|
|
Úloha signální dráhy integrity buněčné stěny při morfogenezi kvasinkových kolonií
Reslová, Gabriela ; Schierová, Michaela (vedoucí práce) ; Seydlová, Gabriela (oponent)
U kvasinky Saccharomyces cerevisiae dochází při stresu na buněčné stěně vyvolaném různými vnějšími vlivy (např. chemickými látkami, oxidativním stresem, osmotickými změnami, změnami v pH či teplotním šokem) ke spuštění signální dráhy integrity buněčné stěny (CWI). Cílem mé práce bylo sledovat vliv CWI dráhy na morfogenezi kvasinkových kolonií. Pomocí kmenů s delecí v genech CWI dráhy odvozených od dvou rodičovských kmenů BR-F-Flo11p-GFP a PORT jsem zjistila, že odlišné genetické pozadí ovlivňuje průběh a aktivaci dráhy. U kmenů odvozených od BR-F-Flo11p-GFP bylo zjištěno, že vliv na vzhled kolonií má pouze delece genu MID2, který kóduje povrchový senzor CWI dráhy. U kmenů odvozených od PORT narušení CWI dráhy vedlo k pomalejšímu vývoji kolonií rostoucích na glycerolovém médiu s 0,05mM selenanem. Největší vliv měla delece genu MTL1, který také kóduje povrchový senzor, který je homologní k Mid2. Potvrdila jsem, že kmeny s delecí genů CWI dráhy mají změněnou citlivost k inhibitorům narušujícím integritu buněčné stěny (Calcofluor white, Congo red, zymolyáza). Pomocí zymolyázového testu jsem ověřila propojení CWI dráhy s HOG dráhou. Klíčová slova: Saccharomyces cerevisiae, poškození buněčné stěny, strukturované kolonie, CWI dráha, inhibitorové testy
|
|
|
Metodika přípravy transgenní myši.
Reslová, Gabriela ; Komrsková, Kateřina (vedoucí práce) ; Pěknicová, Jana (oponent)
Souhrn Práce se zabývá problematikou přípravy transgenních myší a srovnáním jednotlivých metodologických postupů z hlediska efektivity a vhodnosti aplikace pro výzkumné účely. Techniky pro přenos genových konstruktů zahrnují preferovanou mikroinjekci DNA do pronuklea oplodněného vajíčka. Jakož i možnosti spojené s využitím spermií, jež přenášejí zabudovaný genový konstrukt do oocytu při in vitro oplození, nebo za využití retrovirových vektorů, kterými jsou oocyty infikovány. Přenos jader somatických buněk do enukleovaných oocytů, využití embryonálních kmenových buněk, které jsou vnášeny do cizích zárodků či transgeneze pomocí liposomů jsou techniky prozatím používané okrajově z důvodu nutnosti hlubšího probádání. V další části seznamuje práce čtenáře s jednotlivými kroky, jež je nutné provést pro úspěšnost transgeneze. Předmětem zájmu je zde ovariální stimulace nutná pro získání dostatečného množství oocytů, ale také jako příprava pro embryo transfer, jakož i kapacitace spermií, která je zásadní pro in vitro oplození. Práce se rovněž zabývá zpětnou analýzou potvrzení pozitivity exprese transgenu pomocí genotypizace potomků a křížením pozitivních transgenů a srovnává výhody a nevýhody získání homozygotní transgenní linie. Klíčová slova: Transgenní myš, perinukleární injekce, ovariální stimulace, kapacitace,...
|
|
|
Úloha signální dráhy integrity buněčné stěny při morfogenezi kvasinkových kolonií
Reslová, Gabriela ; Schierová, Michaela (vedoucí práce) ; Seydlová, Gabriela (oponent)
U kvasinky Saccharomyces cerevisiae dochází při stresu na buněčné stěně vyvolaném různými vnějšími vlivy (např. chemickými látkami, oxidativním stresem, osmotickými změnami, změnami v pH či teplotním šokem) ke spuštění signální dráhy integrity buněčné stěny (CWI). Cílem mé práce bylo sledovat vliv CWI dráhy na morfogenezi kvasinkových kolonií. Pomocí kmenů s delecí v genech CWI dráhy odvozených od dvou rodičovských kmenů BR-F-Flo11p-GFP a PORT jsem zjistila, že odlišné genetické pozadí ovlivňuje průběh a aktivaci dráhy. U kmenů odvozených od BR-F-Flo11p-GFP bylo zjištěno, že vliv na vzhled kolonií má pouze delece genu MID2, který kóduje povrchový senzor CWI dráhy. U kmenů odvozených od PORT narušení CWI dráhy vedlo k pomalejšímu vývoji kolonií rostoucích na glycerolovém médiu s 0,05mM selenanem. Největší vliv měla delece genu MTL1, který také kóduje povrchový senzor, který je homologní k Mid2. Potvrdila jsem, že kmeny s delecí genů CWI dráhy mají změněnou citlivost k inhibitorům narušujícím integritu buněčné stěny (Calcofluor white, Congo red, zymolyáza). Pomocí zymolyázového testu jsem ověřila propojení CWI dráhy s HOG dráhou. Klíčová slova: Saccharomyces cerevisiae, poškození buněčné stěny, strukturované kolonie, CWI dráha, inhibitorové testy
|
|
|
Metodika přípravy transgenní myši.
Reslová, Gabriela ; Komrsková, Kateřina (vedoucí práce) ; Pěknicová, Jana (oponent)
Souhrn Práce se zabývá problematikou přípravy transgenních myší a srovnáním jednotlivých metodologických postupů z hlediska efektivity a vhodnosti aplikace pro výzkumné účely. Techniky pro přenos genových konstruktů zahrnují preferovanou mikroinjekci DNA do pronuklea oplodněného vajíčka. Jakož i možnosti spojené s využitím spermií, jež přenášejí zabudovaný genový konstrukt do oocytu při in vitro oplození, nebo za využití retrovirových vektorů, kterými jsou oocyty infikovány. Přenos jader somatických buněk do enukleovaných oocytů, využití embryonálních kmenových buněk, které jsou vnášeny do cizích zárodků či transgeneze pomocí liposomů jsou techniky prozatím používané okrajově z důvodu nutnosti hlubšího probádání. V další části seznamuje práce čtenáře s jednotlivými kroky, jež je nutné provést pro úspěšnost transgeneze. Předmětem zájmu je zde ovariální stimulace nutná pro získání dostatečného množství oocytů, ale také jako příprava pro embryo transfer, jakož i kapacitace spermií, která je zásadní pro in vitro oplození. Práce se rovněž zabývá zpětnou analýzou potvrzení pozitivity exprese transgenu pomocí genotypizace potomků a křížením pozitivních transgenů a srovnává výhody a nevýhody získání homozygotní transgenní linie. Klíčová slova: Transgenní myš, perinukleární injekce, ovariální stimulace, kapacitace,...
|
host ::
RSS.