|
|
Sérologická diagnostika borelióz
Sližová, Ivana ; Chmelař,, Dittmar (oponent) ; Lochman,, Ivo (vedoucí práce)
Cílem diplomové práce bylo srovnání výsledků sérologických metod pro diagnostiku borelióz prováděných rutinně v laboratořích Spadia Lab (ELISA, imunobloty) v kontextu s doporučeními, kdy a jak je indikovat a interpretovat jejich výsledky. Teoretická část je zaměřena na charakteristiku a historii boreliózy, mikrobiologickou charakteristiku borélií, imunitní systém ve vztahu k patogenezi onemocnění a na terapii a prevenci onemocnění. Experimentální část se zabývá analýzou výsledků získaných při rutinním vyšetřování protilátek proti boreliím v laboratořích Spadia Lab v období od 1. 1. 2014 do 31. 12. 2015. Podle doporučení CDC (Centrum pro kontrolu a prevenci chorob) byl u všech vzorků prováděn screening protilátek proti boreliím pomocí ELISA ve třídě IgM a IgG. V roce 2014 byl ELISA screening prováděn pomocí souprav firmy Euroimmun na procesorech vzorků EVOLIS, v roce 2015 byl screening prováděn pomocí souprav firmy DiaSorin na analyzátoru LIAISON. Pozitivní vzorky byly následně konfirmovány pomocí Westernblotu popř. lineblotu. ELISA i WesternBlot patří mezi sérologické metody, pomocí nichž se testují protilátky, tj. látky vytvořené imunitním systémem. Imunitní systém hraje klíčovou úlohu v ochraně organismu proti infekci a protilátky jsou jeho významným nástrojem. Sérologické metody, které patří mezi imunoanalytické metody, dnes ještě nelze standardizovat. Diagnózu a opatření vůči infekci také proto nelze dělat jen na základě vyšetření protilátek. Je nutné posuzovat výsledky v kontextu celého klinického obrazu, anamnézy a v případě protilátek se doporučuje opakovat vyšetření s časovým odstupem.
|
|
|
Problematika laboratorního vyšetření u onemocnění Lymeskou boreliózou
HAVLEOVÁ, Lucie
Lymeská borelióza je multisystémové infekční onemocnění přenášené nejčastěji klíšťaty rodu Ixodes. V České republice pak konkrétně klíšťaty Ixodes ricinus. Původcem tohoto onemocnění je komplex spirochetálních bakterií Borrelia burgdorferi sensu lato. Incidence onemocnění je poměrně vysoká a každoročně je v České republice hlášeno několik tisíc případů. Přestože jsou poznatky o lymeské borelióze v současné době poměrně rozsáhlé a nadále probíhá intenzivní výzkum, tak se názory odborníků na tuto problematiku stále vyvíjejí. Diagnostikovat lymeskou boreliózu je též poněkud obtížné. Zejména kvůli různorodým, někdy i nespecifickým klinickým příznakům, které často způsobují lékařům potíže ve stanovení správné diagnózy. Protože není doposud k dispozici účinná vakcína, jedinou možností, jak omezit riziko nákazy, je důsledná ochrana před klíšťaty. Tato práce se snaží shrnout současné poznatky o historii, etiologii, epidemiologii, patogenezi, klinickém průběhu, prevenci, terapii, a diagnostice lymeské boreliózy. Pacienti s podezřením na lymeskou boreliózu byli testováni pomocí dvoustupňového testu. Nejprve metodou ELISA a následně u pozitivních a hraničních pacientů konfirmační metodou Western blot. Výsledky mé práce potvrdily obecně známou skutečnost, že lymeská borelióza je infekce sezónního charakteru. Vyšší počet pozitivních vzorků v letních měsících souvisí se zvýšenou aktivitou klíšťat v tomto období. Velmi zajímavé jsou ale výsledky odkazující na složení pacientů podle věkových skupin a také rozdíly počtu nakažených podle pohlaví. Konkrétněji pak vyšší počet pozitivních vzorků u ženské populace.
|
|
|
Detekce perzistentních borelií \kur{Borrelia burgdorferi} sensu lato ve tkáních savců přeléčených antibiotiky
OPELKA, Jakub
Lymská borelióza je nejrozšířenější infekční choroba, jejímž vektorem jsou klíšťata komplexu Ixodes ricinus. Toto multiorgánové onemocnění je způsobené patogenními spirochétami z komplexu Borrelia burgdorferi sensu lato. Přestože lymská borelióza ještě není uznána jako nemoc přímo působící úmrtí pacienta, snižuje kvalitu života milionům lidí po celém světě. Všechny fáze lymské boreliózy jsou běžně léčeny antibiotiky doxycyklinem a amoxicilinem. V 10 - 20% případů příznaky onemocnění přetrvávají i po léčbě, ale většina praktických lékařů připisuje tyto příznaky psychosomatickým problémům. Výsledky této práce ukazují, že v tkáních savců po léčbě běžně předepisovanými antibiotiky podle lékařských protokolů stále existují perzistentní formy borrelií s frekvencí 0,16 - 0,3 jedinců na 1 mm3. Schopnost rekultivovat B. burgdorferi sensu lato z tkání myší léčených antibiotiky potvrdila jejich životaschopnost a naznačuje, že relaps infekce může být způsoben původní infekcí.
|
|
|
Příprava klonálních populací borelie ze severoamerických izolátů s cílem prokázání přítomnosti druhu borelie běžně se vyskytující v Evropě.
SMOLENOVÁ, Štěpánka
V současné době je popsáno 22 druhů spirochét komplexu Borrelia burgdorferi sensu lato. Tři z nich jsou obecně známé jako původce onemocnění lymeskou boreliózou u člověka v Evropě, a jsou to B. garinii, B. afzelii a B. burgdorferi sensu stricto. Ve Spojených státech amerických je za původce LB oficiálně uznána jen B. burgdorferi sensu stricto . B. garinii a B. afzelii jsou doposud považované za druhy rozšířené výhradně v Evropě. Nově ověřená metoda pěstování borelie na tvrdé půdě a její rozdělení na jednotlivé klony může vést k získání klonálních kultur spirochét a prokázání přítomností evropských druhů borelie na území Spojených států, čím by se potvrdila teorie přenosu spirochét přes oceán s migrujícími ptáky.
|
|
|
Potenciální antimikrobiální účinky vybraných přírodních látek
MAŠKOVÁ, Hana
This study was focused on potential antiviral and antibacterial effects of viniferin and some derivatives of adamantane. The most suitable concentration was determined using flow cytometer. The antiviral effect on tick-borne encephalitis virus infection in glioblastoma cells was determined. Virus concentration was determined using plaque assay. The antibacterial effect was detected by the incubation of bacterial strains with suitable concentration of selected natural substances. The rate of bacterial growth was determined using absorbance measurement at 600 nm and plating on agar plates.
|
|
|
Sérologická diagnostika borelióz
Sližová, Ivana ; Chmelař,, Dittmar (oponent) ; Lochman,, Ivo (vedoucí práce)
Cílem diplomové práce bylo srovnání výsledků sérologických metod pro diagnostiku borelióz prováděných rutinně v laboratořích Spadia Lab (ELISA, imunobloty) v kontextu s doporučeními, kdy a jak je indikovat a interpretovat jejich výsledky. Teoretická část je zaměřena na charakteristiku a historii boreliózy, mikrobiologickou charakteristiku borélií, imunitní systém ve vztahu k patogenezi onemocnění a na terapii a prevenci onemocnění. Experimentální část se zabývá analýzou výsledků získaných při rutinním vyšetřování protilátek proti boreliím v laboratořích Spadia Lab v období od 1. 1. 2014 do 31. 12. 2015. Podle doporučení CDC (Centrum pro kontrolu a prevenci chorob) byl u všech vzorků prováděn screening protilátek proti boreliím pomocí ELISA ve třídě IgM a IgG. V roce 2014 byl ELISA screening prováděn pomocí souprav firmy Euroimmun na procesorech vzorků EVOLIS, v roce 2015 byl screening prováděn pomocí souprav firmy DiaSorin na analyzátoru LIAISON. Pozitivní vzorky byly následně konfirmovány pomocí Westernblotu popř. lineblotu. ELISA i WesternBlot patří mezi sérologické metody, pomocí nichž se testují protilátky, tj. látky vytvořené imunitním systémem. Imunitní systém hraje klíčovou úlohu v ochraně organismu proti infekci a protilátky jsou jeho významným nástrojem. Sérologické metody, které patří mezi imunoanalytické metody, dnes ještě nelze standardizovat. Diagnózu a opatření vůči infekci také proto nelze dělat jen na základě vyšetření protilátek. Je nutné posuzovat výsledky v kontextu celého klinického obrazu, anamnézy a v případě protilátek se doporučuje opakovat vyšetření s časovým odstupem.
|
|
|
Citlivost spirochet Lymské boreliózy ke komplementu různých druhů zvířat chovaných v zoologických zahradách: potenciál rezervoárových hostitelů vybraných exotických obratlovců
TICHÁ, Lucie
Reakce komplementu obratlovců s různými druhy spirochet komplexu Borrelia burgdorferi sensu lato byla použita pro určení rezervoárových hostitelů mezi domácími a divokými zvířaty. Byla testována citlivost druhů Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia garinii a Borrelia afzelii k sérům exotických obratlovců z 5 různých zoologických zahrad v České republice. Byla potvrzena rozdílnost v citlivosti různých druhů borelií k hostitelským sérům. Zjistili jsme, že rozdíly v odolnosti k infekci boreliemi se lišily mezi jednotlivci stejného rodu nebo druhu a nebyly ovlivněny věkem ani pohlavím hostitele. Ze všech testovaných zvířat se jevili jako nejvhodnější rezervoároví hostitelé spirochet Lymské boreliózy šelmy. Ukázali jsme, že někteří exotičtí kopytníci jsou k nákaze boreliemi tolerantní. Jako první jsme prokázali vysokou toleranci k nákaze boreliemi u krokodýla siamského v porovnání s ostatními studovanými druhy plazů. Ikdyž exotičtí obratlovci, jako rezervoároví hostitelé, představují jen malé riziko pro Evropskou populaci, případy náhodné infekce mohou vést k úspěšnému namnožení patogenů v novém hostiteli a tím zároveň ovlivnit roli vybraných exotických druhů v šíření a přežívání patogenu. Otázka, jestli tolerance k patogenu přiřazuje status kompetentního rezervoárového hostitele, stále vyžaduje odpověď, jednoduše proto, že většina exotických zvířat se v přirozeném prostředí s těmito spirochétami nikdy nesetká.
|
|
|
Citlivost spirochet komplexu \kur{Borrelia burgdorferi} sensu lato k lidskému komplementu: infekční potenciál vybraných druhů
TICHÁ, Lucie
Byla provedena analýza citlivosti spirochet komplexu Borrelia burgdorferi sensu lato k lidskému komplementu pacientů různého věku a pohlaví. Stupeň mortality borelií po reakci s komplementem se lišil mezi vybranými druhy komplexu. Výsledky potvrdily, že věk hostitele nemá vliv na stupeň mortality borelií. Přesto byla pozorována nižší mortalita u borelií v ženském séru. Všech deset testovaných druhů borelií se ukázalo jako potenciálně infekční pro člověka. Testované druhy borelií lze podle našich výsledků rozdělit do dvou skupin: druhy s nízkou citlivostí ke komplementu (mortalita nižší než 1 procento) a druhy s vyšší citlivostí (mortalita přes 3-4 procenta).
|
|
| |
|
|
Příprava monoklonálních protilátek proti antigenům borelie
ŠVEJDOVÁ, Veronika
Ve své bakalářské práci se zaměřuji na přípravu monoklonálních protilátek proti antigenům borelie. V teoretické části bakalářské práce popisuji druhy rodu Borrelia a protilátky. V úvodu práce je pojednáno o historii objevu spirochéty způsobující onemocnění lymeská borelióza, dále o vektorech tohoto onemocnění a rozdělení borelií podle geografického výskytu. Následuje taxonomické zařazení a popis bakterie, který je zaměřený na bičíky, uspořádání genetického materiálu a na vnější povrchové antigeny důležité pro tyto bakterie. V další části popisuji vztah borelie, vektora a hostitele a průběh imunitní odpovědi při onemocnění. Podrobněji jsou popsány kožní příznaky onemocnění lymeská borelióza a pár slov o relabující horečce. Tato kapitola je zakončena popsáním laboratorní diagnostiky původce lymeské boreliózy Borrelia burgdorferi. Dále se zaměřuji na vznik protilátek přirozenou cestou a na přípravu monoklonálních protilátek hybridomovou technologií. Stručně popisuji jejich rozdělení a využití. Praktická část bakalářské práce byla uskutečněna v laboratořích Přírodovědecké fakulty Jihočeské univerzity. Zde jsem pomocí hybridomové technologie fúzí spojila myelomovou buňku se splenocytem imunizované myši za vzniku hybridomu. Tyto hybridomy jsem následně klonovala a kultivovala v mediu, které jsem testovala metodou ELISA na výskyt protilátek. Hybridomy s vysokou produktivitou byly zálohovány zmrazením v tekutém dusíku. Monoklonální protilátky jsem přečistila, zkoncentrovala a otestovala jejich titr.
|
host ::
RSS.