|
|
Role jaderných laminů a Nup358 v infekci polyomavirem BK
Išler, Lukáš ; Bruštíková, Kateřina (vedoucí práce) ; Němečková, Šárka (oponent)
Lidský polyomavirus BK (BKPyV) již dlouhá desetiletí způsobuje závažné zdravotní komplikace zejména imunokompromitovaným jedincům. Cílem této práce se bylo zaměřit jednak na průběh infekce BKPyV v lidských buňkách, tak také na vliv BK virové infekce na jadernou laminu a proteiny jaderného póru (NPC; Nuclear Pore Complex). Při charakterizaci a porovnání infekce BKPyV v buňkách RPTEC/hTERT1 a MRC- 5 jsme ukázali, že replikace BKPyV probíhá lépe a dosahuje 6x vyššího virového titru v buňkách RPTEC/hTERT1. Při použití konfokální mikroskopie jsme v průběhu infekce BKPyV nepozorovali tvorbu narušení jaderné laminy, ani akumulaci proteinu VP1 pod jadernou laminou, jak bylo dříve pozorováno při infekci myším polyomavirem. Ověřili jsme předešlé pozorování cytoplazmatických deposit NPC, které se vyskytovaly v kolokalizaci s proteinem VP1 24 hodin po infekci (hpi) BKPyV a ukázali, že složkou těchto deposit vyskytujících se v kolokalizaci s VP1 je Nup358, protein NPC. Transientní exprese vektorů kódujících pozdní oblast genomu BKPyV (pEF- BKV-late) či samotný protein VP1 (pIaW) ani analýza exprese LT antigenu nenaznačily, že by se jednalo o jev způsobený produktivní infekcí. Pseudoinfekce buněk RPTEC/hTERT1 VLP odvozenými z BKPyV naopak indukovala tvorbu cytoplazmatických shluků VP1, v 33 % případů i...
|
|
|
Nekódující kontrolní oblast genomu lidských polyomavirů
Pešek, David ; Saláková, Martina (vedoucí práce) ; Váňová, Jana (oponent)
Genom lidských polyomavirů sestává přibližně z 5000pb kruhové dvouřetězcové DNA a je rozdělován na tři funkční oblasti - časnou oblast (early viral gene region, EVGR) kódující regulační T antigeny a virové miRNA, nekódující kontrolní oblast (noncoding control region, NCCR) obsahující minimální cis-působící regulační sekvence, které jsou potřebné pro správný průběh virové replikace a pozdní oblast (late viral gene region, LVGR), který je zodpovědný za produkci strukturních kapsidových proteinů. Nekódující kontrolní oblast obsahuje minimální počátek replikace, který se vzájemně překrývá s promotory pro časnou i pozdní transkripci. Sekvence nekódující kontrolní oblasti zahrnují velké množství vazebných míst pro buněčné transkripční faktory, které mají schopnost regulovat expresi z LVGR a EVGR. V této práci byla popsána organizace nejvariabilnější oblasti polyomavirového genomu, NCCR, u polyomavirů SV40, BKPyV a JCPyV. V nekódující kontrolní oblasti často dochází k přestavbám, delecím, a dokonce i k bodovým mutacím, které mají dopad na expresi polyomaviru. Klíčová slova: polyomaviry, nekódující kontrolní oblast, BKPyV , JCPyV , SV40, velký T antigen, buněčné transkripční faktory
|
host ::
RSS.