|
|
Vývoj a validace HPLC metody pro stanovení účinných látek a nečistoty v přípravku Valetol
Maroušková, Alena ; Sklenářová, Hana (oponent) ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce)
Tato práce navazuje na diplomovou práci (1) , ve které byly nalezeny optimální chromatografické podmínky pro stanovení účinných látek léčivého přípravku Valetol, paracetamolu, kofeinu a propyfenazonu, a nečistoty p-aminofenolu, metodou HPLC. Součástí rigorózní práce bylo nalezení vhodného vnitřního standardu pro přesnou kvantifikaci účinných látek a nečistoty, kyseliny benzoové. Následně byla provedena validace analytické metody, včetně testu vhodnosti chromatografického systému. V rámci testu vhodnosti chromatografického systému byla testována: účinnost kolony vyjádřená počtem teoretických pater N asymetrie chromatografických píků vyjádřená faktorem T rozlišení chromatografických píků opakovatelnost vyjádřená relativní směrodatnou odchylkou V rámci validace analytické metody byla testována: přesnost linearita správnost selektivita robustnost stabilita Test robustnosti prokázal citlivost analýzy na změnu složení mobilní fáze. Byly testovány dva parametry mobilní fáze: pH a změna obsahu triethylaminu. Bylo dokázáno, že změna pH mobilní fáze má vliv především na retenční časy p-aminofenolu a kyseliny benzoové. Změna obsahu triethylaminu v mobilní fázi má výrazný vliv jak na retenční čas p-aminofenolu, tak na velikost plochy píku p-aminofenolu (na jeho kvantifikaci). Požadavek na...
|
|
|
Stanovení vitamínů A, D a E metodou sekvenční injekční chromatografie
Trefilová, Kateřina ; Chocholouš, Petr (oponent) ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce)
Byl vypracován postup separace vitamínů A, D a E pomocí monolitických kolon zapojených v systému sekvenční injekční analýzy. Po provedené optimalizaci byly vybrány následující podmínky separace: analýza na: monolitické koloně 25 mm dlouhé Chromolith Flash RP-18e kolony, 4,6 mm I.D. (Merck, Germany), při rychlosti (10 µl/s) za použití mobilní fáze acetonitril metanol (1:1, v/v). Monolitická kolona byla v SIA systému zapojena mezi vícecestný ventil a průtokovou Z celu. Spektrofotometrická detekce byla provedena při vlnových délkách absorpčních maxim pro vitamín A - 324 nm, D - 265 nm, E - 285. Celková délka SIA analýzy byla 400 s (z toho 230 s trvala vlastní separace). Ze základních chromatografických validačních parametrů byly vyhodnoceny faktor symetrie AS, rozlišení RS, počet teoretických pater a opakovatelnost. Faktor symetrie pro vitamín A - 1,309, pro vitamín D2 - 1,302, pro D3 - 1,286 , pro vitamín E - 1,158. Rozlišení píků pro vitamíny A-D2 je 3,607, D2-D3 4,232, D-E 1,532. Počet teoretických pater pro vitamín A 998, pro vitamín D2 1621, pro vitamín D3 2091 a vitamín E 2376. Opakovatelnost byla vypočítána z 6 nástřiků, kdy z výšky píků jednotlivých látek byla vypočítaná relativní směrodatná odchylka. Opakovatelnost je pro vitamín A - 0,53 %, pro vitamín D2 - 0,35 %, pro vitamín D3 - 0,81 % a...
|
|
|
Optimalizace SIA stanovení dakarbazinu
Horáková, Markéta ; Chocholouš, Petr (oponent) ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce)
Dakarbazin byl stanovován sekvenční injekční analýzou s chemiluminiscenční detekcí, při reakci vzorku s manganistanem draselným v prostředí kyseliny sírové. Optimalizovány byly objemy činidel, jejich koncentrace, průtoková rychlost, struktura měřícího cyklu. Také byl zkoušen vliv rozpouštědel (voda, 60% etanol, 60% metanol) a zesilovačů chemiluminiscenční reakce (polyfosfát sodný, kyselina mravenčí, glutaraldehyd a formaldehyd). Výslednými optimálními podmínkami byla sekvence: 40 μl 1 M H2SO4, 3 μl 10 mM KMnO4, 30 μl 10 mM roztoku dakarbazinu, 40 μl 1 M H2SO4, případná aspirace 50 μl zesilovače. Aspirace roztoků probíhala za průtokové rychlosti 100 μl/s, promísení a průtoková rychlost transportu do detektoru byla 40 μl/s, po každém měření byl přidán výplach kyselinou šťavelovou, aby se předešlo usazování KMnO4 v hadičkách. Napětí na fotonásobiči detektoru bylo 420 V. Kalibrační závislosti velikosti CL intenzity na koncentraci dakarbazinu byly nelineární, s možností výběru určité lineární oblasti. Pro roztok dakarbazinu bez zesilovače nebyla lineární oblast nalezena s dostatečně vysokým korelačním koeficientem, pro roztok dakarbazinu s 60% metanolem 0,5 - 10 mmol/l, pro roztok dakarbazinu s 1,39 M kyselinou mravenčí 4 - 10 mmol/l. Detekční limit byl pro roztok dakarbazinu bez zesilovače vypočítán...
|
|
|
HPLC separace p-aminofenolu, paracetamolu, kofeinu a propyfenazovu na polární stacionární fázi
Maroušková, Alena ; Sklenářová, Hana (oponent) ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce)
V této práci byly nalezeny optimální chromatografické podmínky pro separaci p-aminofenolu, paracetamolu, kofeinu a propyfenazonu pomocí metody HPLC. Jde o látky vzájemně se lišící lipofilitou a acidobazickými vlastnostmi. Použití klasických kolon s reverzní fází je pro jejich společné stanovení problematické. PEG kolona se ukázala jako vhodná pro efektivní separaci látek s odlišnou polaritou, tedy s různým chromatografickým chováním. Výhodou výsledné metody je především zkrácení doby analýzy, což hraje významnou roli zejména při analýzách velkých sérií vzorků. V rámci optimalizace chromatografických podmínek: byl vyzkoušen široký výběr mobilních fází (různá organická rozpouštědla, různý poměr zastoupení organické složky ke složce vodné) bylo testováno pH mobilní fáze v rozmezí 4 - 7 byly testovány různé pufry bylo vyzkoušeno chování látek na koloně při zvýšené teplotě byly testovány dvě PEG kolony s rozdílnými délkami Byly nalezeny optimální chromatografické podmínky, při kterých dojde k separaci výše uvedených látek a které současně vyhovují požadavkům na jednoduchost a časovou nenáročnost při zachování vysoké spolehlivosti metody. Konečné chromatografické podmínky: Stacionární fáze: Supelco Discovery HS PEG kolona (15 x 4 mm, 3 µm) Mobilní fáze: octanový pufr o pH 4,5 s obsahem 0,04%...
|
|
|
Využití HPLC ve farmaceutické analýze
Bajcurová, Lucie ; Sklenářová, Hana (oponent) ; Matysová, Ludmila (vedoucí práce)
Byla vyvinuta HPLC metoda pro stanovení ketoprofenu v léčivých přípravcích PRONTOFLEX 10% kožní sprej, roztok a Ketonal 5% krém. Při vývoji se vycházelo z již vyvinuté a validované metody pro analýzu přípravku KETOPROFEN gel 2,5%, která byla vytvořena na stejném pracovišti. Optimální chromatografické podmínky byly: kolona SUPELCO Discovery C18 (125 mm x 4,6 mm, 5 µm), mobilní fáze acetonitril : voda: fosforečnanový pufr 3,5 (40:58:2, v/v/v), rychlost průtoku mobilní fáze 1,0 ml/min, dávkovaný objem 10 µl, UV detekce při vlnové délce 233 nm. Celkový čas analýzy byl pod 10 minut. Jako vnitřní standard byl užit ethylparaben.
|
|
|
Stanovení dusičnanů a dusitanů metodou SIA
Kymlová, Helena ; Sklenářová, Hana (oponent) ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce)
Byla vyvinuta nová metoda SIA pro současné stanovení dusitanů a dusičnanů. Dusitany byly analyzovány použitím Griessovy reakce. Dusičnany byly stanoveny po jejich redukci na dusitany v kadmiové koloně. Absorbance byla měřena při absorpčním maximu při 540 nm. Optimální podmínky pro analýzu: rychlost peristaltické pumpy pro stanovení dusitanů i dusičnanů 40 % maximální rychlosti pumpy; rychlost pístové pumpy pro dusitany i dusičnany 50 µl.s-1 ; dávkovaný objem dusitanů i dusičnanů 150 µl. Optimální čas redukce dusičnanů je při 0 s, tedy prostém průtoku dusičnanů redukční kolonou. Metoda byla použita pro analýzu dusitanů a dusičnanů ve vzorcích vod Fromin, Bonaqua, Rajec, Mattoni, hradecká voda. Hodnoty byly porovnány s hodnotami deklarovanými výrobci. Vyvinutá metoda SIA pro současné stanovení dusitanů a dusičnanů je používána jako nová praktická úloha v předmětu Speciální metody instrumentální analýzy.
|
|
|
Stanovení biologicky aktivních látek metodou sekvenční injekční analýzy s chemiluminiscenční detekcí
Štěpánková, Lucie ; Polášek, Miroslav (vedoucí práce) ; Sklenářová, Hana (oponent)
1.1 Souhrn Byla navržena a optimalizována jednoduchá a rychlá metoda pro stanovení norepinefrinu metodou sekvenční injekční analýzy s chemiluminescenční detekcí. Optimalizovanými parametry byly objemy a koncentrace vzorku norepinefrin bitartrátu a reagencií, průtoková rychlost, složení nosného proudu a napětí na fotonásobiči. Optimální objem vzorku byl 80 μl a optimální koncentrace činidel (a aspirované objemy) byly - 25 mM polyfosfát sodný (44 μl), 0,1 M kyselina sírová (24 μl) a 1 mM manganistan draselný (21 μl). Optimální průtoková rychlost (pro průchod detektorem) byla 91 μl/s a napětí na fotonásobiči bylo 450 V. Jako nosný proud byla použita ultračistá voda. Kalibrační křivka byla lineární v rozsahu koncentrací 1 - 40 μmol/l norepinefrin bitartrátu. Parametry kalibrační křivky y = kx + q (kde y je intenzita chemiluminiscence v nA a x je koncentrace norepinefrin bitartrátu v μmol/l) byly vypočítány metodou lineární regrese. Směrnice k byla 33.923 a absolutní člen q byl 34.839. Korelační koeficient byl 0,9997. Relativní směrodatné odchylky byly 2.78 a 1.18 % (n = 10) pro stanovení norepinefrin bitartrátu ve standardních roztocích o koncentracích 4.75 a 18.98 μmol/l. Limit detekce (LOD) byl 0.28 μmol/l a limit kvantifikace (LOQ) byl 3.34 μmol/l. Navrhovaná SIA metoda byla použita pro stanovení obsahu...
|
|
|
SIA stanovení dusitanů, dusičnanů a chloridů podle platných ISO norem
Dundová, Aneta ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Tato diplomová práce se zabývá tématem stanovení dusitanů, dusičnanů a chloridů metodou SIA upravenou podle platných ISO norem. Česká technická norma ČSN EN ISO 11 732 udává metodu vhodnou ke stanovení amoniakálního dusíku metodou FIA a CFA ve vodách různých druhů. Podstata zkoušky spočívá v aspiraci vzorku obsahující amoniakální dusík do kontinuálního proudícího nosného roztoku, kde se mísí s tokem alkalického roztoku. Amoniak se oddělí v difúzním segmentoru přes polopropustnou membránu a přechází do proudícího toku roztoku, ve kterém je indikátor pH. V důsledku změny hodnoty pH se mění zbarvení indikátoru, které je zaznamenáváno průtokovým spektrofotometrem. Bylo provedeno převedení uvedeného FIA stanovení daných iontů do SIA systému při dodržení kalibračních rozsahů z uvedené normy. Princip stanovení dusitanů je odlišný, byla použita Griess diazo-kopulační reakce za vzniku azobarviva měřitelného při 540 nm v průtokové cele spektrofotometru. Kalibrační křivka dusitanů vykazovala linearitu v rozmezí c = 0,01 - 0,1 mg/l a c = 0,1 - 1,0 mg/l s korelačními koeficienty R2 = 0,9979 a R2 = 0,9962. Roztok dusičnanů byl aspirován do redukční kolony zhotovené z kadmia a mědi. Po redukci NO3 - na NO2 - byl vzorek aspirován do systému, kde se mísil s činidlem a nakonec procházel průtokovou celou detektoru....
|
|
|
Vývoj optického sensoru pro salicylát
Soukupová, Marie ; Matysová, Ludmila (vedoucí práce) ; Sklenářová, Hana (oponent)
V této práci jsme se zabývali vývojem optického sensoru pro salicylát. Snímající část sensoru byla založena na metaloporfyrinech. Metaloporfyriny vykazují výborné optické vlastnosti. Běžně jsou využívány jako ionofory v iontově-selektivních elektrodách (ISEs). Poznatky z práce s ISEs jsou aplikovány do optických sensorů. Nejdříve byla zkonstruována membrána, která byla založena na tetrafenylporfyrinu mědi(II) (Cu(TPP)) a nevykazovala signifikantní citlivost k salicylátu. Dále byly vytvořeny membrány z tetrafenylporfyrinu manganu(III)chloridu (Mn(TPP)) a gallia(III) ftalocyaninu chloridu (Ga(PC)). Reaktivita Mn(TPP) byla srovnatelná s reaktivitou Cu(TPP). Membrána z Ga(PC) vykazovala značnou reaktivitu a citlivost směrem k salicylátu. Později byla zkoušena i její schopnost detekovat valproát. Ukázalo se, že limit detekce pro valproát je mnohem nižší než pro salicylát. Kvůli velké reaktivitě a variabilitě v odpovědi membrány při spektrofotometrickém měření jsme nebyli schopni nastavit podmínky pro aplikaci této membrány do průtokového systému a později do disoluce. Ga(PC) má pravděpodobně velký potenciál ve využití v praxi pro detekci valproátu jako jednoho z nejpoužívanějších antiepileptik.
|
|
|
Stanovení verapamilu metodou sekvenční injekční analýzy s chemiluminiscenční detekcí
Homolová, Zuzana ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Verapamil byl stanovován metodou sekvenční injekční analýzy (SIA) s chemiluminiscenční detekcí (CL). Chemiluminiscence byla emitována během oxidace vzorku manganistanem draselným v roztoku kyseliny sírové za přítomnosti zesilovače CL polyfosfátu sodného (PFS). Optimalizovány byly koncentrace, pořadí, objem činidel a průtoková rychlost. Rovněž byl vyzkoušen vliv rozpouštědel 60% methanolu a 60% ethanolu. Optimální pořadí, objemy a koncentrace činidel pro vodný roztok verapamilu byly: 30 μl 10 mM KMnO4, 50 μl 2% PFS, 50 μl 1 mM verapamilu, 30 μl 1 M H2SO4 a pro 60% ethanolický roztok: 20 μl 10 mM KMnO4, 30 μl 2% PFS, 50 μl 1 mM verapamilu, 30 μl 2 M H2SO4, 30 μl 2% PFS a průtoková rychlost 30 μl/s. Přechodný CL signál byl zaznamenáván při vlnové délce 390 nm. Kalibrační křivky závislosti intenzity CL (výška píku) na koncentraci vzorku byly nelineární, lineární části se pohybovaly v rozmezí 510-5 - 510-3 M pro vodný roztok verapamilu a 110-5 - 110-3 M pro 60% ethanolický roztok. Detekční limity byly 210-5 M pro vodný roztok a 110-5 M pro 60% ethanolický roztok verapamilu. Opakovatelnost (RSD, n = 10) se pohybovala mezi 4,43 % (110-4 M) a 1,83 % (110-3 M) pro vodný roztok a 2,11 % (110-4 M) a 4,90 % (110-3 M) pro 60% ethanolický roztok. Verapamil byl stanovován v HVLP (tablety s obsahem...
|
host ::
RSS.