|
|
Vliv teploty a času na excystaci Cryptosporidium muris izolát CAT21
DUDÁKOVÁ, Hana
Hlavním cílem této diplomové práce bylo zjistit, zda má tělesná teplota hostitele, pH prostředí a doba expozice vliv na excystaci oocyst Cryptosporidium muris. Pro experiment byl použit izolát CAT21 získaný z přirozeně infikované kočky domácí (Felis catus f. domestica), ovšem primárním hostitelem Cryptosporidium muris jsou hlodavci. Izolát byl dlouhodobě udržován v imunodeficientních SCID myších, ze kterých byl průběžně odebírán trus, aby mohly být provedeny jednotlivé experimenty. Prvním zkoumaným faktorem ovlivňujícím excystaci oocyst byla tělesná teplota hostitele. Oocysty skladované v dH2O byly vkládané do vodní lázně vytemperované na teplotu v rozmezí 21 až 44 °C po dobu 5, 15 a 30 minut. Dle výsledků je optimální teplota pro excystaci oocyst C. muris CAT21 37 °C při době působení 30 minut, při které excystuje až 92 % oocyst. Do práce bylo zahrnuto navíc i zkoumání vlivu pH prostředí na excystaci, kdy byly oocysty vystavené působení roztoků PBS o různé hodnotě pH (2,00 -9,00) a zahřáté ve vodní lázni na 37 °C. Optimální pH prostředí pro excystaci je pH 6,00, při kterém excystovalo až 93 % oocyst. Životaschopnost používaných oocyst byla stanovena barvením pomocí propidium jodidu před každým měřením.
|
|
|
Diverzita, fylogenetika a biologie různých izolátů Cryptosporidium muris
HAVRDOVÁ, Nikola
Byly popsány morfologické, biologické a molekulární charakteristiky dvou různých izolátů Cryptosporidium muris, HZ206 a TS03. Oocysty C. muris TS03 o velikosti 7,77 ? 0,23 × 5,2 ? 0,08 ?m s indexem tvaru 1,48 ? 0,02 (n = 100) byly morfometricky delší a širší než C. muris HZ206 o velikosti oocyst 7,62 ? 0,40 × 6,63 ? 0,09 ?m, 1,32 ? 0,02 (n = 100), (p = 0,034). Oocysty obou izolátů C. muris TS03 a HZ206 získaných z přirozeně infikovaného hlodouna východoafrického (Tachyoryctes splendens) a myši domácí (Mus musculus musculus) byly infekční pro naivní 8-týdenní krysy malé (Mastomys coucha). Zatímco prepatentní doba C. muris TS03 se pohybovala v rozmezí 19-21 dní po infekci (DPI) a zvířata vylučovala oocysty až do konce experimentu (120 DPI), zvířata infikovaná HZ206 začala vylučovat oocysty 13-15 DPI s patentní periodou 63-112 DPI. Kumulovaná hodnota intenzity infekce (AUC) u zvířat infikovaných TS03 se pohybovala od 250.000.000 do 800.000.000 oocyst za patentní periodu (OPP) a u HZ206 v rozmezí 11.000.000- 35.000.000 OPP. Histologické vyšetření prokázalo masivní infekce kryptosporidií ve žlázovém epitelu žaludku. Histopatologické změny měly nezánětlivý charakter včetně výrazné dilatace infikovaných částí žláz s atrofií a metaplazií žlázových epiteliálních buněk. Infekce TS03 ovlivnila velikost žaludku. Zatímco fyziologická hmotnost žaludku u naivních a HZ206-infikovaných krys malých ve věku 12 týdnů byla v rozmezí 0,61 ? 0,06 g, respektive 0,70 ? 0,17 g, abnormální zvětšení žaludku bylo pozorováno u zvířat infikovaných izolátem TS03 (3,23 ? 0,51 g). Nebyl pozorován žádný vliv na příjem krmiva u testovaných skupin. Fylogenetickou analýzou genů kódujících malou podjednotku rRNA, aktin, MS1, MS2, MS3 a MS16 bylo zjištěno, že C. muris TS03 je geneticky odlišné od ostatních C. muris izolátů. Závěrem lze říci, že morfologické, genetické a biologické vlastnosti podporují popsání Cryptosporidium muris TS03 jako nový samostatný druh.
|
host ::
RSS.