|
|
Optimalizace složení mobilních fází pro analýzu peptidů vícemodální chromatografií
Tužil, Ondřej ; Lenčo, Juraj (vedoucí práce) ; Řehulka, Pavel (oponent)
Farmaceutická Fakulta v Hradci Králové, Univerzita Karlova Katerdra Analytické chemie Kandidát: Ondřej Tužil Školitel: PharmDr. Juraj Lenčo Ph.D. Název diplomové práce: Optimalizace složení mobilních fází pro analýzu peptidů vícemodální chromatografií Při bottom-up proteomických analýzách prováděných pomocí kapalinové chromatografie s hmotnostní detekcí se mobilní fáze okyseluje slabými kyselinami, které intenzitu analytů při detekci netlumí v takové míře jako běžně používané kyseliny pro separace bez hmotnostní detekce. Takovým aditivem mobilní fáze je kyselina mravenčí, která je nejběžněji používaná v koncentraci 0,1 % (v/v). Tato práce byla zaměřena na hledání nejnižší možné koncentrace kyseliny mravenčí, která by v kombinaci s vícemodální stacionární fází kolony ACQUITY UPLC CSH C18 od firmy Waters stále zajišťovala účinnou separaci peptidů, přičemž by se zároveň mělo dosáhnout zvýšení odezvy v hmotnostním spektrometru. Nejprve byly provedeny separace standardů peptidů na kapalinové chromatografii s UV detekcí s klesajícím množstvím kyseliny mravenčí v mobilní fázi. Bylo zjištěno, že pro vyhovující parametry separace peptidů je možné použít výrazně nižší koncentrace kyseliny mravenčí. Tři nejnižší koncentrační hladiny byly použity k analýzám s hmotnostní detekcí, kde byl skutečně pozorován...
|
host ::
RSS.