|
|
Vývoj nové spektrofotometrické metodiky pro screening chelatace iontů zinku
Herbolt, Daniel ; Mladěnka, Přemysl (vedoucí práce) ; Kučera, Radim (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Kandidát: Mgr. Daniel Herbolt Školitel: Doc. PharmDr. Přemysl Mladěnka, Ph.D. Název rigorózní práce: Vývoj nové spektrofotometrické metodiky pro screening chelatace iontů zinku Zinek je jediný stopový kov, který je kofaktorem více než 300 funkčních enzymů. Je zastoupen ve všech tkáních a orgánech. Nedostatek zinku může způsobovat celou řadu onemocnění, jako např. diabetes, poruchy hemostázy a rakovinu. Toxicita zinku je sice obvykle považována za mírnou, ale dysbalance zinku, např. jeho přítomnost v extracelulárních placích u pacientů s Alzheimerovou chorobou naznačuje složitější vztah. Cílem předkládané práce bylo vytvořit novou spektrofotometrickou metodiku pro screening chelatace iontů zinku. Prvním krokem bylo proměření spekter vybraného indikátoru dithizonu a jeho komplexu se zinkem a zjištění ideální vlnové délky pro nejpřesnější lineární stanovení koncentrace iontů zinku. Následně byla ověřována linearita při dvou vybraných vlnových délkách. Poté se přešlo k porovnání stability dithizonu a jeho komplexu v závislosti na čase. Konečnou fází bylo ověřování metodiky na dvou známých chelátorech zinku, jimiž byly kyselina ethylendiamintetraoctová (EDTA) a N,N,N′,N′-tetrakis(2- pyridylmethyl)ethylenediamin...
|
|
|
HPLC analýza daunorubicinu a jeho metabolitu
Adamíková, Klára ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce) ; Kučera, Radim (oponent)
V současné době patří vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) stále mezi dominantní separační metody, je široce využívána ve všech oblastech analýzy léčiv. HPLC umožňuje kvalitativní i kvantitativní hodnocení separovaných složek směsi. V této práci je popsán vývoj metody pro HPLC analýzu daunorubicinu (DAU) a jeho metabolitu daunorubicinolu (DAU-OL) v králičí plazmě. Analyzované látky byly nejprve odděleny od interferujících substancí v plazmě deproteinací. Z testovaných deproteinačních činidel byl vybrán methanol (600 μl), jehož extrakční výtěžnost byla nejvyšší. Separace DAU a jeho metabolitu byla dosažena na koloně Zorbax SB-Aq (3,5 µm, 150 x 4,6 mm; Agilent Technologies, USA), mobilní fáze byla tvořena vodnou složkou, která obsahovala čištěnou vodu s fosfátovým pufrem, okyselená kyselinou fosforečnou (výsledné pH = 2,4), a organickou složkou tvořenou acetonitrilem v poměru 74:26 (v/v). Analýza proběhla za podmínek izokratické eluce během 15 minut, průtok mobilní fáze byl 1,1 ml/min a nástřik 40 μl vzorku. Fluorescenční detektor měl nastavenou emisní a excitační vlnovou délku na 480 nm a 560 nm. Jako vnitřní standard byl použit doxorubicin. Metoda byla pilotně validována s ohledem na linearitu (4 - 83 ng/ml pro DAU, 25 - 500 ng/ml pro DAU-OL), přesnost a správnost. Byla stanovena stabilita...
|
|
|
Využití separačních metod v analýze léčiv IV.
Ondrišíková, Lucie ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Vrbatová, Ivana (oponent)
Využití separačních metod v analýze léčiv IV. Diplomová práce Lucie Ondrišíková Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv, Heyrovského 1203, Hradec Králové Vysokoúčinná kapalinová chromatografie je v současné době jedna z nejprogresivnějších analytických metod, která nachází stále větší uplatnění ve všech oblastech analýzy léčiv. V současnosti je většina analýz realizována pomocí silikagelových kolon, které navzdory četným pozitivním vlastnostem (např. největší výběr různých velikostí částic, průměrů pórů a ploch povrchů; velký výběr různých reverzních fází) mají také určitá omezení - především jsou stabilní pouze v poměrně úzkém rozmezí pH = 2,0 -8,0 a teplotě cca do 60řC. Z těchto důvodů se neustále vyvíjejí a testují pro výrobu stacionárních fází materiály s výhodnějšími vlastnostmi. Jako velmi perspektivní se nyní ukazuje oxid zirkoničitý - je stabilní v celém rozmezí pH a teplotě až do 200řC. Tato diplomová práce se v teoretické části zabývá fyzikálními a chemickými vlastnostmi oxidu zirkoničitého, vlastnostmi HPLC kolon na bázi oxidu zirkoničitého a jejich srovnáním se silikagelovými kolonami. Experimentální část je zaměřena na studium a porovnání retenčního chování neutrálních, kyselých a bazických látek na Zr-PBD a...
|
|
|
Využití plynové chromatografie v kontrole léčiv IV
Kratochvílová, Eva ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Kovaříková, Petra (oponent)
Využití plynové chromatografie v kontrole léčiv IV. Diplomová práce Eva Kratochvílová Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Heyrovského 1203, Hradec Králové Tato diplomová práce se zabývá validací analytické metody pro stanovení nečistot v 1,3- butandiolu plynovou chromatografií. Stanovení optimálních separačních parametrů- teploty na koloně, teplotního gradientu, rychlosti průtoku nosného plynu a splitovacího poměru umožní ideální separaci píku 1,3-butandiolu a nečistot, které jsou v něm obsaženy. Pro kvantifikaci složek vzorku byla testována metoda vnitřního standardu a metoda normalizace. Normalizační metoda byla dále validována. Validace metody zahrnuje linearitu, přesnost, reprodukovatelnost, robustnost, LOD a LOQ. Nalezená metoda splňuje všechny požadavky na tyto parametry. Stabilita vzorku 1,3-butandiolu byla potvrzena sérií měření během 24 hodin.
|
|
|
GC analýza léčiv s využitím iontové kapaliny jako stacionární fáze I
Bärová, Karolína ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Kučera, Radim (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Student: Karolína Bärová Název diplomové práce: GC analýza léčiv s využitím iontové kapaliny jako stacionární fáze I V této práci jsme testovali tři komerčně vyráběné kolony se stacionární fází tvořenou iontovými kapalinami na modelovém vzorku ibuprofenu a jeho čtyř lékopisných nečistot po derivatizaci alkylchloroformiáty a získané výsledky jsme porovnali s výsledky na koloně s konvenční nepolární stacionární fází. Dále jsme se pokusili popsat a vysvětlit retenční mechanismy, které hrály roli při těchto separacích, optimalizovat metodu pro použití na jednotlivých kolonách a extrahovat deriváty do nepolární fáze s vidinou menší škodlivosti takto upraveného vzorku na kolonu. Výsledky získané na stacionárních fázích s iontovou kapalinou a na nepolární stacionární fázi hodnotíme jako celkem srovnatelné. Všechny námi testované kolony s iontovou kapalinou jako stacionární fází jsou na analýzu našich vzorků použitelné a na všech těchto kolonách se dá metoda optimalizovat. Kromě změny v selektivitě na nejpolárnější koloně jsme však nezjistili, že by hlediska separace našich analytů přinášely iontové kapaliny jako stacionární fáze velké...
|
|
|
Nesilikagelové materiály v analýze léčiv I.
Nezvedová, Markéta ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Pilařová, Pavla (oponent)
Nesilikagelové materiály v analýze léčiv I. Diplomová práce Markéta Nezvedová Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické kontroly a kontroly léčiv Heyrovského 1203, Hradec Králové. Analýza vzorků nejrůznějšího původu je prováděna především pomocí chromatografických technik. Ty jsou samy o sobě považovány za nejcitlivější. Přesto je ale žádoucí si vzorek před vlastní analýzou upravit pomocí vhodné metody určené pro tento účel. Tyto postupy zbaví vzorku balastních látek, které by mohly rušit či interferovat při chromatografické analýze. Extrakce na pevné fázi je jednou z těchto metod, při níž se využívá k extrakci účinných látek z kapalného prostředí pevné fáze. Jedná se především o silikagelové sorbenty. Náš výzkum byl zaměřen na stacionární fáze na bázi oxidů zirkoničitého a titaničitého, které mají dle dostupných informací výrazný potenciál pro využití v oblasti analýzy. Jejich vlastnosti jsme testovali hlavně na kyselých analytech nejprve ve vzorku bez plazmy v módu s retencí polárních látek ve vodném prostředí a následně v HILIC podmínkách. Kyselé látky ve vodném prostředí byly z TiO2 vymyty v promývací fázi, kdežto ze ZrO2 byly analyty odstraněny až po eluci 5% NH3. HILIC podmínky zajistily na TiO2 již dostatečnou extrakční výtěžnost většiny...
|
|
|
Využití HPLC v chirálních separacích I
Radová, Lucie ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Pilařová, Pavla (oponent)
7 ABSTRAKT Práce se zabývá testováním vlivu rozpouštědla (acetonitril, isopropylalkhol, methanol), teploty uchovávání a světla na stabilitu omeprazolu (racemát a S-izomer) při chirální separaci na koloně CHIRAL-AGP s využitím HPLC. Experimentální výsledky ukázaly, že nejvhodnějším rozpouštědlem je pro racemát i S-izomer omeprazolu acetonitril. Teplota na koloně a světlo jsou důležitými parametry, které ovlivňují stabilitu omeprazolu v průběhu analýzy. Pokles teploty na koloně vede ke zvýšení stability omeprazolu, přičemž S-izomer je stabilnější v porovnání s racemátem. Působení světla na roztoky snižuje jejich stabilitu, přičemž S-izomer je na světle méně stabilní v porovnání s racemátem.
|
|
| |
|
|
Optimalizace chromatografických podmínek pro chirální separaci biologicky aktivních látek.
Novák, Martin ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Nobilis, Milan (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Student: Bc. Martin Novák Školitel: doc. PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Konzultant Mgr. et Mgr. Rafael Doležal, Ph.D. Název diplomové práce: Optimalizace chromatografických podmínek pro chirální separaci biologicky aktivních látek Diplomová práce se zaměřuje na vývoj HPLC - UV metody pro stanovení enantiomerů látky K 1277 se strukturním vzorcem N - (2 - ((6 - chlor - 1,2,3,4 - tetrahydroakridin - 9 - yl) amino) hexyl - 2 - amino - 3 - (1H - indol - 3 - yl) propylamid dihydro - chlorid, která je vybraným zástupcem ze skupiny hybridních sloučenin takrinu a tryprofanu. Hybridy syntetizované z molekul takrinu a tryptofanu je možné zařadit mezi velmi slibné kandidáty potenciálních léčiv působících v terapii Alzheimerovy choroby. V teoretické části práce přináší seznámení se základní charakteristikou chirality molekul, možnostmi a principy chirálních separačních metod, patofyziologií a klinickými projevy Alzheimerovy nemoci, možnostmi léčby Alzheimerovy nemoci a se stručnou charakteristikou hybridních sloučenin takrinu a tryptofanu. Cílem diplomové práce je nalezení vhodné metody separace enantiomerů vznikajících syntézou z takrinového skeletu a tryptofanové části. Experimentální část práce se...
|
|
|
HPLC analysis of drug candidates from the group of aroylhydrazones II.
Stariat, Ján ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce) ; Kučera, Radim (oponent)
1. ABSTRAKT Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) je v oblasti liečiv jednou z najčastejšie používanou analytickou technikou. Železo je dôležitým biogénnym prvkom, no napriek tomu jeho zvýšené množstvo v organizme pôsobí toxicky. Výskum vysoko selektívnych a účinných biokompatibilných chelátorov železa bol pôvodne inšpirovaný potrebou mobilizovať železo v tkanivách s chronickým preťažením železa. Avšak v posledných rokoch je pozornosť venovaná využitia chelátorov železa tiež pri liečbe bežných onemocnení. Salicylaldehyd isonicotinoyl hydrazon (SIH), biokompatibilný chelátor železa odvodený od aroylhydrazonu, je v dnešnej dobe predmetom aktívneho výskumu ako potenciálne liečivo. Okrem schopnosti viazať železo, vykazuje aj ďalšie zaujímavé farmakologické účinky: antioxidačný, antiproliferatívny, kardioprotektívny, antimalarický a antimikróbny. Táto práca sa zaoberá vypracovaním optimálnych chromatografických podmienok HPLC separácie SIH a jeho potenciálnych metabolitov (isoniazid, acetylisoniazid, salicylaldehyd) a následne využitia tejto separácie k štúdiu možnosti izolácie uvedených látok z moči králika pomocou SPE ako úpravy vzorku. Najlepšia chromatografická analýza bola dosiahnutá použitím kolóny od firmy Phenomenex (2504,6 mm I. D.) s náplňou Prodigy 5u ODS3 100A (5 μm). Mobilná fáza bola v...
|
host ::
RSS.