|
|
"Studium lipoproteinů metodou SEC-LLSD"
Šinglárová, Simona ; Tvrzická, Eva (vedoucí práce) ; Staňková, Barbora (oponent)
Pro diagnostiku poruch lipidového metabolismu, které je třeba podrobně sledovat u řady společensky závažných onemocnění, se v posledních 10 letech ukazuje jako velmi přínosné stanovení velikosti částic jednotlivých lipoproteinových tříd, především lipoproteinu o nízké hustotě. Z několika známých metod jsme zvolili gelovou filtraci s detektorem rozptylu světla. Lipoproteinové frakce byly separovány ultracentrifugací z plazmy čtyř dárců. Rutinně byly stanoveny biochemické parametry - celkový cholesterol, triacylglycerol a celková bílkovina - pro plazmu i pro jednotlivé frakce. Kolona plněná silikagelem BioBasic SEC 300x7,8 mm byla kalibrována proteiny thyroglobulinem, ovalbuminem a angiotenzinem II s UV detekcí (280 nm). Tyto proteiny nejsou vhodné (velikostí) pro kalibraci metody SEC- LLSD. Proto byly vyzkoušeny latexové kuličky různých modifikací a velikostí. Jediný záznam se podařilo získat od latexových kuliček barvených tmavě modře o velikosti 55 nm, ostatní zůstaly zadržené v koloně. Lipoproteinové frakce VLDL a LDL byly zkoumány metodou SEC-LLSD při různém pH (7,3; 7,5; 7,7; 8,0) a iontové síle (0,1M fosfátový pufr, 0,1M fosfátový pufr a 0,9% NaCl, 0,05M fosfátový pufr a 0,9% NaCl). Optimální mobilní fáze je 0,1M fosfátový pufr a 0,9% NaCl. Dále byla provedena analýza spojených frakcí VLDL a...
|
|
|
Regulace aktivity lipoproteinové lipázy v cirkulaci
Zemánková, Kateřina ; Kovář, Jan (vedoucí práce) ; Vrablík, Michal (oponent)
Lipoproteinová lipáza (LPL) je klíčový enzym v metabolismu lipoproteinů. Enzym katalyzuje hydrolýzu triacyglycerolů (TG), které jsou součástí chylomikronů a lipoproteinů o velmi nízké hustotě (VLDL). V současné době však není plně objasněn mechanismus regulace tohoto proteinu. Cílem práce proto bylo studium vybraných aspektů regulace aktivity LPL. Nedávno objevený apolipoprotein A-V (apo A-V) významně ovlivňuje triglyceridémii a předpokládá se, že by mohl být aktivátorem LPL. Jeho koncentrace v cirkulaci je ovšem příliš nízká a proto bylo zjišťováno, zda většina apo A-V není vázána na heparansulfátproteoglykanu (HSPG) cévní stěny podobně jako LPL. Intravenózní aplikace heparinu byla u zdravých dobrovolníků spojena s očekávaným vzestupem aktivity LPL, koncentrace apo A-V se však po podání heparinu neměnila. Tyto nálezy tedy nesvědčí pro hypotézu, že podstatná část apo A-V je v cirkulaci vázána na HSPG kapilárního endotelu. Úlohu v regulaci LPL hraje i konzumace alkoholu. Zatímco dlouhodobá umírněná konzumace aktivitu enzymu zvyšuje, předpokládá se, že bezprostředně po konzumaci alkoholu dochází k inhibici aktivity LPL. Pro tuto inhibici však v literatuře chybí přímé důkazy. Dalším cílem studie tedy bylo zjistit, jak je aktivita LPL regulována akutním podáním alkoholu zdravým dobrovolníkům. Aktivita...
|
host ::
RSS.