|
|
Antimikrobiální peptidy při infekcích gramnegativními bakteriemi
Tocháčková, Petra ; Jílek, Petr (vedoucí práce) ; Andrýs, Ctirad (oponent)
Bc. Petra Tocháčková Antimikrobiální peptidy při infekcích gramnegativními bakteriemi Diplomová práce - abstrakt Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíl práce: Cílem práce je vypracování metodiky a stanovení možné genové aktivace antimikrobiálních peptidů (beta defensinů 1 a 2 - pBD1 a pBD2) v ileu při infekci gnotobiotických selat gramnegativními bakteriemi. Jako zástupce gramnegativních bakterií různé virulence byla zvolena Salmonela enterica serovar Typhimurium, kmen LT2 a její R mutanty (rfaG- a rfaL-). Metody: 1) Návrh systémů pro stanovení prasečích pBD1 a pBD2 (software), 2) Purifikace celkové RNA (komerční kolony), kvantifikace (spektrofotometricky) a odhad její čistoty (poměr A280/A260), 3) Reverzní transkripce (směs náhodných n- merů a oligo d(T)m), 4) Kvantifikace cDNA (polymerázová řetězová reakce v reálném - LNA sondy) a 5) Normalizace genového přepisu pro pBD1 a pBD2 vůči beta aktinu, cyklofilinu A nebo oběma kontrolním genům zároveň. Výsledky: Pro purifikaci celkové RNA a syntézu cDNA jsme použili metody, které snižují riziko kontaminace genomovou DNA a tím i falešně pozitivních výsledků. Navrhli jsme detekční systémy pro stanovení pBD1 a pBD2, jejichž efektivita byla okolo 100% (srovnatelná s efektivitami systémů pro kontrolní geny). Transkripce pBD1...
|
|
|
Antimikrobiální peptidy při infekcích gramnegativními bakteriemi
Tocháčková, Petra ; Jílek, Petr (vedoucí práce) ; Andrýs, Ctirad (oponent)
Bc. Petra Tocháčková Antimikrobiální peptidy při infekcích gramnegativními bakteriemi Diplomová práce - abstrakt Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíl práce: Cílem práce je vypracování metodiky a stanovení možné genové aktivace antimikrobiálních peptidů (beta defensinů 1 a 2 - pBD1 a pBD2) v ileu při infekci gnotobiotických selat gramnegativními bakteriemi. Jako zástupce gramnegativních bakterií různé virulence byla zvolena Salmonela enterica serovar Typhimurium, kmen LT2 a její R mutanty (rfaG- a rfaL-). Metody: 1) Návrh systémů pro stanovení prasečích pBD1 a pBD2 (software), 2) Purifikace celkové RNA (komerční kolony), kvantifikace (spektrofotometricky) a odhad její čistoty (poměr A280/A260), 3) Reverzní transkripce (směs náhodných n- merů a oligo d(T)m), 4) Kvantifikace cDNA (polymerázová řetězová reakce v reálném - LNA sondy) a 5) Normalizace genového přepisu pro pBD1 a pBD2 vůči beta aktinu, cyklofilinu A nebo oběma kontrolním genům zároveň. Výsledky: Pro purifikaci celkové RNA a syntézu cDNA jsme použili metody, které snižují riziko kontaminace genomovou DNA a tím i falešně pozitivních výsledků. Navrhli jsme detekční systémy pro stanovení pBD1 a pBD2, jejichž efektivita byla okolo 100% (srovnatelná s efektivitami systémů pro kontrolní geny). Transkripce pBD1...
|
host ::
RSS.