azuru B byl zjištěn LOD = 0,58 mg dm-3 a LOQ = 2,37 mg dm-3 s lineárním dynamickým rozsahem 2,37-8,32 mg dm-3 . Vyvinutá stanovení byla aplikována na stanovení heparinu, resp. chondroitin sulfátu, v léčivých přípravcích. Klíčová slova Azur B Fenosafranin...
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
host ::
RSS.