|
|
Molekulárně biologické metody v laboratorní diagnostice patogenních leptospir
Kučerová, Petra ; Čermáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Marešová, Vilma (oponent) ; Treml, František (oponent)
SOUHRN V rámci studia doktorského studijního programu byla navržena, vypracována a do klinického provozu laboratorní diagnostiky akutní formy leptospirózy zavedena real-time PCR metoda založená na detekci genu kódujícího povrchový lipoprotein LipL32. Metoda vykázala velmi dobrou analytickou pozitivní i negativní specificitu, kdy se obě hodnoty rovnaly 100 %. Na 230 laboratorních kmenech leptospir ze sbírkových kultur Royal Tropical Institute v Holandsku byla real-time PCR odzkoušena. Mez detekce byla stanovena na 1 - 5 kopií genomu / ml tekutého biologického materiálu. V praxi byla metoda ověřena na biologických materiálech 295 pacientů se suspektní leptospirózou, vyšetřených v období duben 2010 - duben 2013. Devět osob (3,1 %) a jim přináležejících 15 (3,2 %) biologických materiálů bylo vyhodnoceno jako LipL32 pozitivní. Real-time PCR byla použita při analýze vzorků z vnějšího prostředí na přítomnost leptospir. Z celkového počtu 680 vzorků (povrchové vody, čistírny odpadních vod, vlhké substráty) bylo 5 real-time PCR reakcí (0,7 %) vyhodnoceno jako hraniční, ovšem výsledek jejich sekvenační analýzy byl opakovaně "nekultivovatelné bakterie". Všechny vzorky byly vyhodnoceny jako negativní. Z uvedené skutečnosti je zřejmé, že metoda není vhodná pro testování takto náročných materiálů Multilokusová sekvenační...
|
host ::
