|
|
Stanovení porothramycinu pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie
Kettnerová, Eliška ; Nesměrák, Karel (vedoucí práce) ; Bosáková, Zuzana (oponent)
Porothramycin je antibiotikum anthramycinové skupiny a je produkován kmenem Streptomyces albus. Porothramycin vykazuje antibakteriální a především protinádorové účinky. Zároveň je však prokazatelně kardiotoxický, a proto zatím nenachází využití v klinické praxi. Některé geny účastnící se syntézy porothramycinu lze použít k přípravě nových netoxických derivátů antibiotik metodou kombinatoriální biosyntézy. Za tímto účelem bylo nezbytné vyvinout novou rutinní chromatografickou metodu pro analýzu porothramycinu pomocí UHPLC-UV-MS techniky. Na základě diskového difuzního testu pomocí citlivého kmene Kocuria rhizophila bylo nejprve vybráno vhodné kultivační médium pro produkci porothramycinu. Z kultivačního média bylo následně izolováno 1,7 mg komerčně nedostupného standardu porothramycinu pro účely vývoje a validace metody stanovení této látky. Současně bylo zjištěno, že kromě porothramycinu jsou do média produkovány také dva analogy porothramycinu. Konečná metoda stanovení porothramycinu se skládala z extrakce na pevné fázi na kolonkách obsahujících styren-divinylbenzenový sorbent s navázanými vinylpyrrolidonovými skupinami. Extrakt byl poté dávkován na UHPLC Acquity BEH C18 kolonu a analyzován v gradientovém módu s mobilními fázemi acetonitril a 0,1% mravenčí kyselina. Porothramycin byl detekován UV...
|
|
|
Izolace a charakterizace biologicky aktivních látek
Kettnerová, Eliška ; Nesměrák, Karel (vedoucí práce) ; Musilová, Adéla (oponent)
Cílem této bakalářské práce byla izolace a částečná identifikace biologicky aktivních látek, které jsou produkovány aktinomycetami a které jsou potenciálně využitelné v lékařství jako antibiotika. Kultivační média aktinomycet obsahující jejich metabolity byla přečištěna a prekoncentrována pomocí extrakce na tuhé fázi. Získaný extrakt byl testován na biologickou aktivitu Kirby-Bauer testem pomocí citlivého kmene Kocuria rhizophila. Biologicky aktivní metabolity byly analyzovány a izolovány pomocí ultraúčinné kapalinové chromatografie s UV detekcí (detektor diodového pole). Izolované látky byly podrobeny analýze hmotnostní spektrometrií, kterou byly získány experimentální hodnoty relativních molekulových hmotností jednotlivých neznámých látek. Tyto hodnoty byly porovnány s relativními molekulovými hmotnostmi látek uvedených v chemické databázi zahrnující přírodní látky včetně antibiotik. Bylo zjištěno, že neznámé biologicky aktivní látky neodpovídají žádným dosud objeveným antibiotikům uvedených v databázi, z čehož lze usuzovat, že se jedná o nová antibiotika. Pro určení jejich struktury je třeba provést další experimenty hmotnostní spektrometrie a nukleární magnetické rezonance. Klíčová slova: aktinomycety, antibiotika, SPE, UPLC, HPLC Předmětová hesla: analýza sekundárních metabolitů, test...
|
host ::
RSS.