|
|
Studium regulace regenerace jater za využití metod molekulární genetiky.
Rychtrmoc, David ; Červinková, Zuzana (vedoucí práce) ; Leníček, Martin (oponent) ; Pospíšilová, Šárka (oponent)
Studium regulace regenerace jater za využití metod molekulární genetiky Regenerace jater je pozoruhodný děj vydatné obnovy tkáně nastupující po celé škále poškození. Regenerační schopnost jater je mezi útrobními orgány savců ojedinělá a hraje roli v patofyziologii různorodých jaterních onemocnění. Proces obnovy jater probíhá ve třech fázích, z nichž terminace byla dosud nejméně objasněna. Dokonce i otázky načasování terminace regenerace a úplnosti zotavení orgánu zůstávají i přes desítky let studia kontroverzní. Cílem předkládané disertační práce bylo analyzovat údaje o genové expresi ve vztahu k pozdní fázi jaterní regenerace. Hodnotili jsme průběh spontánního zotavování potkanů po 2/3 parciální hepatektomii. Vzhledem k chybění všeobecně uznávaného parametru úplnosti jaterní regenerace jsme navrhli vlastní ukazatel %LReg, založený na údajích o hmotnosti jater a celého těla zaznamenávaných v průběhu studie. Analýza genové exprese byla provedena nejprve metodou DNA čipů a následně pomocí RT-PCR v reálném čase. Stanovením exprese v celogenomovém měřítku jsme získali obsáhlou sadu dat pokrývající transkripční dynamiku čtrnácti pooperačních dnů po 2/3 parciální hepatektomii u dospělých potkaních samců. Tato intervence provedená u potkanů je zlatým standardem in vivo studií v oblasti regenerace jater a na našem...
|
|
|
Role Nrf2 u vybraných modelů poškození jater
Mezera, Vojtěch ; Červinková, Zuzana (vedoucí práce) ; Brůha, Radan (oponent) ; Ehrmann, Jiří (oponent)
Role Nrf2 u vybraných modelů poškození jater Oxidační stres provází řadu typů poškození jater, včetně jaterní resekce a toxického poškození jater. Dvoutřetinová parciální hepatektomie (PHx) je zavedený model pro studium regenerace jater po resekci. Sledovali jsme vliv epigalokatechingalátu (EGCG), antioxidantu ze zeleného čaje, na časnou fázi regenerace jater po PHx. Samcům potkanů kmene Wistar jsme aplikovali tři dny po sobě vodu pro injekce nebo EGCG, poté potkani podstoupili laparotomii nebo PHx. Zjistili jsme nižší inkorporaci bromdeoxyuridinu, což poukazuje na nižší syntézu DNA, u hepatektomovaných potkanů dostávajících EGCG v dávce 50 mg/kg než u potkanů dostávajících vodu. Aktivita kaspáz 3/7, exprese p-p53 a hladiny tkáňového IL-6 vykazovaly obdobný trend. EGCG v dávce 20 mg/kg tyto účinky neměl. Další potkaní samci kmene Wistar podstoupili PHx nebo laparotomii. 24 hodin od výkonu byly izolovány hepatocyty a vystaveny různým koncentracím EGCG po dobu 24 hodin. Morfologická kritéria, testy buněčné viability a syntéza albuminu prokázaly toxicitu EGCG od koncentrace 10 µmol/l. Syntéza DNA byla vyšší v hepatocytech izolovaných z potkanů po PHx a inhibována EGCG. Dále jsme zjistili, že EGCG zvyšoval aktivitu kaspáz 3 a 7, zejména v hepatocytech z potkanů po PHx. Ve druhé části naší studie jsme se...
|
|
|
Studium změn energetického metabolismu hepatocytů: působení oxidačního stresu a trijodtyroninu
Endlicher, René ; Červinková, Zuzana (vedoucí práce) ; Kalous, Martin (oponent) ; Rauchová, Hana (oponent)
SOUHRN Studium změn energetického metabolismu hepatocytů: působení oxidačního stresu a trijodtyroninu Játra jsou životně důležitým orgánem, vzhledem ke svému postavení v cirkulaci se dostávají ve zvýšené míře do styku s řadou toxických látek, které mohou způsobit poškození hepatocytů. Mechanismy odpovědné za poškození hepatocytů jsou různé, avšak jedním z nejvýznamnějších mechanismů hepatotoxického účinku je oxidační stres způsobený zvýšenou produkcí volných radikálů. Jedním z cílů působení toxických látek je respirační řetězec mitochondrií s následným narušením energetického metabolismu buňky. Působení oxidačního stresu na buňky je velmi komplexní a jeho mechanismy nejsou dosud zcela objasněny. Cílem naší práce bylo proto sledovat dopad oxidačního stresu na energetický metabolismus hepatocytů na modelu izolovaných buněk a izolovaných mitochondrií. Hodnotili jsme vliv oxidačního stresu na aktivitu enzymů dýchacího řetězce a na funkci mitochondriálního póru přechodné permeability (MPTP - mitochondrial permeability transition pore), jehož otevření indukuje kaskádu apoptotických a nekrotických procesů. Získané výsledky prokázaly selektivní působení oxidačního stresu na aktivitu enzymů dýchacího řetězce. Tert-butylhydroperoxid (t-BHP) signifikantně inhibuje oxidaci NADH- dependentních substrátů, zatímco oxidace...
|
|
|
Intrakraniální tlak a jeho změny při léčbě akutního jaterního selhání metodou FPSA/Prometheus v chirurgickém modelu na praseti
Pražák, Josef ; Cvachovec, Karel (vedoucí práce) ; Červinková, Zuzana (oponent) ; Kieslichová, Eva (oponent)
Úvod: Mozkový edém je dobře známá a fatální komplikace akutního jaterního selhání (ALF - acute liver failure). Vliv léčby arteficiálními eliminačními metodami na cerebrální poškození u ALF je většinou, pokud vůbec, monitorován měřením intrakraniálního tlaku. Cílem této práce je posoudit vliv metody frakční plasmatické separace a adsorpce( FPSA - Fractionated Plasma Separation and Adsorption) - jedné z nebiologických eliminačních metod, na intrakraniální tlak. Druhým cílem této práce je vyhodnotit možnou roli intracerebrální mikrodialýzy v monitoraci efektivity léčby akutního jaterního selhání metodou FPSA. Metody. Ve dvou experimentech na velkém zvířeti - praseti, byly použity dva různé chirurgické modely ALF. V prvním experimentu byla experimentální zvířat rozdělena na dvě skupiny, skupinu ALF, u které bylo navozeno pouze jaterní selhání a skupinu FPSA, kde bylo navozeno jaterní selhání a následně u ní proběhl jeden cyklus léčby metodou FPSA. U obou skupin byl měřen intrakraniální tlak a hodnoty byly následně statisticky porovnány. V druhém experimentu byla porovnávána data z monitorace mikrodialýzou a intrakraniální tlak mezi třemi skupinami pokusných zvířat, tedy mezi skupinou s pouhým navozením ALF (ALF skupina), skupinou s ALF, u které proběhl šestihodinový cyklus léčby metodou FPSA (FPSA skupina), a...
|
|
|
Možnosti indukce UCP-2 (uncoupling protein 2) v hepatocytech potkana v podmínkách in vivo
Bolehovská, Radka ; Červinková, Zuzana (vedoucí práce) ; Kalous, Martin (oponent) ; Novotný, Dalibor (oponent)
Souhrn Úvod Odpřahující (uncoupling) protein 2, objevený v roce 1997, je prvním popsaným homologem odpřahujícího proteinu 1. Odpřahující proteiny (UCP) zvyšují permeabilitu vnitřní mitochondriální membrány pro protony, snižují účinnost energetické přeměny, inhibují syntézu ATP a stimulují uvolnění energie ve formě tepla. UCP také zvyšují oxidaci substrátů a redukují produkci reaktivních kyslíkových radikálů v mitochondriích. Cíle Hlavním cílem projektu bylo zavést a optimalizovat kvantitativní real-time PCR pro detekci kinetiky exprese mRNA UCP2 u vzorků jaterní tkáně potkana. Prezentovaná studie zjišťovala účinek akutního a chronického působení trijodtyroninu a efekt parciální hepatektomie na množství mRNA odpřahujícího proteinu 2 u potkanů kmene Wistar. Výsledky Intraperitoneální injekce jedné dávky trijodtyroninu (200 μg/kg tělesné hmotnosti potkanů) zvýšila téměř dvakrát mRNA expresi odpřahujícího proteinu 2 (p < 0,01 vs. kontrolní skupina) v jaterní tkáni po 12 hodinách po aplikaci. Koncentrace trijodtyroninu a volného trijodtyroninu se v séru zvýšila 122-krát, respektive 77-krát (p < 0,001). Statisticky nevýznamná indukce exprese mRNA UCP2 byla pozorována po aplikaci tří dávek trijodtyroninu (3 200 μg/kg tělesné hmotnosti potkanů). Maximální hodnota celkového T3 byla oproti kontrolní skupině...
|
|
|
The role of toll-like receptors in the pathogenesis of liver diseases
Petrášek, Jan ; Jirsa, Milan (vedoucí práce) ; Tlaskalová - Hogenová, Helena (oponent) ; Červinková, Zuzana (oponent)
Identifikační záznam: PETRÁŠEK, Jan. ÚLOHA TOLL-LIKE RECEPTORŮ V PATOGENEZI JATERNÍCH ONEMOCNĚNÍ. [The role of toll-like receptors in the pathogenesis of liver diseases]. Praha, 2010. 198s., Disertační práce. Univerzita Karlova v Praze, 1. lékařská fakulta, Laboratoř Experimentální Hepatologie IKEM. Vedoucí práce: Milan Jirsa. Abstrakt Společným jmenovatelem nejčastějších onemocnění jater je aktivace mechanismů vrozené imunity, které přispívají k rozvoji zánětu a poškození jaterního parenchymu. Klíčovou úlohu v rozvoji jaterního poškození hrají Toll-like receptory, jejichž charakterizace v posledním desetiletí vedla přehodnocení patofyziologie některých jaterních onemocnění. Předkládaná práce studuje význam alelických variant v genech kódujících proteiny Toll-like receptorové signální kaskády a mezibuněčné signalizace v patogenezi alkoholické nemoci jater, přináší nový pohled na probiotika v léčbě nealkoholické steatohepatitidy a nové poznatky o protizánětlivém působení interferonů I. typu u některých jaterních chorob. Abstract Recent reports suggest that majority of chronic and acute liver diseases share a significant degree of liver inflammation and injury attributable to innate immunity, activated through Toll-like receptors. Detailed characterization of Toll-like receptor sigaling cascades in the last...
|
|
|
Enterohepatic circulation of bilirubin
Zelenka, Jaroslav ; Vítek, Libor (vedoucí práce) ; Entlicher, Gustav (oponent) ; Červinková, Zuzana (oponent)
Bilirubin, hlavní produkt degradace hemu, působí fyziologicky jako antioxidant, zatímco ve vysokých koncentracích může být neurotoxický. Z těla je vylučován jako součást žluči do střeva, kde zůstává vázán na střevní obsah a je postupně metabolizován střevní mikroflórou. Část bilirubinu je resorbována zpět do oběhu a prochází tzv. enterohepatální cirkulací (EHC). Náplní této disertační práce je studium metabolismu a EHC bilirubinu. Bilirubin se ve střevě váže s dvoumocnými kationty a tím je utlumena jeho EHC. Nicméně případné terapeutické podávání takových látek může ovlivnit metabolismus anorganických iontů v těle. Výsledky naší první studie ukazují, že pokud byly Gunnovy krysy s vrozenou hyperbilirubinémií krmeny nerozpustným metakrylanem zinečnatým, jejich hladiny sérového bilirubinu poklesly, zatímco koncentrace zinku v krvi zůstala nezměněna a zároveň se neobjevily žádné patologické změny trávicího traktu. EHC bilirubinu je významně ovlivněna také rychlostí redukce bilirubinu střevní mikroflórou, především bakteriemi rodu Clostridium. V naší druhé studii jsme na Gunnových krysách prokázali, že antibiotická terapie vedoucí k eliminaci střevních klostridií vedla k významnému vzrůstu hyperbilirubinémie, zatímco následná kolonizace kmenem C. perfringens s vysokou aktivitou enzymů redukujících bilirubin...
|
|
|
Studium signálních systémů se speciálním zaměřením na roli oxidu dusnatého: exprese, regulace a farmakologické modulace v hepatocytech a jiných buňkách
Kutinová Canová, Nikolina ; Farghali, Hassan (vedoucí práce) ; Červinková, Zuzana (oponent) ; Martásek, Pavel (oponent)
Oxid dusnatý (NO) se podílí na překvapivě velkém množství životně důležitých fyziologických a patofyziologických dějů. Exprese syntázy oxidu dusnatého, endoteliální (eNOS) a inducibilní (iNOS), byla prokázána mimo jiné také v potkaních játrech a bílé tukové tkáni. Proto cíli této dizertační práce bylo poskytnout in vitro data o NO v játrech a bílé tukové tkáni a stanovit: 1) působení selektivních imunosupresivních látek, cyklosporinu A (CsA) a takrolimu (FK 506), a specifických a nespecifických iNOS inhibitorů na produkci NO a expresi iNOS během endotoxemického poškození za použití primárních kultur potkaních hepatocytů; 2) spontánní produkci NO za různých kultivačních podmínek spolu s porovnáním jejího vlivu na funkční stav hepatocytů v konvenční buněčné kultuře a v hepatocytárních bioreaktorech; 3) účinky S-nitroso-N-acetylpenicillaminu (SNAP), D- galaktosaminu (D-GalN), lipopolysacharidu (LPS), LPS+D-GalN a thapsigarginu (TG), selektivního inhibitoru Ca2+ -ATPázy sarkoendoplazmatického retikula, na apoptotické/nekrotické ukazatele ve vztahu k produkci NO; 4) vliv LPS na lipolýzu s ohledem na stimulaci iNOS; a 5) vzájemné působení NO produkce a β3-adrenoreceptorové (β3- AR)/cAMP kaskády na lipolýzu epididymálních potkaních adipocytů v kultuře. Zjistili jsme, že CsA, FK 506, N-nitro-L-argininmethylester...
|
|
| |
|
| |
host ::
RSS.