|
| |
|
|
Studium možností farmakologické ochrany srdečních buněk před oxidačním stresem a antracyklinovými cytostatiky
Jansová, Hana ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Hrdina, Radomír (oponent) ; Jun, Daniel (oponent)
UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ KATEDRA BIOCHEMICKÝCH VĚD Kandidát: Mgr. Hana Jansová Vedoucí práce: Doc. PharmDr. Tomáš Šimůnek, Ph.D. Název disertační práce: STUDIUM MOŽNOSTÍ FARMAKOLOGICKÉ OCHRANY SRDEČNÍCH BUNĚK PŘED OXIDAČNÍM STRESEM A ANTRACYKLINOVÝMI CYTOSTATIKY I když je rozvoj kardiovaskulárních onemocnění spojen s mnoha rizikovými faktory, předpokládá se, že v mnoha z nich hraje důležitou roli oxidační stres. K jeho vzniku může přispívat i produkce volných radikálů katalyzovaná volnými ionty železa, při které je tvořen velmi reaktivní a toxický hydroxylový radikál. Možnou strategií bránící propagaci oxidačního stresu může být chelatace volného železa. Použití klasických chelátorů železa u patologických stavů bez přetížení organismu železem může být ale spojeno s rizikem toxicity v důsledku deplece železa. Z tohoto důvodu se tato práce zabývá nejen studiem kardioprotektivních vlastností chelátorů železa, ale také od nich odvozených prochelátorů. V této práci jsme se věnovali prochelátorům železa, které nemají téměř žádnou afinitu k iontům železa, dokud nejsou aktivovány v patologických podmínkách oxidačního stresu. Dlouhou dobu se předpokládalo, že oxidační stres je i hlavní příčinou antracyklinové kardiotoxicity, avšak nedávné studie se od této teorie...
|
|
|
Ovlivnění buněčné direrenciace u nádorových buněk analýzou exprese proteinu Serca3 jako markeru diferenciace
Šerá, Pavlína ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
V předložené práci jsme studovali proces buněčné diferenciace navozený inhibitory histon deacetyláz v buněčných liniích získaných z různých typů nemalobuněčného karcinomu plic. Cílem práce bylo studovat vzájemné spoluovlivnění procesu buněčné diferenciace a exprese proteinu SERCA (ATPázy Sarko/Endoplazmatického retikula), který zajišťuje transport vápníku z cytozolu do endoplazmatického retikula. Buněčné linie různých plicních nádorů byly kultivovány in vitro za přidání různých inhibitorů histon deacetylázy ze skupiny mastných kyselin s krátkým řetězcem. Exprese SERCA proteinu byla hodnocena pomocí metody Western blot za použití primárních monoklonálních protilátek IID8 a PLIM430, které rozpoznávájí enzymy SERCA2 a SERCA3. Naše experimenty ukazují, že exprese proteinů SERCA a proces buněčné diferenciace jsou vzájemně propojeny ve všech sledovaných buněčných liniích nádoru plic (A549, Calu-3, ChaGoK-1, NCI-H292 and NCI-H460). Po navození buněčné diferenciace inhibitory histon deacetylázy jako jsou butyrát, valerát či fenylbutyrát sodný, byla pozorována především zvýšená exprese proteinu SERCA3. Zvýšení exprese proteinu SERCA3 bylo specifické, neboť úroveň exprese proteinu SERCA2 i po přidání léčiv zůstala nezměněna. Souhrnem lze říci, že naše výsledky potvrzují a rozšiřují původní hypotézu...
|
|
|
Studium protektivních vlastností série nových aroylhydrazonových chelátorů iontů železa před poškozením srdečních buněk oxidačním stresem
Pravdíková, Kateřina ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Lenčová, Olga (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Kateřina Pravdíková Školitel: Doc. PharmDr. Tomáš Šimůnek, Ph.D. Název diplomové práce: Studium protektivních vlastností série nových aroylhydrazonových chelátorů iontů železa před poškozením srdečních buněk oxidačním stresem. Oxidační stres je definován jako nerovnováha mezi oxidanty a antioxidanty ve prospěch oxidantů. Při tomto ději dochází prostřednictvím Haber-Weissovy reakce, kde se jako katalyzátor účastní redoxně aktivní železo, k tvorbě reaktivních forem kyslíku. Ty hrají významnou roli v patogenezi mnoha onemocnění včetně kardiovaskulárních. Po objasnění úlohy železa v těchto dějích se pozornost zaměřila na chelátory železa. Jejich užití pomáhá odstranit volné ionty železa, které tak nemohou katalyzovat radikálové reakce, což vede k zamezení dalšího rozvoje oxidačního poškození myokardu. Cílem této práce bylo studium kardioprotektivních účinků nově syntetizovaných aroylhydrazonových derivátů chelátoru železa SIH proti toxickému působení peroxidu vodíku in vitro. Zkoumána byla také jejich vlastní toxicita. K hodnocení protektivních i toxických účinků jednotlivých chelátorů byla použita buněčná linie H9c2 odvozená od potkaních embryonálních srdečních myoblastů. Vyhodnocení bylo provedeno...
|
|
|
Thiopurinmethyltransferéza - klinický význam genotypizace a fenotypizace
Černá, Blanka ; Beránek, Martin (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Blanka Černá Školitel: Doc. PharmDr. Martin Beránek, PhD. Název diplomové práce: Thiopurin S-methyltransferasa - klinický význam genotypizace a fenotypizace Thiopurin S-methyltransferasa (TPMT) katalyzuje S-methylaci thiopurinových léčiv jako jsou 6-merkaptopurin a thioguanin. Polymorfismy v genu pro TPMT představují důležitý fakt v oblasti klinické farmakogenetiky. Velké rozdíly ve stupni aktivity TPMT v lidské tkáni jsou důsledkem přítomnosti mutace v genu pro tento enzym. Tyto polymorfismy jsou tak důležitým faktorem v účinnosti léčby thiopuriny. Nízká hodnota aktivity enzymu se objevuje v přítomnosti mutace v genu pro tento enzym, vyšší hodnota aktivity enzymu naopak bez přítomnosti mutace. Genotypizovali jsme TPMT gen pomocí metody real-time PCR u vybrané skupiny pacientů (n=55) s autoimunitními onemocněními. Pacienti byli v průměrném věku 16,7 roku. Z nesrážlivé krve sbírané do EDTA (n=55) byla izolována DNA pomocí QIAmp Mini Kitu (Qiagen, Německo) a použita pro genotypizaci enzymu TPMT. Genotypizace byla provedena metodou real time PCR metody v Light Cycleru (Roche, Německo). TPMT byla fenotypizována na Lékařské fakultě v Hradci Králové na Ústavu farmakologie. Pro fenotypizaci byl použit...
|
|
|
Vývoj metod pro in vitro testování potenciálních léčiv Alzheimerovy choroby
Hrabinová, Martina ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Soukup, Ondřej (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická Fakulta v Hradci Králové Zdravotnická bioanalytika - odborný pracovník v laboratorních metodách Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Martina Hrabinová Školitel: doc. PharmDr. Tomáš Šimůnek Ph.D. Školitel specialista: pplk. Doc. PharmDr. Daniel Jun Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj metod pro in vitro testování potenciálních léčiv Alzheimerovy choroby Alzheimerova choroba (Alzheimer's disease, AD) je neurodegenerativní onemocnění s rostoucí incidencí. Ač od objevu této nemoci uplynulo již mnoho desítek let, stále neexistuje kauzální léčba, pouze možnost zlepšit dočasně kvalitu života pomocí centrálních inhibitorů acetylcholinesterasy a memantinu. Cílem této práce bylo zavést jednouchou kolorimetrickou metodu stanovení aktivity prolyloligopeptidasy (POP) a beta-sekretasy (BACE), důležitých enzymů zapojených v patogenezi AD, využít těchto metod pro screeningové hodnocení látek navržených jako potenciální léčiva AD a dále zhodnotit jejich antioxidační a antiradikálovou aktivitu. Výsledky ukázaly, že testované látky jsou slabými inhibitory POP, ve srovnání se standardním inhibitorem Z-gly-pro-prolinalem. Standardní inhibitory cholinesterasy, využívané k léčbě AD, nevykázaly žádné schopnosti inhibovat POP. Metodu stanovení BACE se nepodařilo realizovat. Všechny...
|
|
|
Studium nových fotosensitizérů ze skupiny ftalocyaninů a azaftalocyaninů pro fotodynamickou léčbu nádorových onemocnění
Macháček, Miloslav ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Řezáčová, Martina (oponent) ; Mosinger, Jiří (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát Mgr. Miloslav Macháček Školitel doc. PharmDr. Tomáš Šimůnek, Ph.D. Název disertační práce Studium nových fotosensitizérů ze skupiny ftalocyaninů a azaftalocyaninů pro fotodynamickou léčbu nádorových onemocnění Fotodynamická terapie (PDT) nádorů je neinvazivní metoda určená k léčbě solidních nádorů. Jejími základními složkami jsou molekulární kyslík, světlo a fotosensitizér (PS) - komponenty samy o sobě netoxické, ale v kombinaci vedoucí k tvorbě reaktivních forem kyslíku (ROS; především singletového kyslíku), které poškozují buněčné struktury a vedou k buněčné smrti. Způsob, jakým je nádorová buňka zničena závisí především na typu PS, délce ozáření a lokalizaci léčiva, protože singletový kyslík je vysoce reaktivní a je schopen jen minimální difúze v biologických systémech. Kromě přímého cytotoxického působení PS se na eradikaci nádoru podílí také poškození cév (deprivace živin a kyslíku) a aktivace imunitního systému. V současné době se při návrhu struktur PS přistupuje buď vytvářením vhodné kombinace dostatečně aktivní látky a nosičového systému, tvorbou cílených konjugátů, nebo syntézou látek s vysokou aktivitou a minimální mírou tvorby agregátů ve vodném prostředí. V naší práci jsme se zaměřili...
|
|
|
Hodnocení cytotoxických účinků vybraných akcelerantů transdermální penetrace u fibroblastů
Tükörová, Katarína ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Vávrová, Anna (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Katarína Tükörová Školitel: Doc. PharmDr. Tomáš Šimůnek, Ph.D. Název diplomové práce: Hodnocení cytotoxických účinků vybraných akcelerantů transdermální penetrace u fibroblastů Akceleranty transdermálnej penetrácie uľahčujú prestup liečivej látky cez kožnú bariéru do systémovej cirkulácie alebo do priľahlých tkanív. Oproti klasickým cestám podávania liečiv má tento prístup mnohé výhody, preto v posledných desaťročiach prebieha v tejto oblasti intenzívny výskum. Mechanizmus účinku akcelerantov nie je doteraz presne známy. Reverzibilne znižujú nepriestupnosť kože nešpecifickými interakciami so zložkami stratum corneum (SC), proteínmi a lipidmi, alebo menia rozdeľovaciu rovnováhu medzi SC a liečivom. Cieľom našej práce bolo určenie cytotoxických účinkov vybraných akcelerantov stanovením hodnôt IC50 nových látok syntetizovaných na našom pracovisku s klinicky používanými. V našich pokusoch sme použili myšie embryonálne adherentné fibroblasty 3T3. K stanoveniu viability buniek sme využili MTT test, kedy živé bunky boli schopné redukovať žlté farbivo na modrý formazán. Testy sme realizovali na 96-jamkových doštičkách, kde sme inkubovali bunky s vybranými koncentráciami akcelerantov po dobu 48 hodín. K...
|
|
|
Studium role glutathionu u poškození srdečních buněk antracyklinovými cytostatiky
Vávrová, Anna ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Kvasničková, Eva (oponent)
Klinické použití antracyklinových cytostatik je omezeno rizikem kardiotoxicity těchto látek. Přestože přesné mechanismy kardiotoxicity nebyly dosud plně objasněny, základní vliv je přisuzován vzniku volných radikálů a oxidačnímu stresu kardiomyocytů. Ke kardiotoxicitě antracyklinů může přispívat jejich vysoká kumulace v srdeční tkáni, vysoký obsah mitochondrií v kardiomyocytech a relativně malá kapacita antioxidačních systémů (superoxid dismutasy, katalasy a glutathion peroxidasy). Tato studie se zabývá studiem role glutathionu v kardiotoxicitě způsobené daunorubicinem in vitro a in vivo. Obsah celkového a oxidovaného glutathionu (GSH/GSSG) byl stanovován spektrofotometrickou metodou za použití dithiobis(2-nitrobenzoové kyseliny) v buněčné linii kardiomyoblastů H9c2 vystavené působení daunorubicinu (0,1 - 10 µM) a srdeční tkáni levé komory králíků, kterým byl podáván daunorubicin (3 mg/kg jednou týdně po 10 týdnů). Po expozici buněk daunorubicinu byla pozorována toxicita (IC50 = 0,48 µM), hladiny celkového glutathionu byly sníženy, tyto změny však nebyly statisticky významné a byly bez zřetelné dávkové závislosti. Hladiny oxidovaného glutathionu zůstaly nezměněny. Ani buthionin sulfoximin (BSO, inhibitor syntézy glutathionu), ani 2-oxo-4-thiazolidinkarboxylová kyselina (OTC, prekurzor syntézy...
|
|
|
Gene expression profiling after experimental perinatal asphyxia and the effect of complement-derived anaphylatoxin C3a
Šourková, Hana ; Wsól, Vladimír (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
Úvod: Komplement se účastní ochrany a reparace mozku po jeho poškození. Pro porozumění molekulárním mechanismům těchto procesů jsme provedli profilování genové exprese s využitím kvantitativní polymerázové řetězové reakce v reálném čase (qPCR), která je jednou z nejpřesnějších moderních strategií pro analýzu genové exprese. Projekt: Projekt byl zaměřen na profilování exprese vybraných genů potenciálně ovlivňujících ztrátu a ochranu neuronální tkáně, a to během tří týdnů po hypoxicko-ischemickém poškození mozku, modelujícím perinatální asphyxii. Nedávné experimenty ukázaly, že exprese C3a pod kontrolou GFAP promotoru (C3a/GFAP) zmenšila poškození hipokampu po ligaci levé karotidy u novorozených myší o 50% ve srovnání s kontrolními myšmi. Projekt rovněž posuzuje jak místní exprese C3a/GFAP transgenu ovlivňuje expresi vybraných genů. Exprese genů byla analyzována na vzorcích z ipsilaterální a kontralaterální části hipokampu a ipsilaterální části mozkové kůry, které byly získány v čase poranění, 6 a 24 hodin; 3, 7 a 21 dní po něm. Výsledky: Výsledky ukázaly, že se regulace genové exprese po hypoxicko-ischemické příhodě liší v čase a intenzitě a může být také odlišná v příslušných oblastech mozku. Zkoumané geny lze zařadit do rodin se vztahem k uvolnění a deaktivaci neurotransmiteru (SYN II, SYN III,...
|
host ::
RSS.