|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
|
Vliv virové infekce na aktivitu glykosidas rostlin tabáku (Nicotiana tabacum L.)
Kloudová, Kateřina ; Tichá, Marie (oponent) ; Ryšlavá, Helena (vedoucí práce)
Glykosidasy jsou enzymy hojně zastoupené v mikroorganismech, houbách, rostlinách i živočiších. Patří mezi hydrolasy, což znamená, že hydrolyticky štěpí glykosidické vazby v molekulách oligosacharidů, polysacharidů a dalších glykokonjugátů, jako jsou např. glykoproteiny, glykolipidy nebo různé alkaloidy. Funkce rostlinných glykosidas nebyla doposud zcela objasněna, proto je, stejně jako jejich charakterizace, předmětem mnoha studií. Mezi zkoumané funkce rostlinných glykosidas patří úloha při klíčení rostlin, při zrání a měknutí plodů nebo při obraně proti biotickému či abiotickému stresu. Při biotickém stresu začíná rostlina ve zvýšené míře exprimovat specifické obranné proteiny (PRP, "pathogenezis-related proteins"). Bylo zjištěno, že v listech tabáku jako obranné proteiny působí chitinasy a β-1,3-glukanasy, tedy endolytické enzymy. Cílem mé práce proto bylo zjistit, zda se na obraně rostlin tabáku při biotickém stresu podílí i exolytické glykosidasy - α-galaktosidasa, β-galaktosidasa, α-glukosidasa, β-glukosidasa, β- hexosaminidasa a α-mannosidasa. V listech tabáku (Nicotiana tabacum L. cv. Petit Havana SR1) jsem studovala vliv virové infekce na aktivitu glykosidas. Listy byly infikovány Y virem bramboru (PVY, "Potato virus Y"). Aktivitu glykosidas jsem sledovala v kontrolních a v infikovaných...
|
|
|
Studium β-N-acetylhexosaminidasy v rostlinách tabáku
Valenta, Robert ; Tichá, Marie (oponent) ; Ryšlavá, Helena (vedoucí práce)
β-N-acetylhexosaminidasy jsou přítomny ve všech živých organismech, avšak informací o tomto enzymu v rostlinách a především listech je známo málo. V případě rostlinných β-N-acetylhexosaminidas se spekuluje o možné obranné funkci proti houbovým i jiným patogenům a také o degradaci zásobních glykoproteinů. Z listů tabáku (Nicotiana tabacum L.) byla precipitací síranem amonným, gelovou chromatografií na koloně Sephacrylu S-300 a afinitní chromatografií na koloně Con A-Sepharosy připravena β-N- acetylhexosaminidasa o specifické aktivitě 190 nmol min-1 mg-1 pro substrát p-NP-GlcNAc. Byla stanovena Michaelisova konstanta a maximální rychlost reakce β-N- acetylhexosaminidasy pro substrát p-NP-GlcNAc (Km = 0,33 mM a Vmax = 414 nmol min-1 mg-1 ). Pomocí kapilární elektroforézy bylo studováno štěpení diacetylchitobiosy β-N- acetylhexosaminidasou. Stanovená aktivita β-N-acetylhexosaminidasy pro diacetylchitobiosu byla více než jedenáctkrát nižší než v případě aktivity β-N-acetylhexosaminidasy pro substrát p-NP-GlcNAc. Z těchto výsledků lze usoudit, že chitobiosa, a pravděpodobně ani další chitooligomery, nejsou přirozeným substrátem β-N-acetylhexosaminidasy a tedy neslouží primárně k ochraně před houbovými patogeny. Přirozeným substrátem by mohly být spíše oligosacharidové řetězce glykoproteinů.
|
|
|
Studium metabolických změn rostlin tabáku pěstovaných v přítomnosti sacharosy
Garčeková, Květa ; Ryšlavá, Helena (vedoucí práce) ; Folwarczna, Jitka (oponent)
In Czech - ABSTRAKT Metabolismus rostlin pěstovaných v kultivačním médiu je ovlivněn jeho složením. Kromě nezbytných živin obsahují kultivační média často sacharosu. Cílem této práce bylo zjistit, zda dodatečný zdroj uhlíku-sacharosa ovlivní aktivitu fosfoenolpyruvátkarboxylasy (PEPC, EC 4.1.1.31), NADP dependentní malátdehydrogenasy (oxalacetát dekarboxylační) (NADP-ME, EC 1.1.1.40) a pyruvát, fosfátdikinasy (PPDK, EC 2.7.9.1). Aktivita těchto enzymů byla stanovena v různých částech rostlin tabáku (Nicotiana tabacum L., cv. Petit Havana SR1) pěstovaných in vitro v kultivačním médiu: Murashige-Skoogovu agaru v přítomnosti sacharosy (SR1+S) a bez přítomnosti sacharosy (SR1-S). Aktivita sledovaných enzymů vztažená na gram čerstvé hmotnosti i specifická aktivita byly v rostlinách SR1+S zvýšeny. V horních listech byla aktivita PEPC vztažená na čerstvou hmotnost zvýšena o 71%, aktivita NADP-ME o 43% a aktivita PPDK o 89%. V rostlinách SR1+S byl také zjištěn vyšší obsah proteinů. Z těchto výsledků vyplývá, že metabolické dráhy katalyzované těmito enzymy jsou v přítomnosti sacharosy více využívány. Klíčová slova: Nicotiana tabacum, L., NADP-ME, PEPC, PPDK, sacharosa
|
|
|
Vliv sacharosy v kultivačním mediu na aktivitu fosfoenolpyruvátkarboxylasy v rostlinách tabáku
Fiala, Martin ; Ryšlavá, Helena (vedoucí práce) ; Hoffmeisterová, Hana (oponent)
In Czech - Abstrakt Rostliny jsou za fyziologických podmínek autotrofní organismy, které využívají energii slunečního záření k fixaci CO2 pro syntézu sacharidů. Přítomnost sacharosy v kultivačním médiu může ovlivnit metabolismus celé rostliny. Cílem této práce bylo zjistit, zda přítomnost sacharosy ovlivní aktivitu fosfoenolpyruvátkarboxylasy (EC 4.1.1.31, PEPC) a nitrátreduktasy (EC 1.7.1.1., NR). PEPC je v C4 a CAM rostlinách fotosyntetickým enzymem, v C3 rostlinách plní řadu funkcí, dodává intermediáty citrátového cyklu a spojuje tak metabolismus sacharidů a aminokyselin. Aktivita PEPC v rostlinách pěstovaných se sacharosou byla o 70 % vyšší než v rostlinách pěstovaných bez sacharosy. Stupeň fosforylace PEPC byl studován stanovením aktivity PEPC po působení alkalické fosfatasy, aktivaci D- glukosa-6-fosfátem a inhibici L-malátem. Aktivita PEPC se po působení alkalické fosfatasy snížila. Pokles byl pro rostliny pěstované se sacharosou i bez sacharosy velmi podobný. Aktivace PEPC D-glukosa-6-fosfátem a inhibice PEPC L-malátem byla srovnatelná v rostlinách pěstovaných se sacharosou i bez sacharosy. Nitrátreduktasa je klíčovým enzymem fixace dusíku. Aktivita NR byla v rostlinách pěstovaných se sacharosou o 90 % vyšší než v rostlinách pěstovaných bez sacharosy. V rostlinách pěstovaných se sacharosou bylo o 52...
|
|
|
Vliv sucha na metabolismus rostlin tabáku
Miedzińska, Lucia ; Ryšlavá, Helena (vedoucí práce) ; Vaňková, Radomíra (oponent)
VVlliivv ssuucchhaa nnaa mmeettaabboolliissmmuuss rroossttlliinn ttaabbáákkuu (Nicotiana tabacum L.) Diplomová práce - abstrakt Lucia Miedzińska, Bc. Vedoucí diplomové práce: Doc. RNDr. Helena Ryšlavá, CSc. Konzultant: RNDr. Veronika Doubnerová, PhD. Sucho patří mezi jednu z nejčastějších forem rostlinného stresu, neboť k němu dochází nejen při nedostatku vody, ale i sníženou schopností přijímat vodu kořeny v zasolených půdách či za chladu. V této diplomové práci bylo zjišťováno, zda rostliny tabáku (Nicotiana tabacum L., cv. W38) reagují na sucho změnou aktivity enzymů: NADP dependentní malátdehydrogenasy dekarboxylační (EC 1.1.1.40; NADP-ME), fosfoenolpyruvátkarboxylasy (EC 4.1.1.31; PEPC) a pyruvát, fosfátdikinasy (EC 2.7.9.1; PPDK). Aktivity sledovaných enzymů v listech tabáku byly v průběhu 11 dnů stresu významně zvýšeny; aktivita PEPC dvojnásobně, PPDK až 3,3-krát a NADP-ME dokonce až čtyřnásobně oproti rostlinám kontrolním. V průběhu stresu byla sledována regulace aktivity NADP-ME a PEPC na úrovni transkripce - metodou "real-time" PCR a translace - imunochemicky. Exprese proteinu NADP-ME a transkripce mRNA pro chloroplastovou isoformu byly zvýšeny, mRNA pro cytosolovou isoformu nebyla významně ovlivněna. Exprese proteinu PEPC byla zvýšena jen velmi málo, transkripce mRNA pro PEPC byla mírně snížena....
|
|
|
Nové typy magnetických sorbentů pro analýzu fosfoproteinů
Emmerová, Tereza ; Ryšlavá, Helena (oponent) ; Kučerová, Zdenka (vedoucí práce)
Byla vypracována metoda pro studium fosforylačních míst fosfoproteinů. Tato metoda je založena na separaci fosfopeptidů po proteolytickém štěpení fosfoproteinů na nových IMAC magnetických sorbentech s imobilizovanými kovovými ionty a jejich následné identifikaci hmotnostní spektrometrií (MS). Neporézní hydrofilní poly(2- hydroxyethyl metakrylát-co-glycidyl metakrylátové) magnetické částice připravené disperzní kopolymerací a modifikované iminodioctovou kyselinou obsahující imobilizované Fe(III) nebo Ga(III) ionty byly použity k separaci fosfopeptidů z proteolytických směsí peptidů modelových fosfoproteinů: α-kaseinu a prasečího pepsinu A. Optimalizací adsorpčních a elučních podmínek se nám na připravených magnetických sorbentech podařilo selektivně separovat fosfopeptidy z proteolyticky rozštěpeného modelového fosfoproteinu, který obsahoval velké množství kyselých peptidů (prasečí pepsin A). Získané výsledky prokázaly, že připravené magnetické sorbenty jsou vhodné k separaci fosfopeptidů s jednou fosfátovou skupinou i vícenásobně fosforylovaných peptidů. Fosfopeptidy separované z proteolytických směsí peptidů modelových proteinů byly analyzovány MS na principu MALDI-TOF (matrix-assisted laserdesorption/ionization time-of-flight). Pro imunochemickou separaci fosfoproteinů byla připravena...
|
host ::
RSS.