|
|
Identification of novel mechanisms controlling emergency granulopoiesis in hematopoietic stem and progenitor cells
Vaníčková, Karolína ; Alberich Jorda, Meritxell (vedoucí práce) ; Zadražil, Zdeněk (oponent)
Granulocyty představují první linii obrany proti bakteriálním a houbovým patogenům. Zatímco bazální granulopoéza zajišťuje každodenní produkci granulocytů, ve stresových podmínkách, jako je bakteriální infekce, je zvýšená a urychlená produkce granulocytů zajišťována pohotovostní granulopoézou (PG). Velmi málo se ví o tom, jak je PG regulovaná. V této práci jsme ukázali, že signalizační dráha Wnt/β-katenin je zásadní pro aktivaci PG in vivo. Dále jsme ukázali, že stimulace pomocí lipopolysacharidu (LPS) aktivuje akumulaci aktivního -kateninu v hematopoetických kmenových a progenitorových buňkách (HKPB) již po 4 hodinách (H), největší nárůst jsme pozorovali 24H po stimulaci. Tuto aktivaci jsme pozorovali také in vitro, již 2H po LPS stimulaci c-Kit+ buněk, s největším nárůstem 4H po stimulaci. To dokazuje, že aktivace β-kateninu je alespoň částečně nezávislá na mikroprostředí kostní dřeně. Pomocí single cell RNA sekvenování jsme analyzovali dynamiku jednotlivých sub-populací HKPB 4H po LPS stimulaci. V jedné z populací jsme identifikovali možný aktivátor -kateninové signalizace - Wnt10b. Nárůst exprese Wnt10b jsme detekovali také při in vitro LPS stimulacích. Tento nárůst koreloval s aktivací -kateninu a nárůstem exprese Cebpb, hlavního regulátoru pohotovostní granulopoézy. Naše data tak ukazují...
|
|
|
Function and regulation of ETV4 and MSX1 transcription factors in colon cancer progression
Hrčkulák, Dušan ; Kříž, Vítězslav (vedoucí práce) ; Libusová, Lenka (oponent)
Rakovina tlustého střeva je jedním z nejčastěji diagnostikovaných nádorových onemocnění moderního světa a způsobí přibližně sedm procent všech úmrtí spojených s nádorovým bujením. Vzhledem k nízké účinnosti tradiční léčby je nutné se intenzivně zabývat molekulárními mechanismy vzniku tohoto onemocnění. Kanonická signální dráha ligandů Wnt je za fyziologických podmínek zásadní pro obnovu střevního epitelu, ale její přílišná aktivace vede ke vzniku nádorů. Přestože je tato signální dráha předmětem podrobného studia, její vliv a následný přenos signálu není ještě dokonale objasněn. Jako model pro výzkum nádorového bujení způsobeného nefyziologickou signalizací ligandů Wnt používáme myší kmen nesoucí mutovanou verzi proteinu APC, který v této signalizaci působí jako nádorový supresor. Předběžná expresní analýza nádorových buněk ze střeva zmiňované myši odhalila významné zvýšení exprese u dvou transkripčních faktorů: ETV4 a MSX1. V tomto projektu se snažíme potvrdit, že jsou tyto proteiny závislé na kanonické signalizaci ligandů Wnt a důležité pro rozvoj rakoviny tlustého střeva. Zkoumáme jejich regulaci a funkci pomocí luciferázových reportérů, qRT-PCR, imunohistochemie, in situ hybridizace, knockdown a knockout experimentů. Funkční studie provádíme také na buněčných liniích odvozených od kolorektálních...
|
|
|
Adjusting Wnt signaling, new regulatory mechanisms of the Wnt pathway
Fafílek, Bohumil ; Kořínek, Vladimír (vedoucí práce) ; Stopka, Tomáš (oponent) ; Machoň, Ondřej (oponent)
4 Souhrn Signální dráha zahajovaná proteiny Wnt řídí mnoho buněčných procesů během embryogeneze a v dospělém organismu se podílí na homeostáze a regeneraci tkání. Navíc její nefyziologická aktivace bývá často spojována s vznikem rakoviny, zejména karcinomu tlustého střeva. Cílem této práce bylo nalezení nových způsobů regulace signální dráhy Wnt, jež by vedly k hlubšímu pochopení její fyziologické i patologické aktivace. Výsledky, jež jsou pokladem této disertace, jsou shrnuty ve čtyřech publikacích. První článek představuje protein TROY z rodiny receptorů faktoru nekrotizujících nádory. TROY je cílový gen signální dráhy Wnt, který jsme nalezli, když jsme hledali geny deregulované aberantní Wnt signalizací v buněčných liniích kolorektálního karcinomu. Zvýšenou expresi genu Troy jsme detekovali také v nádorech dvou myších modelů střevní rakoviny. Ve zdravé střevní tkáni je gen Troy exprimován pouze v rychle se dělících střevních kmenových buňkách, kde negativně reguluje signální dráhu Wnt. Druhá studie se zaměřuje na post-translační modifikace myších proteinů Wnt1 a Wnt3a. Ligandy Wnt jsou modifikovány jednak cukernými komplexy a jednak dvěma zbytky mastných kyselin. Naše výsledky odhalili, že modifikace konzervovaného serinu zbytkem kyseliny palmitolejové je potřebná pro následnou modifikaci konzervovaného...
|
host ::
RSS.