|
|
Vývoj HPLC metody pro stanovení vitaminu E v přípravku geladrink
Švestková, Petra ; Chocholouš, Petr (oponent) ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce)
Byla vyvinuta HPLC metoda pro stanovení obsahu vitaminu E acetátu v přípravku Geladrink Forte práškový nápoj - ananas. Metoda je založena na využití kolony Chromolith Performance RP-18e (100 x 4,6 mm) a UV detekce p_i 290 nm. Vitamin E acetát byl separován v přítomnosti tokolu jako vnitřního standardu od matrice přípravku. Byla využita izokratická eluce mobilní fází methanol:voda (98:2), pr_toková rychlost mobilní fáze byla 1,5 ml/min. Měření probíhalo p_i 30 řC. Systém umožnil úspěšnou separaci v čase pod 5 min. Retenční _as tokolu byl 2,337 min a vitaminu E acetátu 4,271 min. Rozlišení chromatografických píků tokolu a vitaminu E acetátu bylo 7,515. Metoda byla dále využita pro analýzu vitaminu E acetátu v přípravku Chondrotin - MSM 2600. Stanovené koncentrace vitaminu E acetátu byly přepočítány na obsah vitaminu E, který deklaruje výrobce. Klíčová slova: vitamin E acetát, HPLC, Geladrink, Chondrotin - MSM 2600
|
|
|
Stanovení vitamínů A, D a E metodou sekvenční injekční chromatografie
Trefilová, Kateřina ; Chocholouš, Petr (oponent) ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce)
Byl vypracován postup separace vitamínů A, D a E pomocí monolitických kolon zapojených v systému sekvenční injekční analýzy. Po provedené optimalizaci byly vybrány následující podmínky separace: analýza na: monolitické koloně 25 mm dlouhé Chromolith Flash RP-18e kolony, 4,6 mm I.D. (Merck, Germany), při rychlosti (10 µl/s) za použití mobilní fáze acetonitril metanol (1:1, v/v). Monolitická kolona byla v SIA systému zapojena mezi vícecestný ventil a průtokovou Z celu. Spektrofotometrická detekce byla provedena při vlnových délkách absorpčních maxim pro vitamín A - 324 nm, D - 265 nm, E - 285. Celková délka SIA analýzy byla 400 s (z toho 230 s trvala vlastní separace). Ze základních chromatografických validačních parametrů byly vyhodnoceny faktor symetrie AS, rozlišení RS, počet teoretických pater a opakovatelnost. Faktor symetrie pro vitamín A - 1,309, pro vitamín D2 - 1,302, pro D3 - 1,286 , pro vitamín E - 1,158. Rozlišení píků pro vitamíny A-D2 je 3,607, D2-D3 4,232, D-E 1,532. Počet teoretických pater pro vitamín A 998, pro vitamín D2 1621, pro vitamín D3 2091 a vitamín E 2376. Opakovatelnost byla vypočítána z 6 nástřiků, kdy z výšky píků jednotlivých látek byla vypočítaná relativní směrodatná odchylka. Opakovatelnost je pro vitamín A - 0,53 %, pro vitamín D2 - 0,35 %, pro vitamín D3 - 0,81 % a...
|
|
|
Optimalizace SIA stanovení dakarbazinu
Horáková, Markéta ; Chocholouš, Petr (oponent) ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce)
Dakarbazin byl stanovován sekvenční injekční analýzou s chemiluminiscenční detekcí, při reakci vzorku s manganistanem draselným v prostředí kyseliny sírové. Optimalizovány byly objemy činidel, jejich koncentrace, průtoková rychlost, struktura měřícího cyklu. Také byl zkoušen vliv rozpouštědel (voda, 60% etanol, 60% metanol) a zesilovačů chemiluminiscenční reakce (polyfosfát sodný, kyselina mravenčí, glutaraldehyd a formaldehyd). Výslednými optimálními podmínkami byla sekvence: 40 μl 1 M H2SO4, 3 μl 10 mM KMnO4, 30 μl 10 mM roztoku dakarbazinu, 40 μl 1 M H2SO4, případná aspirace 50 μl zesilovače. Aspirace roztoků probíhala za průtokové rychlosti 100 μl/s, promísení a průtoková rychlost transportu do detektoru byla 40 μl/s, po každém měření byl přidán výplach kyselinou šťavelovou, aby se předešlo usazování KMnO4 v hadičkách. Napětí na fotonásobiči detektoru bylo 420 V. Kalibrační závislosti velikosti CL intenzity na koncentraci dakarbazinu byly nelineární, s možností výběru určité lineární oblasti. Pro roztok dakarbazinu bez zesilovače nebyla lineární oblast nalezena s dostatečně vysokým korelačním koeficientem, pro roztok dakarbazinu s 60% metanolem 0,5 - 10 mmol/l, pro roztok dakarbazinu s 1,39 M kyselinou mravenčí 4 - 10 mmol/l. Detekční limit byl pro roztok dakarbazinu bez zesilovače vypočítán...
|
|
|
Stanovení kyseliny askorbové s využitím metody HILIC - porovnání HILIC stacionárních fází
Bieleszová, Kateřina ; Chocholouš, Petr (oponent) ; Nováková, Lucie (vedoucí práce)
Tato diplomová práce byla zaměřena na stanovení kyseliny askorbové (AA) metodou Hydrophilic Interaction Chromatography (HILIC) a porovnání HILIC stacionárních fází. Stanovení probíhalo za použití tří typů detekce. Pro optimalizaci metody byla použita ultrafialová (UV) detekce. Pro stanovení AA a DHA (kyselina dehydroaskorbová) na jednotlivých stacionárních fázích byly použity detektory na bázi aerosolu Charged Aerosol Detector (CAD) a Nano Quantity Analyte Detector (NQAD). V rámci optimalizace metody byly zjišťovány vhodné podmínky stanovení AA a DHA. Vodnou složku mobilní fáze tvořila ultračistá voda, kyselina octová nebo octan amonný o rostoucí síle pufru a různé hodnotě pH. Organickou složkou byl acetonitril. Během optimalizace byl sledován vliv postupné změny koncentrací vodné a organické složky. Porovnávanými stacionárními fázemi byly Atlantis T3 a fáze vyvinuté speciálně pro stanovení metodou HILIC - Luna HILIC a ZIC-HILIC. V případě kolon Luna HILIC a Atlantis T3 nedošlo k oddělení obou analytů od mrtvého retenčního času. Na koloně ZIC-HILIC došlo k separaci analyzovaných látek, píky však byly příliš široké a nesymetrické. Žádná z uvedených kolon tedy nebyla vyhodnocena jako vhodná pro stanovení AA a DHA. Součástí této diplomové práce bylo také ověření vhodnosti použití detektoru Corona CAD....
|
|
| |
|
|
Studie faktoru teploty při HPLC gradientové a isokratické separaci
Habart, Miroslav ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
4 Abstrakt Tato diplomová práce byla zaměřena na studii vlivu teploty na analýzu fenolických kyselin a flurorochinolonových antibiotik při analáze vysoko účinnou kapalinovou chromatografií. Analýza probíhala na chromatografické koloně Zorbax SB C 18 (50 x 4,6 mm; 1,8 µm) za použití ultrafialové (UV) detekce. V rámci optimalizace metody byly zjišťovány vhodné podmínky pro separaci fenolických kyselin a fluorochinolonových antibiotik. Byl sledován vliv složení a koncentrace vodné složky mobilní fáze a především vliv teploty. Při analýze fenolických kyselin byla použita gradientová eluce. Mobilní fáze se skládala z 0,1% roztoku kyseliny mravenčí a metanolu. Analýza fluorochinolonových antibiotik probíhala isokraticky a mobilní fáze byla složena též z 0,1% roztoku kyseliny mravenčí a metanolu. Základním cílem této diplomové práce bylo s pomocí zvýšené teploty urychlit analýzu a tím ušetřit čas a zároveň i použitá rozpouštědla tvořící mobilní fázi. Při analýze fenolických kyselin byl tento předpoklad splněn a při vyšších teplotách došlo k výraznému urychlení analýzy při dobrém rozlišení jednotlivých píků. Naopak nižší teplota než laboratorní byla příznivá pro analýzu fluorochinolonů. U metod pro fenolické kyseliny i pro fluorochinolonová antibiotika byly provedeny testy způsobilosti systému nástřikem roztoku...
|
|
|
Sledování norfloxacinu, ciprofloxacinu a enrofloxacinu pomocí HPLC-FD ve vzorcích odpadních vod a jejich vliv na životní prostředí
Spurná, Marie ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
8 SOUHRN Znalost koncentrace léčiv v životním prostredí je velice důležitá. Hlavním důvodem je to, že jsou to látky s účinkem na živý organismus a jejich fyzikálně- chemické vlastnosti jsou často podobné škodlivým xenobiotikům. Antibiotika patří mezi nejčastěji předepisovaná léčiva. Fluorochinolonová antibiotika jsou používána k terapii i k profylaxi lidských i zvířecích onemocnění. Především k léčbě širokého spektra respiračních a enterických infekcí a infekcí močových cest. Kromě toho jsou také v subterapeutický dávkých užívány ke stimulaci růstu hospodářských zvířat. Podstatou účinku fluorochinolonů je inhibice DNA-gyrazy. Jsou účinné proti gram- negativním i gram-pozitivním bakteriím. Účinek fluorochinolonů je závislý na jejich chemické struktuře, nezbytná je přítomnost volné karboxylové skupiny v poloze 3 a oxoskupiny v poloze 4. Prostřednictvím těchto skupin dochází k vazbě na DNA-gyrázu. Karboxylová skupina a amino skupina určují jejich acidobazické vlastnosti. Jejich aktivita je tedy také významně závislá na pH prostředí. 25-75% podaných antibiotik je z organismu vyloučeno v nezměněné formě. Metabolismem vznikají sloučeniny, které mohou být méně nebo více učinné než původní látka. Část těchto sloučenin je odstraněno v čistírnách odpadních vod. Určitý podíl ale ve vodě zůstává. Tak se fluorochinolony...
|
|
|
Separace a stanovení betametazonu a chloramfenikolu ve složených farmaceutických přípravcích pomocí monolitních sorbentů zapojených v systému sekvenční injekční analýzy
Salabová, Markéta ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
SEPARACE A STANOVENÍ BETAMETHASONU A CHLORAMFENIKOLU VE SLOŽENÝCH FARMACEUTICKÝCH PŘÍPRAVCÍCH POMOCÍ MONOLITNÍCH SORBENTŮ ZAPOJENÝCH V SYSTÉMU SEKVENČNÍ INJEKČNÍ ANALÝZY Abstrakt Byl vypracován postup separace a následného stanovení betamethasonu a chloramfenikolu v očních kapkách BETABIOPTAL® . Analýza probíhala za použití mobilní fáze acetonitril/voda (30:80, v/v) o pH = 5, s nastavenou rychlostí průtoku 0,6 ml min-1 a vlnovou délkou detekce 241 nm pro betamethason a 278 nm pro chloramfenikol. Vnitřním standardem s podobnými vlastnostmi jako obě účinné látky byl zvolen z třinácti testovaných látek propylparaben. V první fázi vývoj separačního procesu probíhal na HPLC. Získané údaje byly v další fázi práce přeneseny na SIA systém. Monolitická kolona Chromolith (TM) Flash RP - 18e, 25 x 4,6 mm s 5 mm předkolonou (Merck, Germany) byla zapojena mezi vícecestný ventil konvenčního (SIA) systému a průtokovou Z celu. Nejprve byl vytvořen postup krok za krokem v programu Fialab for Windows 5.0, podle kterého poté probíhala přesně naprogramovaná separační analýza. Optimalizovaná metoda byla před vlastním měřením validována, což dokládají následující údaje. Limit detekce byl pro betamethason 1,0 mg/l, pro chloramfenikol 0,5 mg/l a pro vnitřní standard propylparaben 1,0 mg/l. Limit kvantifikace byl pro betamethason...
|
|
| |
|
|
Sekvenční injekční chromatografie
Chocholouš, Petr ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Polášek, Miroslav (oponent) ; Blešová, Marie (oponent)
Předložená práce přináší rozšíření aplikací sekvenční injekční analýzy v oblasti farmaceutické analýzy. Zabývá se možnostmi chromatografie pro úpravu vzorku před vlastním stanovením analytu. Soustředí se na zapojení monolitických kolon v systému SIA umožňujících provádět simultánní stanovení několika látek a analyzovat tak vzorky s matricí nebo jednoduchých směsí (farmaceutické přípravky). Nově vytvořená metoda je nazývána sekvenční injekční chromatografie (SIC) a představuje další generaci průtokových metod. Zapojením krátké monolitické kolony vyznačující se nízkým zpětným tlakem do SIC systému vyústilo v zavedení separačního prvku do dosud neseparační průtokové metody. Komerčně vyráběné monolitické kolony s reverzní fází se jeví jako vhodné pro stanovení léčiv ve směsných léčivých přípravcích. SIC umožňuje velmi rychlé stanovení směsných vzorků bez nebo jen s minimální předchozí off-line úpravou. Analýza vzorků s komplikovanější matricí (krémy, masti) byla provedena po provedení extrakce rozpouštědlem ze vzorku. Bylo také studováno využití různých délek monolitických kolon. První experimentální práce (příloha I) byla první prací na SIC systému jejíž cílem byla bezproblémová implementace monolitické kolony a následné otestování na léčivém přípravku (mast). Byly optimalizovány jednotlivé součásti...
|
host ::
RSS.